检测hTRIM41基因突变位点的引物、方法、应用及试剂盒

本发明涉及生物医学检测的，具体涉及一种检测htrim41基因突变位点的引物、方法、应用及试剂盒。

背景技术：

1、在生殖系统中，trim41能有效维持减数分裂进程正确进行，具体表现为trim41可有效防止联会复合体蛋白sycp3的过载，且这种现象特异性出现在性染色体上。trim41的核转运与其蛋白n末端的变体共有序列相关，而非传统的核定位信号介导。trim41也参与修饰dna和rna切割复合体的组成成分拓扑异构酶3b(top3b)，进而调节修复途径。trim41(rinck)可通过单泛素化(monoubiquitination)激活环鸟苷-腺苷合成酶(cyclic gmp-ampsynthase,cgas)，后者通过识别胞质中的dna来启动免疫反应。trim41属于e3连接酶，具有ring结构域，其降解可能存在自噬依赖的方式。trim41可以通过调控蛋白激酶c(proteinkinase c，pkc)的表达量进而调节信号通路及通路相关的疾病状态。因此，检测不孕不育患者体内的致病基因对诊断特发性(trim41基因异常)不孕不育及靶向治疗具有重要的意义。

2、本试剂盒所涉检测基因补充了不孕不育检测靶点，并明确了特定基因发生突变的潜在位点，同时提供了高特异性检测引物以降低检测脱靶效率，且相对于全基因组外显子检测技术周期短，费用低廉。

技术实现思路

1、本发明的目的之一在于提供一种检测htrim41基因突变位点的引物。

2、本发明的目的之二在于提供一种检测htrim41基因突变位点的引物的应用。

3、本发明的目的之三在于提供一种检测htrim41基因突变位点的方法。

4、本发明的目的之四在于提供一种检测htrim41基因突变位点的试剂盒。

5、本发明实现目的之一所采用的方案是：一种检测htrim41基因突变位点的引物，包括以下引物对中的至少一种，

6、扩增htrim41基因nm_033549:exon6:c.1526a>g:p.h509r和nm_033549:exon6:c.1680g>c:p.q560h突变位点的引物，其碱基序列为：

7、f1:gggcttccgctccggccggcactactggga；

8、r1:gctcgcccaggaaggcagccgagaaggtgt；

9、扩增htrim41基因nm_201627:exon8:c.1535g>a:p.r512q突变位点的引物，其碱基序列为：

10、f2：taaagaaccctcctggcctccagctcagcct；

11、r2：tggttgagtgctggaaaagggaagggggaaga。

12、优选地，还包括测序引物，其碱基序列为：

13、检测htrim41基因nm_033549:exon6:c.1526a>g:p.h509r和nm_033549:exon6:c.1680g>c:p.q560h突变位点的测序引物，其碱基序列为：

14、f1:gggcttccgctccggccggcactactggga；

15、r1:gctcgcccaggaaggcagccgagaaggtgt；

16、检测htrim41基因nm_201627:exon8:c.1535g>a:p.r512q突变位点的测序引物，其碱基序列为：

17、f2：taaagaaccctcctggcctccagctcagcct；

18、r2：tggttgagtgctggaaaagggaagggggaaga。

19、本发明实现目的之二所采用的方案是：一种所述的检测htrim41基因突变位点的引物的应用，将所述引物应用于制备不孕不育诊断产品。

20、本发明实现目的之三所采用的方案是：一种检测htrim41基因突变位点的方法，包括以下步骤：

21、(1)抽提血液中的基因组dna；

22、(2)用pcr扩增步骤(1)中提取的dna；扩增htrim41基因中nm_033549:exon6:c.1526a>g:p.h509r、nm_033549:exon6:c.1680g>c:p.q560h、nm_201627:exon8:c.1535g>a:p.r512q突变点序列的引物；

23、扩增htrim41基因nm_033549:exon6:c.1526a>g:p.h509r和nm_033549:exon6:c.1680g>c:p.q560h突变位点的引物，其碱基序列为：

24、f1:gggcttccgctccggccggcactactggga；

25、r1:gctcgcccaggaaggcagccgagaaggtgt；

26、扩增htrim41基因nm_201627:exon8:c.1535g>a:p.r512q突变位点的引物，其碱基序列为：

27、f2：taaagaaccctcctggcctccagctcagcct；

28、r2：tggttgagtgctggaaaagggaagggggaaga；

29、(3)对步骤(2)红的扩增产物进行测序，检测htrim41基因中nm_033549:exon6:c.1526a>g:p.h509r、nm_033549:exon6:c.1680g>c:p.q560h、nm_201627:exon8:c.1535g>a:p.r512q突变点序列的测序引物的碱基序列为：

30、检测htrim41基因nm_033549:exon6:c.1526a>g:p.h509r和nm_033549:exon6:c.1680g>c:p.q560h突变位点的测序引物，其碱基序列为：

31、f1:gggcttccgctccggccggcactactggga；

32、r1:gctcgcccaggaaggcagccgagaaggtgt；

33、检测htrim41基因nm_201627:exon8:c.1535g>a:p.r512q突变位点的测序引物，其碱基序列为：

34、f2：taaagaaccctcctggcctccagctcagcct；

35、r2：tggttgagtgctggaaaagggaagggggaaga；

36、(4)对测序结果进行判断，确定htrim41基因位点是否发生突变。

37、本发明实现目的之四所采用的方案是：一种检测htrim41基因突变位点的试剂盒，包括：

38、(1)血液dna抽提试剂；

39、(2)pcr扩增反应体系试剂；

40、(3)测序体系试剂；

41、其中，pcr扩增反应体系试剂包括：

42、扩增htrim41基因nm_033549:exon6:c.1526a>g:p.h509r和nm_033549:exon6:c.1680g>c:p.q560h突变位点的引物，其碱基序列为：

43、f1:gggcttccgctccggccggcactactggga；

44、r1:gctcgcccaggaaggcagccgagaaggtgt；

45、扩增htrim41基因nm_201627:exon8:c.1535g>a:p.r512q突变位点的引物，其碱基序列为：

46、f2：taaagaaccctcctggcctccagctcagcct；

47、r2：tggttgagtgctggaaaagggaagggggaaga；

48、测序体系试剂包括：

49、检测htrim41基因nm_033549:exon6:c.1526a>g:p.h509r和nm_033549:exon6:c.1680g>c:p.q560h突变位点的测序引物，其碱基序列为：

50、f1:gggcttccgctccggccggcactactggga；

51、r1:gctcgcccaggaaggcagccgagaaggtgt；

52、检测htrim41基因nm_201627:exon8:c.1535g>a:p.r512q突变位点的测序引物，其碱基序列为：

53、f2：taaagaaccctcctggcctccagctcagcct；

54、r2：tggttgagtgctggaaaagggaagggggaaga。

55、本发明根据htrim41基因已知(1)nm_033549:exon6:c.1526a>g:p.h509r、(2)nm_201627:exon8:c.1535g>a:p.r512q、(3)nm_033549:exon6:c.1680g>c:p.q560h突变位点，设计多组引物，每一组引物均跨越对应的突变位点。在存在dna模板、引物、dntps、适当缓冲液(mg2+)的反应混合物中，在热稳定dna聚合酶的催化下，对每一对引物所界定的核酸片段进行扩增，这种扩增是以基因组模板dna与引物之间的变性、退火、延伸三步反应为一个周期，循环进行，使目标dna片段得以扩增。

56、本发明具有以下优点和有益效果：

57、本发明设计了不同的引物对，将提取的基因组模板dna扩增后进行琼脂糖凝胶电泳、回收和测序从而达到鉴定的目的。本发明能够鉴定包含(1)

58、nm_033549:exon6:c.1526a>g:p.h509r、(2)nm_201627:exon8:c.1535g>a:p.r512q、(3)

59、nm_033549:exon6:c.1680g>c:p.q560h突变位点在内的突变是否存在。本发明仅需要引物设计、提取dna、扩增与跑胶，能够在1天内完成所有试验，工作量小，耗时短，易操作成本极低,且普通分子实验室均可操作。