噬菌体靶向蛋白分子及其在鉴定O111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌中的应用

本发明涉及生物领域。具体地，本发明涉及噬菌体靶向蛋白分子及其在鉴定o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌中的应用。

背景技术：

1、产志贺毒素大肠杆菌(shigatoxin-producingescherichiacoli，stec)，又称产vero细胞毒素大肠杆菌(vero cytotoxin-producinge.coli,vtec)，是一类能引起人类致命性疾病的食物源性的病原菌。患者可出现腹泻、出血性肠炎和溶血性尿毒症(haemolyticuraemic syndrome，hus)。在我国，血清型的stec o111在人类、动物流行性高，严重威胁人类的生命健康。

2、目前，国内尚未有关利用噬菌体靶向蛋白分子鉴定stec o111的研究。

技术实现思路

1、本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题。为此，本发明提出了一种噬菌体蛋白，其可以特异性识别o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌，能够用于o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌鉴定和富集，具有简单、快捷和准确等优点，应用价值高。

2、在本发明的一个方面，本发明提出了一种噬菌体蛋白。根据本发明的实施例，所述噬菌体蛋白的氨基酸序列如seq id no：1所示。由此，本发明具有如seq id no：1所示氨基酸序列的噬菌体蛋白（在本文中，亦称为“噬菌体靶向蛋白分子”）可以特异性识别o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌，快速且准确鉴定和富集o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌，有助于致病性大肠杆菌研究、疾病诊断和治疗，对防御并控制致病性大肠杆菌传播有重要意义。在本文中，将该噬菌体蛋白命名为“噬菌体蛋白ppo111”，编码噬菌体蛋白ppo111的核酸分子具有如seq id no：2所示的核苷酸序列。

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4、cgtatcgtgaacctagcgaacgctgttgatgaccgtgacgctgttccgttaggtcaacttaagaccatgaaccagagttcttggcaagctcgtaatgagtccttacagttccgcaatgaagcagaggctttcaagaaccaagcggagggctttaagaacgagtccagcactaacgctgctaatacctataagtggcgtaatgaggctgaggggttccgaaatgaggccgaacagttcaagaacactgctacacaacaggctaccgctgctggtaactctgcggctgctgcccatcaatccgaggtgaactctgcgaactcagctactgcttccgctaaatctgctactttggcagaacagcaagcagaccgtgctgagagtgaggcagataaacttggtaacatgaacgattttgctggagcaatcgactctgtggacccagttagtcacaacgtcaccatgaaaggtgccatgatggttagcgatgcaatccaagcgcgtaacccttctggttataattttgtctccggcgacctagacgttggtagggatcttgcagttaaaggtcgagccacccgaaacggtaacactatggtaaccaaagaagacctgaaaaagtctgagtttgcgtggaactccagtttgatattccccggtgaatcagacggccttaatgttttccgaaagaatggtgagaacccattaggtttaaaatataatggtgctatagaggttagaccaatggctggttgggacacagcgaacaatctaggtcgaagtcctatgataacgttccactggcccggtaagattggtgaagcgctattcatgacggagtacggagaattagcatggggagaccctaatgggacgtggaacagattggctaatacgcatcaaatgtcaggcggcaactcactacgtggttggagagttgaccctgcaaacccttccgtggcagaagtgtggggttatgcggagcaggttccgcctaacactcaggtaaacataaacataattccagatactggtttcccttatacaccggtaagtggaggagtgatcttaacgcaggtgtcaacgtctactcgcgcccagtatcaagaggccaacactgttacgtggtgggtacagcgcggtagtgtatttgccatctcctctggctcaacagtccgagacaacttcttctggtttgctaaaattgatttccaatattaa（seq id no：2）

5、在本发明的又一方面，本发明提出了前面所述噬菌体蛋白在非诊断目的鉴定和/或富集o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌中的应用。由此，本发明的噬菌体蛋白可用于不同抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌的生物学研究。

6、在本发明的又一方面，本发明提出了一种非诊断目的鉴定o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：使前面所述噬菌体蛋白与待测微生物共培养；基于所述噬菌体蛋白与所述待测微生物是否结合，确定所述待测微生物是否为o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌。如前所述，本发明的噬菌体蛋白可以特异性识别o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌，有助于鉴定o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌。

7、根据本发明的实施例，所述噬菌体蛋白与待测微生物结合，则确定所述待测微生物为o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌；所述噬菌体蛋白不与待测微生物结合，则确定所述待测微生物不为o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌；所述噬菌体蛋白上连接有标记分子，通过检测标记分子以便确定所述噬菌体蛋白与所述待测微生物是否结合。

8、根据本发明的实施例，所述标记分子包括下列至少之一：gfp蛋白、mcherry蛋白、fitc、tritc、nhs-荧光素和nhs-罗丹明。

9、根据本发明的实施例，所述共培养的反应ph值为8-9，温度为4~37℃。由此，噬菌体靶向蛋白分子具有较高的生物活性，可以更加快速且特异性地结合o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌。

10、在本发明的又一方面，本发明提出了前面所述噬菌体蛋白在制备试剂盒中的用途。根据本发明的实施例，所述试剂盒用于诊断因感染o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌所引发的疾病和/或症状。

11、根据本发明的实施例，所述疾病和/或症状选自下列至少一种：腹泻、结肠炎和尿毒症。

12、根据本发明的实施例，所述试剂盒中含有编码前面所述噬菌体蛋白的核酸分子和/或携带所述核酸分子的表达载体。

13、在本发明的又一方面，本发明提出了一种富集o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将含有o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌的待处理样品与前面所述噬菌体蛋白共培养，所述噬菌体蛋白上连接有磁珠探针；通过磁力吸附所述磁珠探针，以便从所述待处理样品中富集出o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌。如前所述，本发明的噬菌体蛋白可以特异性识别o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌，有助于富集o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌。

14、根据本发明的实施例，所述共培养的反应ph值为8-9，温度为4~37℃。由此，噬菌体靶向蛋白分子具有较高的生物活性，可以更加快速且特异性地结合o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌。

15、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。