一种粪便样本保存液及其应用的制作方法

本发明涉及生物，尤其涉及一种粪便样本保存液及其应用。

背景技术：

1、粪便样本是一类具有挑战性的样本，其成分复杂，且受到饮食习惯、身体状态的影响很大。粪便离体后，由于环境的巨大变化，其中严格的厌氧微生物不再增殖，甚至死亡，兼性厌氧微生物仍能增殖生长，其他生物物质如蛋白质、脂肪、多糖等也在各种酶类的影响下逐渐降解。另外，一些高糖高脂饮食习惯的人群，粪便样本中的脂类含量很高，这样的样本会更加影响粪便的保存。此外，粪便样本中往往含有亚铁血红素、胆汁酸盐等等，这些物质的残留也极大影响了粪便的保存，还会抑制下游pcr和二代测序反应。

2、因此，采集后的粪便样本应当在短时间内合理的保存，保证其中的菌群结构与生物物质的相对稳定。目前，粪便样本保存方法主要有三种，分别是冷冻保存法、冷藏保存法、保存液保存法。冷冻保存法，即粪便采集后存放于-20℃或-80℃的温度中，在-80℃的温度下冷冻被认为是保存粪便的最佳方法(金标准)。该方法将采集后的粪便冻存在-80℃温度中，细菌在低温状态下代谢速率会降低，从而使粪便中细菌的构成在一段时间内得以维持，达到稳定其微生物构成的目的。粪便采集后立即(运输时间不超过30min)放入-80℃冻存可维持粪便菌群的原始结构与组成长达5年。而在实际研究中，不容易做到立即将收集的新鲜标本进行速冻，多数样本会在室温或其他环境下暴露一段时间。如果保存不当，细菌核酸降解会造成标本中菌群种类和多样性下降，严重影响最终的实验结果。冷藏保存法主要是利用在低温条件下(2℃-8℃)可以降低细胞内核酸内切酶活性以避免核酸被快速降解的原理来保存粪便。在冷藏保存条件下，储存24小时不会显著改变粪便微生物群落结构。在临床实验中，由于实验人员不能立即把待分析的粪便样本放入-80℃冰箱保存，特别是将样本转运回实验室的过程中，使用2-8℃冷藏箱或是0℃冰袋保存样本是一个可用的办法。这大大提高了临床上保存病人粪便样本的灵活性。一旦到达实验室，建议马上将样本转入-80℃冰箱长期保存。保存液保存法利用保存液里的特殊组分防止粪便样本内的各组分发生降解，被广泛用于常温条件下的样品采集、储存和运输。利用保存液保存粪便样本，可以不同程度的抑制核酸酶的影响，减少核酸的降解，也能够高效、长期固定粪便微生物的丰度、保持粪便dna分子的完整性。使用保存液而不是冷冻粪便收集粪便样本对于粪便样本检测分析来说是相对可重复和稳定的。保存液可提供高质量的dna用于后续pcr、qpcr、ngs、核酸质谱分析和芯片分析等基因检测及分析实验。超低温冷冻保存需要冷冻设备，同时长途运输也受到一定限制。因此，开发了一种可以在常温条件下使用并且有效保持粪便样本中肠道微生物与生物物质稳定的保存液是非常有必要的。

技术实现思路

1、基于上述背景技术，本发明所要解决的技术问题在于提供一种粪便样本保存液、其制备方法及用途。为了实现本发明的发明目的，拟采用如下技术方案：

2、本发明一方面涉及一种粪便样本保存液，每1l细胞保存液由含有如下成分：

3、 名称 质量/体积 异硫氰酸胍 50g-100g tween 80 50ml-150ml peg-8000 20g-60g nacl 20g-60g 无水乙醇 50ml-150ml

4、本发明的保存液常温(37±2)℃条件下可快速释放样本核酸，并可稳定保存核酸至少30天，大大延长了粪便样本保存的期限，更有利于样本的运输与后期的相关检测，具有成本低廉，使用方便的优点。

5、在本发明的一个优选实施方式中，每1l细胞保存液由含有如下成分：

6、 名称 质量/体积 异硫氰酸胍 55-65g tween 80 90-110ml peg-8000 35-45g nacl 35-45g 无水乙醇 90-110ml

7、。

8、特别优选地，每1l细胞保存液由含有如下成分：

9、 名称 质量/体积 异硫氰酸胍 60g tween 80 100ml peg-8000 40g nacl 40g 无水乙醇 100ml

10、。

11、本发明另一方面还涉及上述保存液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

12、组分充分溶解于水后采用稀盐酸调节ph值至7.0-8.5，定容至1000ml，再采用0.22μm滤膜过滤除菌。

13、本发明另一方面还涉及一种粪便样本保存方法，其特征在于：将粪便样本与上述保存液的质量体积比为1g：3-5ml。

14、本发明另一方面还涉及一种粪便样本保存液的应用，所述便样本保存液用于提高粪便样本中幽门螺杆菌核酸样本的稳定性。

15、有益效果

16、本发明采用特殊配方制备的粪便样本保存液，有别于传统的粪便样本保存液，传统的粪便样本保存液在常温(15℃-30℃)条件下通常只能保存7-10天，本发明的保存液常温(37±2)℃条件下可快速释放样本核酸，并可稳定保存核酸至少30天，大大延长了粪便样本保存的期限，更有利于样本的运输与后期的相关检测，具有成本低廉，使用方便的优点。