一种发酵酒产酸菌的鉴别培养基及产酸菌检测方法和应用与流程

本发明涉及微生物检测，具体涉及一种发酵酒产酸菌的鉴别培养基及产酸菌检测方法和应用。

背景技术：

1、传统酿造酒生产陈化过程中，会面临发酵酒升酸的质量波动，但是只有发酵酒酸败微生物大量繁殖并产生代谢产物后才可能检测到总酸、ph值的变化，其中部分微生物在常规培养基中难以培养，常规方法无法快速识别。

2、在微生物检测培养基和方法的报道中，中国发明专利文献cn201610831433.0《复合微生态制剂中乳酸菌检测用培养基及检测方法》公开了一种复合微生态制剂中乳酸菌检测用培养基及检测方法，其培养基按质量份数计包括如下组分：胰蛋白胨10-15、牛肉浸粉5-10、酵母浸粉5-8、葡萄糖5-20、硫酸镁0.1-0.3、乙酸钠3-5、柠檬酸铵10-20、硫酸锰0.05-0.1、吐温-80 1-5、琼脂粉15-20、蒸馏水1000，ph5.0-5.8，通过控制ph抑制芽孢杆菌，来突出乳酸菌生长。但是，在已经产酸的发酵酒培养出的微生物镜检时发现部分产酸菌为芽孢杆菌，该培养基及检测方法却无法识别，该专利并不适用于发酵酒领域。中国发明专利文献cn201811113012.x《一种料酒中产气菌的培养基和检测方法》公开了一种料酒中产气菌的培养基和检测方法，具体将待测料酒样品稀释，然后接种入含有培养基的发酵管中，在30℃±1℃条件下培养48±2h后，根据发酵管的产气与否来检测产气菌；培养基由以下重量份的原料组成：蔗糖10-30份，酵母膏3-6份，蛋白胨4-10份，氯化钠3-10份，黄酒2-8份，吐温-801-2份，巯基乙酸钠0.05-1份，七水硫酸镁0.2-0.6份，甲硫氨酸0.01～0.1份，半胱氨酸0.01-0.2份，蒸馏水1000份。然而，该专利仅仅对料酒中产气菌有一定效果，并不适合发酵酒陈酿过程中产酸微生物的检测。中国发明专利文献cn202010585358.0《一种用于检测食品中难培养型乳酸菌的培养基以及检测方法》公开了一种用于检测食品中难培养型乳酸菌的培养基以及检测方法，所述培养基的配方为：糖类物质10-40重量份，蛋白胨5-15重量份，酵母膏粉2-6重量份，牛肉膏粉5-15重量份，磷酸氢二钾1-3重量份，柠檬酸三铵1-3重量份，乙酸钠2.5-7.5重量份，硫酸镁0.1-0.3重量份，硫酸锰0.02-0.06重量份，吐温-80 0.5-1.5重量份，可溶性淀粉0.5-1.5重量份，产酸代谢促进因子0.2-2重量份(七水合硫酸亚铁和/或六水合氯化镍)，未受污染的样品过滤清液100-500重量份，补加蒸馏水至1000重量份，ph值调节为4-5.5；但是，该专利只能够确定腐败乳酸菌是否存在，即仅能定性判断，无法对腐败乳酸菌含量多少进行检测；且无法针对性地对产酸菌进行检测。

3、可见，目前暂无关于发酵酒陈酿过程产酸菌的有效鉴别方法。为确保储存发酵酒陈酿过程的品质，亟需通过优化选择性培养基来实现发酵酒中产酸菌的鉴定及其含量检测，以给发酵酒的产酸菌污染带来一种新的检测方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种发酵酒产酸菌的鉴别培养基及产酸菌检测方法和应用。

2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

3、第一方面，本发明提供了一种发酵酒产酸菌的鉴别培养基，按重量计，每1000ml所述培养基包括以下组分：

4、所述发酵酒100ml-400ml，蛋白胨8.0g-12.0g，牛肉浸粉8.0g-12.0g，酵母浸粉1.5g-2.5g，磷酸氢二钾1.5g-2.5g，乙酸钠4.5g-5.5g，枸橼酸三铵1.5g-2.5g，硫酸镁0.1g-0.3g，硫酸锰0.03g-0.08g，吐温-80 0.5g-1.5g，葡萄糖15.0g-25.0g，琼脂20.0g-30.0g，复合氨基酸0.1g-1g，核苷酸0.1g-0.5g，碳酸钙5g-10g和无水乙醇100ml-200ml。

5、本发明的鉴别培养基能为发酵酒陈酿过程中产生的难培养的产酸菌提供适宜的培养环境，更有利于产酸微生物的繁殖生长，在同等程度下产酸菌的检测效率能够提高1-2倍。同时，本发明的鉴别培养基通过添加碳酸钙，能从腐败乳酸菌中分辨识别出产酸类的乳酸菌，排除其他类型乳酸菌，从而有利于提升后续检测结果的准确性。

6、作为本发明所述的鉴别培养基的优选实施方式，按重量计，每1000ml所述培养基包括以下组分：

7、所述发酵酒100ml-400ml，蛋白胨10.0g，牛肉浸粉10.0g，酵母浸粉2.0g，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，枸橼酸三铵2.0g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，吐温-801.0g，葡萄糖20.0g，琼脂25.0g，复合氨基酸0.1g-1g，核苷酸0.1g-0.5g，碳酸钙5g-10g和无水乙醇100ml-200ml。

8、作为本发明所述的鉴别培养基的优选实施方式，按重量计，每1000ml所述培养基包括以下组分：

9、所述发酵酒100ml-300ml，蛋白胨10.0g，牛肉浸粉10.0g，酵母浸粉2.0g，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，枸橼酸三铵2.0g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，吐温-801.0g，葡萄糖20.0g，琼脂25.0g，复合氨基酸0.5g-1g，核苷酸0.3g-0.5g，碳酸钙5g-8g和无水乙醇100ml-150ml。

10、作为本发明所述的鉴别培养基的优选实施方式，所述发酵酒为后熟期发酵酒。后熟期发酵酒即为陈酿过程中的发酵酒。

11、第二方面，本发明提供了一种所述鉴别培养基的制备方法，包括以下步骤：

12、取所述组分加水混合均匀，定容，煮沸溶解，调节ph至5.5-6.5，高压蒸汽灭菌，冷却，即成。

13、第三方面，本发明提供了一种发酵酒陈酿过程中产酸菌的检测方法，包括以下步骤：

14、s1：将所述发酵酒样品在无菌环境下，倍数稀释；

15、s2：取稀释样品与46℃-50℃的所述鉴别培养基混合，培养；

16、s3：待培养基上出现透明圈，计数所述透明光圈，计算所述发酵酒样品中产酸菌的数量。

17、本发明检测发酵酒陈酿过程中产酸菌的方法能够将陈酿过程发酵酒中产酸菌从腐败乳酸菌中分辨识别出来，并确认产酸菌的数量。同时，可快速识别培养的微生物是否为产酸菌。

18、作为本发明所述的方法的优选实施方式，在步骤s2中，所述稀释样品与所述培养基的体积比为1：(20-25)。

19、作为本发明所述的方法的优选实施方式，在步骤s2中，所述培养的条件为29℃-31℃厌氧培养。

20、作为本发明所述的方法的优选实施方式，在步骤s2中，所述培养的时间为1-5天。

21、第四方面，本发明将所述鉴别培养基、所述检测方法在发酵酒陈酿过程中产酸菌的监控或检测中应用。

22、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

23、相较于传统乳酸菌培养基，本发明的鉴别培养基所提供的培养环境更有利于微生物繁殖生长，在同等程度下，产酸菌的检测效率能够提高1-2倍。为发酵酒陈化过程中产生的难培养的产酸菌提供适宜的培养环境。本发明能够在发酵酒后熟陈酿过程中及时准确地监控到后熟陈酿过程中的发酵酒的卫生质量情况，为酒体在风味、体态及指标的变化提供判断依据。