多肽的制备及其应用的制作方法

本发明涉及一系列多肽的制备及其应用，具体涉及式(ii)所示序列的多肽。

背景技术：

1、非酒精性脂肪肝(nafld)的全球发病率高达25％，其中非酒精性脂肪性肝炎(nash)的全球发病率约为3％-8％。部分nash病人将进一步进展为肝硬化及肝癌，是目前终末期肝病和肝移植的主要原因之一。nash发病机制复杂，目前并没有fda批准的药物用于治疗该疾病。多项临床前研究发现，葡萄糖依赖性促胰岛素样肽(gip)/胰高血糖素样肽-1(glp-1)双重激动剂可用于nash治疗。礼来在研药物glp-1/gip双重激动剂tirzepatide临床研究结果显示其可改善nash相关的转氨酶等相关标记物，展现了治疗nash的潜力。

2、glp-1激动剂可以通过多途径协同作用治疗nash。如：glp-1激动剂可降低循环中的肿瘤坏死因子(tnf)-α、白细胞介素il-1β，il-6，cd163及hscrp水平，达到抑制炎症的药效。gip是由小肠的神经内分泌k细胞分泌的多肽，可在glp-1激动剂治疗基础上进一步缓解肝脏脂肪合成，因此glp-1/gip双重激动剂对nash治疗具有协同效应。

技术实现思路

1、本发明提供了式(ii)所示序列的多肽，

2、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk afvkw liaggpssga ppps0

3、(ii)

4、其具有以下修饰：

5、1)i和i+3位置的赖氨酸侧链上的氨基或j和j+4位置的赖氨酸侧链上的氨基与相连，其中i为17(即：当i为17时，17位的异亮氨酸先替换为赖氨酸，然后其侧链上的氨基再与20位的赖氨酸侧链上的氨基与相连)，或其中j为20；且

6、2)式(ii)所示系列的多肽另外的0-2个氨基酸被替换；

7、其中，

8、aib的结构为

9、s0选自

10、x选自其中，“*”表示与x1相连的位置；

11、x1选自单键、-c(＝o)-、-o-c(＝o)-和-n(r1)-c(＝o)-；

12、r1选自h和c1-3烷基；

13、x2选自

14、

15、m选自2、3和4；

16、n选自15、16、17、18和19；

17、p选自1和2。

18、本发明提供了式(p)所示序列的多肽，

19、yaibegt ftsdy siaibld kkaqk afvkw liaggpssga ppps0

20、(p)

21、其具有以下修饰：

22、1)17和20位置的赖氨酸侧链上的氨基与相连；且

23、2)式(p)所示序列的多肽的0-2个氨基酸被替换；

24、其中，

25、aib的结构为

26、s0选自

27、x选自其中，“*”表示与x1相连的位置；

28、x1选自单键、-c(＝o)-、-o-c(＝o)-和-n(r1)-c(＝o)-；

29、r1选自h和c1-3烷基；

30、x2选自

31、

32、m选自2、3和4；

33、n选自15、16、17、18和19；

34、p选自1和2。

35、本发明提供了式(ii)所示序列的多肽，

36、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk afvkw liaggpssga ppps0

37、(ii)

38、其具有以下修饰：

39、1)i和i+3位置的赖氨酸侧链上的氨基或j和j+4位置的赖氨酸侧链上的氨基与相连，其中i为17，其中j为20(17位的异亮氨酸先替换为赖氨酸，然后其侧链上的氨基再与20位的赖氨酸侧链上的氨基相连)；且

40、2)式(ii)所示系列的多肽另外的0-2个氨基酸被替换；

41、其中，

42、aib的结构为

43、s0选自

44、x选自其中，“*”表示与x1相连的位置；

45、x1选自单键、-c(＝o)-、-o-c(＝o)-和-n(r1)-c(＝o)-；

46、r1选自h和c1-3烷基；

47、x2选自

48、

49、m选自2、3和4；

50、n选自15、16、17、18和19；

51、p选自1和2。

52、在本发明的一些方案中，所述多肽中第21、23或24位中0-2个氨基酸被替换，其余变量如本发明所定义。

53、在本发明的一些方案中，上述的多肽，其具有式(ii-1)、(ii-2)、(ii-3)、(ii-4)、(iii-6)、(iv-7)、(iv-8)、(iv-9)和(iv-10)所示序列，

54、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk afvkw liaggpssgappps-nh2

55、(ii-1)

56、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk efvkw liaggpssga ppps-nh2

57、(ii-2)

58、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk afikw liaggpssga ppps-nh2

59、(ii-3)

60、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk afvkw llaggpssga ppps-nh2

61、(ii-4)

62、yaibegt ftsdy siaibld kkaqk afvew liaggpssgappps-nh2

63、(iii-6)

64、yaibegt ftsdy siaibld kkaqk afvqw liaggpssga ppps-nh2

65、(iv-7)

66、yaibegt ftsdy siaibld kkaqk afvaw liaggpssga ppps-nh2

67、(iv-8)

68、yaibegt ftsdy siaibld kkaqk afviw liaggpssga ppps-nh2

69、(iv-9)

70、yaibegt ftsdy siaibld kkaqk efvew liaggpssga ppps-nh2

71、(iv-10)

72、其具有以下修饰：17和20位置的赖氨酸侧链上的氨基或20和24位置的赖氨酸侧链上的氨基与相连，其中，

73、aib、x、x1和x2如本发明所定义。

74、在本发明的一些方案中，上述r1选自h，其他变量如本发明所定义。

75、在本发明的一些方案中，上述x1选自单键、-c(＝o)-、-o-c(＝o)-和-nh-c(＝o)-，其他变量如本发明所定义。

76、在本发明的一些方案中，上述m选自2，其他变量如本发明所定义。

77、在本发明的一些方案中，上述n选自15和17，其他变量如本发明所定义。

78、在本发明的一些方案中，上述x2选自

79、其他变量如本发明所定义。

80、在本发明的一些方案中，上述x2选自其他变量如本发明所定义。

81、在本发明的一些方案中，上述i和i+3位置的赖氨酸侧链上的氨基或j和j+4位置的赖氨酸侧链上的氨基与相连形成其他变量如本发明所定义。

82、在本发明的一些方案中，上述i和i+3位置的赖氨酸侧链上的氨基或j和j+4位置的赖氨酸侧链上的氨基与相连形成其他变量如本发明所定义。

83、在本发明的一些方案中，上述选自

84、

85、其他变量如本发明所定义。

86、在本发明的一些方案中，上述选自

87、

88、

89、其他变量如本发明所定义。

90、本发明提供了式(ii)所示序列的多肽，

91、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk afvkw liaggpssga ppps0

92、(ii)

93、其具有以下修饰：

94、1)i和i+3位置的赖氨酸侧链上的氨基或j和j+4位置的赖氨酸侧链上的氨基与相连，其中i为17，其中j为20；

95、2)式(ii)所示多肽的0-2个氨基酸被替换；

96、其中，

97、aib的结构为

98、s0选自

99、x选自其中，“*”表示与x1相连的位置；

100、x1选自-c(＝o)-、-o-c(＝o)-和-n(r1)-c(＝o)-；

101、r1选自h和c1-3烷基；

102、x2选自

103、m选自2、3和4；

104、n选自15、16、17、18和19。

105、本发明提供了式(ii)所示序列的多肽，

106、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk afvkw liaggpssga ppps0

107、(ii)

108、其具有以下修饰：

109、1)i和i+3位置的赖氨酸侧链上的氨基或j和j+4位置的赖氨酸侧链上的氨基与相连，其中i为17，其中j为20；

110、2)式(ii)所示多肽的0-1个氨基酸被替换；

111、其中，

112、aib的结构为

113、s0选自

114、x选自其中，“*”表示与x1相连的位置；

115、x1选自-c(＝o)-、-o-c(＝o)-和-n(r1)-c(＝o)-；

116、r1选自h和c1-3烷基；

117、x2选自

118、m选自2、3和4；

119、n选自15、16、17、18和19。

120、在本发明的一些方案中，上述多肽，其具有式(ii-1)、(ii-2)、(ii-3)、(ii-4)、(ii-5)和(iii-6)所示序列，

121、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk afvkw liaggpssga ppps-nh2

122、(ii-1)

123、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk efvkw liaggpssga ppps-nh2

124、(ii-2)

125、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk afikw liaggpssga ppps-nh2

126、(ii-3)

127、yaibegt ftsdy siaibld kiaqk afvkw llaggpssga ppps-nh2

128、(ii-4)

129、yaibegt ftsdy siaibld kkaqk afvkw liaggpssga ppps-nh2

130、(ii-5)

131、yaibegt ftsdy siaibld kkaqk afvew liaggpssga ppps-nh2

132、(iii-6)

133、其具有以下修饰：17和20位置的赖氨酸侧链上的氨基或20和24位置的赖氨酸侧链上的氨基与相连，

134、其中，

135、aib、x、x1和x2如本发明所定义。

136、在本发明的一些方案中，上述r1选自h，其他变量如本发明所定义。

137、在本发明的一些方案中，上述x1选自-c(＝o)-、-o-c(＝o)-和-nh-c(＝o)-，其他变量如本发明所定义。

138、在本发明的一些方案中，上述m选自2，其他变量如本发明所定义。

139、在本发明的一些方案中，上述n选自17，其他变量如本发明所定义。

140、在本发明的一些方案中，上述x2选自其他变量如本发明所定义。

141、在本发明的一些方案中，上述i和i+3位置的赖氨酸侧链上的氨基或j和j+4位置的赖氨酸侧链上的氨基与相连形成其中z2fz3为afv、efv或afi，其他变量如本发明所定义。

142、在本发明的一些方案中，上述i和i+3位置的赖氨酸侧链上的氨基或j和j+4位置的赖氨酸侧链上的氨基与相连形成其他变量如本发明所定义。

143、在本发明的一些方案中，上述选自

144、

145、其他变量如本发明所定义。

146、本发明还有一些方案由上述变量任意组合而来。

147、本发明还提供了下式所示多肽，

148、

149、

150、

151、

152、本发明还提供了上述药物组合物，包括作为活性成分的治疗有效量根据上述的多肽化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。

153、在本发明的一些方案中，上述多肽化合物或其药学上可接受的盐或者上述的组合物在制备治疗nafld和nash的药物上的应用。

154、在本发明的一些方案中，上述的多肽化合物或其药学上可接受的盐或者上述的组合物在给药频次上为3天1次，4天1次，1周1次或2周1次。

155、技术效果

156、本发明的多肽对glp-1r/gipr具有很强的激动活性；本发明化合物具有优异的药代动力学性质、血浆稳定性和极高的血浆蛋白结合度；本发明化合物在stz-nash小鼠模型中可显著改善nas评分。

157、定义和说明

158、除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

159、这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

160、术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。

161、本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。

162、“氨基酸”是指天然存在的和合成的氨基酸，以及起到与天然存在的氨基酸类似的作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及后来修饰的那些氨基酸，例如，羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和o-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(例如与氢、羧基基团、氨基基团和r基团结合的α碳)的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这样的类似物可以具有修饰的r基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指其结构不同于一般的氨基酸化学结构，但起到与天然存在的氨基酸相似的作用的化学化合物。

163、本文所述的a或ala表示丙氨酸，结构为r或arg表示精氨酸，结构为n或asn表示天冬酰胺，结构为d或asp表示天冬氨酸，结构为c或cys表示半胱氨酸，结构为q或gln表示谷氨酰胺，结构为e或glu表示谷氨酸，结构为g或gly表示甘氨酸，结构为h或his表示组氨酸，结构为i或ile表示异亮氨酸，结构为l或leu表示亮氨酸，结构为k或lys表示赖氨酸，结构为m或met表示甲硫氨酸，结构为f或phe表示苯丙氨酸，结构为p或pro表示脯氨酸，结构为s或ser表示丝氨酸，结构为t或thr表示苏氨酸，结构为w或trp表示色氨酸，结构为y或tyr表示酪氨酸，结构为v或val表示缬氨酸，结构为fmoc-aeea-oh表示

164、术语“治疗”包括抑制、减缓、停止或逆转现有症状或病患的进展或严重程度。

165、除非另有说明，术语“异构体”意在包括几何异构体、顺反异构体、立体异构体、对映异构体、旋光异构体、非对映异构体和互变异构体。

166、本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(r)-和(s)-对映体、非对映异构体、(d)-异构体、(l)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。

167、除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。

168、除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。

169、除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。

170、除非另有说明，“(+)”表示右旋，“(-)”表示左旋，“(±)”表示外消旋。

171、除非另有说明，用楔形实线键和楔形虚线键表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键和直形虚线键表示立体中心的相对构型，用波浪线表示楔形实线键或楔形虚线键或用波浪线表示直形实线键或直形虚线键

172、除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。

173、除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。

174、可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(r)-和(s)-异构体以及d和l异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。

175、本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3h)，碘-125(125i)或c-14(14c)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。

176、当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，中连接基团l为-m-w-，此时-m-w-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环a和环b构成也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环a和环b构成所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

177、除非另有规定，当某一基团具有一个或多个可连接位点时，该基团的任意一个或多个位点可以通过化学键与其他基团相连。当该化学键的连接方式是不定位的，且可连接位点存在h原子时，则连接化学键时，该位点的h原子的个数会随所连接化学键的个数而对应减少变成相应价数的基团。所述位点与其他基团连接的化学键可以用直形实线键直形虚线键或波浪线表示。例如-och3中的直形实线键表示通过该基团中的氧原子与其他基团相连；中的直形虚线键表示通过该基团中的氮原子的两端与其他基团相连；中的波浪线表示通过该苯基基团中的1和2位碳原子与其他基团相连。

178、除非另有规定，术语“c1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述c1-3烷基包括c1-2和c2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。c1-3烷基的实例包括但不限于甲基(me)、乙基(et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。

179、本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶x射线衍射法(sxrd)，把培养出的单晶用bruker d8 venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为cukα辐射，扫描方式：扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(shelxs97)解析晶体结构，便可以确证绝对构型。

180、本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

181、本发明所使用的溶剂可经市售获得。

182、本发明采用下述缩略词：aq代表水；eq代表当量、等量；dcm代表二氯甲烷；pe代表石油醚；dmso代表二甲亚砜；meoh代表甲醇；boc代表叔丁氧羰基是一种胺保护基团；r.t.代表室温；o/n代表过夜；thf代表四氢呋喃；boc2o代表二叔丁基二碳酸酯；tfa代表三氟乙酸；diea代表二异丙基乙基胺；dmf代表n,n-二甲基甲酰胺；hbtu代表苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯；hobt代表1-羟基苯并三唑；hoat代表1-羟基-7-氮杂苯并三唑；dic代表n,n'-二异丙基碳二亚胺；dbu代表1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯；phsih3代表苯硅烷；pd(pph3)4代表四三苯基膦钯。