MHCIb介导的髓鞘特异性免疫抑制作为针对多发性硬化症和MOG抗体疾病的新型治疗方法

本发明涉及非经典人类主要组织相容性复合体(mhc)分子(也称为mhc ib类分子)与肽抗原组合用于治疗多发性硬化症(ms)、mog抗体疾病和mog抗体阳性视神经脊髓炎(neuromyelitis optica)的治疗用途。本发明更具体地涉及包含肽抗原与非经典mhc ib类分子的一个或多个结构域的重组多肽。本发明还涉及生产此类重组多肽的方法、包含此类重组多肽的药物组合物、以及它们用于治疗多发性硬化症(ms)、mog抗体疾病和mog抗体阳性视神经脊髓炎的用途。

背景技术：

1、多发性硬化症(ms)和mog脑脊髓炎(又称髓鞘-少突胶质细胞糖蛋白抗体疾病、mog抗体疾病、mogad)是一种自身免疫性疾病，其中免疫系统的t细胞攻击中枢神经系统的髓鞘，导致逐渐累进的神经退行。免疫调节疗法可以有效抑制多发性硬化症(ms)特征性的疾病活动复发。对于罕见的mogad，其长期以来被认为是ms的一种亚型，目前尚无批准的治疗方法，因此治疗最初包括观察和等待病情进展。在这两种疾病中，都会发生缓慢累进性的神经退行。一些对ms有效的治疗方法，例如抗体那他珠单抗(natalizumab)或奥瑞珠单抗(ocrelizumab)或口服生物可利用的s1p抑制剂芬戈莫德(fingolimod)，，甚至存在持续性且通常无害的jc病毒脑内感染无法再控制的风险，这种风险导致通常致命的进行性多灶性白质脑病。在此方面，在这两种疾病中，免疫调节不足或免疫调节副作用太大的问题仍然没有得到解决，特别是在进展缓慢方面。常见的生物制剂不能穿过血脑屏障，因此不能原位(in situ)发挥抗炎作用。相反，调节细胞已被描述其能很好地穿过血脑屏障(schneider-hohendorf等，eur j immunol.2010年12月；40(12)：3581-90)。

2、迄今为止，至少在早期临床研究中已经对两种策略进行了评估。与过敏中的脱敏策略类似，已经通过不同的途径施用大量抗原以诱导抗原特异性耐受性。然而，在自身免疫疾病中，这些策略引起了严重的副作用并且在临床上并未取得成功。通过抗原特异性调节t细胞或抗原负载的耐受性树突状细胞的过继转移来诱导耐受性的尝试看起来更有前景。然而，这些策略极其复杂且昂贵，需要针对每个患者遵循gmp标准的生产和质量控制流程。因此，即使小规模临床试验取得了成功，在可预见的未来，许多患者是否可以接受过继转移疗法仍是一个很大的疑问。

3、免疫抑制mhc ib类分子(例如hla-g)对于妊娠期间的耐受性诱导至关重要。它们通过免疫抑制受体，例如ilt2、ilt4和kir2dl4，对各种免疫细胞发挥免疫抑制作用。wo2018/215340涉及用于靶向治疗免疫调节的mhc ib类分子与肽的组合。

4、总的来说，仍然需要用于治疗多发性硬化症(ms)和mog抗体疾病的改良药物。同样，也需要用于治疗mog抗体阳性视神经脊髓炎(nmo)的改良药物。

技术实现思路

1、发明人发现，人类mhc ib类分子，例如hla-g，能够诱导针对递呈的肽抗原的抗原特异性耐受性。因此，尽管mhc ib类分子的结构和序列与诱导抗原肽特异性免疫反应的经典人类mhc ia类分子相似，但根据本发明，mhc ib类分子可有利地用于以抗原特异性方式抑制免疫反应。此外，发明人发现，除天然存在的mhc ib类分子之外的分子，特别是仅包含mhc ib类分子的至少一个结构域、优选mhc ib类分子的至少一个α3结构域的多肽，可用于如本发明所述的抑制免疫反应：各种ia分子的α1和α2结构域可与人类mhc ib类分子的α3结构域结合，以抑制针对这些抗原呈递的肽的免疫反应。

2、负载有抗原的hla-g分子可能不稳定。因此，发明人设计了可溶性重组多肽，其包含肽抗原、mhc ib类分子(例如hla-g)和β2-微球蛋白(b2m)，并将这三个成分共价连接(例如，通过共价接头)。或者，用其他mhc分子的相应结构域对mhc ib类分子(例如hla-g)的抗原结合α1和α2结构域进行更换，以增强这些重组多肽的灵活性和多功能性(例如，参见图2)。这些替代的重组多肽可以与其他人类hla分子的抗原结合域设计在一起。之前发现，包含鼠h2-kb的α1和α2结构域的构建体可以将卵清蛋白衍生的肽siinfekl呈递给ot-1t细胞。(ot-1t细胞表达特异性识别该抗原的转基因t细胞受体)(wo2018/215340)。

3、令人惊讶的是，发明人发现，通过使用本发明的重组多肽，可以抑制针对人髓鞘-少突胶质细胞糖蛋白(mog)、人髓鞘碱性蛋白(mbp)、人髓鞘相关糖蛋白(mag)或人髓鞘蛋白脂质蛋白(plp1)的免疫反应。因此，根据本发明，可以通过本发明的重组多肽来治疗多发性硬化症(ms)、髓鞘-少突胶质细胞糖蛋白抗体病(mog抗体病)和mog抗体阳性视神经脊髓炎。

4、发明人的实验数据表明，需要合适的肽抗原和mhc ib类分子(例如hla-g)的α3结构域的存在才能达到预期的效果。因此，这种方法超越了之前描述的策略，这些策略要么是在没有共刺激的情况下使用抗原肽(导致无反应性而非耐受性t细胞)，要么是在抗原非特异性环境中使用mhc ib类分子。

5、此外，根据本发明，由于与治疗这些疾病的传统药物相比，预计本发明的重组多肽将表现出更好的安全性，而传统药物可能会引起严重的副作用(例如进行性多灶性白质脑病)，所以本发明的重组多肽预计在多发性硬化症(ms)、mog抗体疾病和mog抗体阳性视神经脊髓炎的免疫治疗中具有高度优势。

6、此外，发明人惊讶地发现，本发明的重组多肽不仅调节t细胞反应，而且还在模型实验中防止mog特异性自身抗体的形成。由于mog特异性自身抗体与这些疾病的病理有关，预计这一发现将转化为多发性硬化症(ms)、mog抗体疾病和mog抗体阳性视神经脊髓炎患者的临床改善。

7、因此，本发明涉及以下优选的实施方案：

8、1.一种能够呈递肽抗原的重组多肽，所述重组多肽按n端至c端顺序包含：

9、i)被所述重组多肽呈递的肽抗原，其中所述肽抗原为人髓鞘-少突胶质细胞糖蛋白(mog)、人髓鞘碱性蛋白(mbp)、人髓鞘相关糖蛋白(mag)、或人髓鞘蛋白脂质蛋白(plp1)的肽；

10、ii)可选地，接头序列；

11、iii)可选地，人多肽结构域序列，所述人多肽结构域序列包含人β2微球蛋白序列，或与

12、seq id no:5所示的人β2微球蛋白氨基酸序列至少90％同一性的氨基酸序列；

13、iv)可选地，接头序列；

14、v)可选地，mhc分子的α1结构域；

15、vi)可选地，mhc分子的α2结构域；

16、vii)mhc ib类分子的α3结构域或mhc ib类分子的α3结构域的衍生物，所述衍生物能够结合ilt2或ilt4；

17、viii)可选地，蛋白酶酶切位点；

18、ix)可选地，间隔序列；以及

19、x)可选地，亲和标签。

20、2.根据第1项所述的重组多肽，其中根据i)所述的肽抗原的长度为7～11个氨基酸，优选为8～10个氨基酸。

21、3.根据第1或2项所述的重组多肽，其中根据i)所述的肽抗原由选自如下组中的氨基酸序列组成，所述组由seq id no:27、seq id no:29、seq id no:31、seq id no:32和

22、seq id no:33的氨基酸序列组成。

23、4.根据第1或2项所述的重组多肽，其中根据i)所述的肽抗原由选自如下组中的氨基酸序列组成，所述组由seq id no:2、seq id no:25、seq id no:26、seq id no:28和

24、seq id no:30的氨基酸序列组成。

25、5.根据前述任一项所述的重组多肽，其中根据i)所述的肽抗原是人髓鞘-少突胶质细胞糖蛋白(mog)的肽。

26、6.根据第1～2项和第4～5项中任一项所述的重组多肽，其中所述肽抗原由seq idno:2的氨基酸序列组成。

27、7.根据前述任一项所述的重组多肽，其中根据(v)所述的α1结构域和根据(vi)所述的α2结构域来自人mhc ia类分子或来自人mhc ib类分子。

28、8.根据第7项所述的重组多肽，其中根据(v)所述的α1结构域和根据(vi)所述的α2结构域来自人mhc ia类分子。

29、9.根据第8项所述的重组多肽，其中根据(v)所述的α1结构域和根据(vi)所述的α2结构域来自人hla-a2分子。

30、10.根据第7项所述的重组多肽，其中根据(v)所述的α1结构域和根据(vi)的所述α2结构域来自人mhc ib类分子。

31、11.根据前述任一项所述的重组多肽，其中根据(vii)所述的mhc ib类分子的α3结构域是人hla-e、人hla-f或人hla-g的α3结构域。

32、12.根据前述任一项所述的重组多肽，其中根据(vii)所述的mhc ib类分子的α3结构域是人hla-g的α3结构域。

33、13.根据前述任一项所述的重组多肽，其中根据(vii)所述的α3结构域或衍生物与具有氨基酸序列seq id no:9或seq id no:21的α3结构域相同，或与具有氨基酸序列seqid no:9或seq id no:21的α3结构域具有至少80％氨基酸序列同一性，优选地至少90％氨基酸序列同一性。

34、14.根据第13项所述的重组多肽，其中根据(vii)所述的α3结构域或衍生物与具有氨基酸序列seq id no:9或seq id no:21的α3结构域相同，或与具有氨基酸序列seq idno:9或seq id no:21的α3结构域具有至少92％氨基酸序列同一性。

35、15.根据第13项所述的重组多肽，其中根据(vii)所述的α3结构域或衍生物与具有氨基酸序列seq id no:9或seq id no:21的α3结构域相同，或与具有氨基酸序列seq idno:9或seq id no:21的α3结构域具有至少94％氨基酸序列同一性。

36、16.根据第13项所述的重组多肽，其中根据(vii)所述的α3结构域或衍生物与具有氨基酸序列seq id no:9或seq id no:21的α3结构域相同，或与具有氨基酸序列seq idno:9或seq id no:21的α3结构域具有至少96％氨基酸序列同一性。

37、17.根据第13项所述的重组多肽，其中根据(vii)所述的α3结构域或衍生物与具有氨基酸序列seq id no:9或seq id no:21的α3结构域的相同，或与具有氨基酸序列seq idno:9或seq id no:21的α3结构域具有至少98％氨基酸序列同一性。

38、18.根据第13项所述的重组多肽，其中根据(vii)所述的α3结构域或衍生物与具有氨基酸序列seq id no:9或seq id no:21的α3结构域相同，或与具有氨基酸序列seq idno:9或seq id no:21的α3结构域具有至少99％氨基酸序列同一性。

39、19.根据第13项所述的重组多肽，其中根据(vii)所述的α3结构域与具有氨基酸序列seq id no:9或seq id no:21的α3结构域相同。

40、20.根据前述任一项所述的重组多肽，其中根据(ii)所述的接头序列和/或根据(iv)所述的接头序列包含氨基酸序列(ggggs)n，其中n是等于或大于1的整数。

41、21.根据第20项所述的重组多肽，其中根据(ii)的接头序列包含氨基酸序列(ggggs)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数，并且优选地选自由2、3、4和5组成的组中。

42、22.根据第20或21项所述的重组多肽，其中根据(iv)的接头序列包含氨基酸序列(ggggs)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数，并且优选地选自由2、3、4和5组成的组中。

43、23.根据前述任一项所述的重组多肽，其中根据(iii)所述的人多肽结构域的序列与seq id no:5的氨基酸序列至少95％相同，优选与seq id no:5的氨基酸序列至少98％相同，更优选与seq id no:5的氨基酸序列相同。

44、24.根据前述任一项所述的重组多肽，其中所述多肽为二聚体或多聚体。

45、25.根据前述任一项所述的重组多肽，其中所述多肽包含或由所有的组分i)至vii)组成。

46、26.根据前述任一项所述的重组多肽，其中所述多肽不包含组分viii)至x)。

47、27.根据第1～25项中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽包含或由所有的组分i)至x)组成。

48、28.根据前述任一项所述的重组多肽，其还包含n端分泌信号肽序列。

49、29.根据第1～27项中任一项的重组多肽，其中所述重组多肽由如下氨基酸序列组成，所述氨基酸序列以n端至c端顺序由下述((a)和(b))组成：

50、(a)肽抗原，其选自由seq id no:2、seq id no:25、seq id no:26、seq id no:28、seq id no:30、seq id no:27、seq id no:29、seq id no:31、seq id no:32和seq id no:33的氨基酸序列组成的组中；以及

51、(b)seq id no:16的氨基酸序列。

52、30.根据前述任一项所述的重组多肽，其中所述重组多肽是可溶的。

53、31.一种核酸，其编码一种或多种根据前述任一项所述的多肽。

54、32.根据第31项所述的核酸，其中所述核酸为载体。

55、33.一种药物组合物，包含至少一种根据第31或32项所述的核酸。

56、34.一种药物组合物或试剂盒，包含至少一种根据第1～30项中任一项所述的重组多肽。

57、35.根据第34项所述的药物组合物或试剂盒，其中所述药物组合物或试剂盒包含至少两种不同的根据第1～30项中任一项所述的重组多肽，其中每种不同的多肽包含不同的如第1～6项中任一项所定义的肽抗原。

58、36.根据第33～35项中任一项所述的药物组合物或试剂盒，用于治疗人类患者的多发性硬化症(ms)、mog抗体疾病或mog抗体阳性视神经脊髓炎的用途。

59、37.根据第36项的用于所述用途的药物组合物或试剂盒，其中所述治疗是多发性硬化症(ms)的治疗。

60、38.根据第36项的用于所述用途的药物组合物或试剂盒，其中所述治疗是治疗mog抗体疾病的治疗。

61、39.根据第36项的用于所述用途的药物组合物或试剂盒，其中所述治疗是mog抗体阳性视神经脊髓炎的治疗。

62、40.根据第36～39项中任一项的用于所述用途的药物组合物或试剂盒，其中所述治疗是通过免疫疗法进行治疗。

63、41.根据第36～40项中任一项的用于所述用途的药物组合物或试剂盒，其中所述治疗是通过诱导针对人髓鞘-少突胶质细胞糖蛋白的免疫耐受来进行的。

64、42.根据第36～41项中任一项的用于所述用途的药物组合物或试剂盒，其中所述治疗用于降低血浆或脑脊液中抗人髓鞘-少突胶质细胞糖蛋白的自身抗体的水平。

65、43.根据第36～42项中任一项的用于所述用途的药物组合物或试剂盒，其中所述人类患者是在治疗开始前血浆或脑脊液中具有抗髓鞘-少突胶质细胞糖蛋白自身抗体的患者。

66、44.根据第36～43项中任一项的用于所述用途的药物组合物或试剂盒，其中所述治疗是通过诱导髓鞘特异性调节t细胞进行的。

67、45.一种重组宿主细胞，包含根据第31或32项所述的核酸或载体，并表达根据第1～30项中任一项所述的重组多肽。

68、46.一种获得包含根据第1～30项中任一项所述的多肽的药物组合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在允许从核酸分子表达重组多肽的条件下培养第45项的重组宿主细胞，

69、(b)回收重组多肽，(c)纯化重组多肽，以及(d)将重组多肽配制成药物组合物。