一种修复体外待修复移植肝脏的系统的制作方法

本发明属于医疗器械，尤其涉及一种肝脏修复领域系统，更具体的为一种修复体外待修复移植肝脏的系统。

背景技术：

1、目前针对终末期肝病及机型肝衰竭患者，肝移植(lt)仍然是最终的治疗方法。虽然已故捐献者的数量有所增加,但肝移植仍然受到合适捐献者肝脏数量的严重限制。而且目前全球的肝脏利用率仍然不理想，美国的器官丢弃率总体为20％至40％，此比例的废弃率对应稀缺的肝源及等待救治的患者来说无疑是巨大的损伤与浪费。另外低温和缺氧条件下的器官储存会导致肝脏质量逐渐下降,这会成倍地增加终末期肝病模型评分最高的患者使用ecd肝脏的风险。

2、如果能将上述丢弃及肝脏治疗下降的肝源复活，将会极大的造福临床患者；目前通过常温机械灌流(nmp-l)对边缘或扩大标准供肝进行预处理，可以从废弃供肝池中挽救供肝；但传统的灌流液挽救供肝的效果并不明显，本发明提供一种更加有效的提高供肝存活率的方法及系统。

技术实现思路

1、针对传统的灌流液灌流器官肝脏复活率低的问题，本发明提供了一种包含新的灌流液的灌流系统，以最大程度的解决提出肝源不足及肝源质量下降的问题。现有技术中多是将含有c3a细胞的生物反应器应用于体外待修复移植肝脏支持系统，如专利202023087319.2一种在体外使用的肝脏支持系统；保证体外待修复移植肝脏支持系统安全运行的关键环节是如何对含有c3a细胞的生物反应器的培养，为保证生物反应器成长为合格的生物反应器，对含有c3a细胞的生物反应器的培养过程耗费了大量的培养液，培养液流经生物反应器之后并没有充分挖掘其潜在的价值，容易造成资源的浪费，因此想到将流经生物反应器的条件培养液用于体外待修复移植肝脏修复来解决肝源不足的问题。另外因为体外待修复移植肝脏支持系统的原因，本领域惯用的技术手段是将含有c3a细胞的生物反应器连接到体内系统中，且因为系统本身的复杂性，现有技术还没有公开含有c3a细胞的生物反应器的流出的条件培养液的体外应用思路，本发明就围绕上述技术进行描述，具体技术方案如下：

2、一种修复体外待修复移植肝脏的系统，其包括，

3、灌流动力装置，用于为灌流液提供灌流动力，且在体外连接肝脏；

4、灌流管路，用于连通体外待修复移植肝脏及灌流动力装置；

5、还包括，

6、灌流液，其内有培养含有c3a细胞的生物反应器后流出的条件培养液；

7、灌流管路分别连通肝脏的门静脉，胆管与肝动脉；

8、将灌流动力装置与灌流管路及体外待修复移植肝脏连接，后将所述灌流液引入对体外待修复移植肝脏进行灌流修复。上述系统不仅仅限于修复待移植肝脏，还可用于体外修复心脏。

9、通过上述系统，可以在对含有c3a细胞的生物反应器培养阶段进行条件培养液的收集，收集后进行体外待修复移植肝脏灌流修复，通过此种方式可以极大的提高条件培养液的利用率，在修复肝脏过程中可以保证灌流液的充足，有效避免体内灌流的风险，且体外灌流能够提前的完成肝脏情况的了解，在保证肝脏安全的前提下进行后续的肝脏移植工作。

10、进一步，用于培养含有c3a细胞的生物反应器后流出的条件培养液为在c3a细胞中空纤维生物反应器的中空纤维内流出的条件培养液，c3a细胞设置在多根中空纤维之间；物质通过中空纤维侧壁进行传输，中空纤维之间的c3a细胞产生的物质进入到中空纤维的中空孔道内，并随中空纤维内的中空孔道流出，形成条件培养液。

11、进一步，当确定用c3a细胞中空纤维生物反应器的中空纤维内流出的条件培养液时，就需要确定收集何种状态下的条件培养液，以保证获取到的条件培养液成分具备一定的匀质性及统一性，保证后续肝脏修复的统一及有效性，设定如下收集条件：当生物反应器达标后，收集灌入到c3a细胞中空纤维生物反应器后流出的条件培养液用于体外修复待移植肝脏的灌流液的制备。此种方式的条件培养液直接用于体外待修复移植肝脏修复灌流。

12、进一步，通过监测2-4种与生物反应器达标相关的可监测因素确定开始收集条件培养液的初始收集条件；通过此种方式可以极大的减少生物反应器达标条件的难度确定。

13、进一步，通过监测每毫升条件培养液中的白蛋白及铁蛋白的含量达标为标准确定生物反应器达标与否，通过此种方式极大的减少了确定生物反应器达标的难度，进而能够有效的获取到有效的条件培养液；保证后续肝脏修复的安全性与一致性。

14、进一步，当条件培养液中白蛋白含量大于等于50ug/ml，转铁蛋白含量大于等于30ug/ml时，c3a细胞中空纤维生物反应器达标，开始收集条件培养液用于体外修复待移植肝脏；通过此种方式可以保证获得的条件培养液中的各种因子的分泌量到达稳定值；有效避免因条件培养液成分不同于造成的修复误差。

15、进一步，当条件培养液中白蛋白含量在50ug/ml-80ug/ml，转铁蛋白含量范围在30ug/ml-50ug/ml时，收集的条件培养液。因为条件培养基里检测到的白蛋白含量在50ug/ml-80ug/ml时，生物反应器性能稳定，产品合格，其他因子含量也合格。

16、进一步，灌流液就为当产出的条件培养液中白蛋白含量大于等于50ug/ml，转铁蛋白含量大于等于30ug/ml时，通过c3a细胞中空纤维生物反应器收集的条件培养液，此种方式可以减少灌流液的制备过程，收集或存储到有效的条件培养液后直接可以使用。

17、进一步，体外灌流时间以器官达到移植要求为最低标准，具体设置6小时灌流时间。

18、进一步，肝脏为边缘或扩展标准人类供体肝脏；

19、本发明公开了一种灌流液，用于体外待修复移植肝脏修复，其为c3a细胞中空纤维生物反应器收集的条件培养液，且收集条件为当生物反应器中流出的条件培养液中白蛋白含量大于等于50ug/ml，转铁蛋白含量大于等于30ug/ml。

20、本发明公开了一种灌流液的制备方法，

21、第一，将c3a细胞中空纤维生物反应器连接到培养系统中，

22、第二，向培养系统内灌入生物反应器的培养液体，生物反应器为c3a细胞中空纤维生物反应器，培养液体通过c3a细胞中空纤维生物反应器的中空管，经过与中空纤维间细胞的物质交换后，经中空管流出；

23、第三，待监测到生物反应器达标后收集到的条件培养液就为灌流液。

24、进一步，培养系统中包含用于监测白蛋白及铁蛋白含量的监测结构；

25、进一步，监测结构用于监测白蛋白与转铁蛋白的含量；

26、进一步，监测到条件培养液中白蛋白含量大于等于50ug/ml，转铁蛋白含量大于等于30ug/ml时，开始收集条件培养液用于灌流液。

27、本发明的有益效果为：

28、1)本发明找寻到一种利用c3a生物反应器培养获取到的条件培养液作为灌流液的技术方案，且此灌流液可结合现有的xvivo liver assist中的装置加管路实现体外待修复移植肝脏的修复，极大的提高肝源的安全性，提高肝源的存活率，最大程度的减小肝源丢弃的可能。

29、2)本发明探寻到一种可以有效应用于肝源体外修复的灌流液的获取条件，通过白蛋白与转铁蛋白的与c3a细胞中空纤维生物反应器达标的对应关系，进而得到达标的中空生物反应器流出的条件培养液可用于灌流液的技术方案，可以快速有效的获得安全有效的灌流液。

30、3)本发明的灌流的制备方法可以保证产生充足的灌流液，减少浓缩灌流液等的相关程序，制备更加简单方便。