抗原结合结构域及其使用方法与流程

背景技术：

1、基于嵌合抗原受体(car)的过继性细胞疗法被用于重定向免疫反应性细胞(诸如t细胞)的特异性和功能，已经在淋巴恶性肿瘤患者中显示出功效(pule等人,《自然医学(nat.med.)》(14):1264-1270(2008)；maude等人,《新英格兰医学杂志(n engl j med.)》(371):1507-17(2014)；brentjens等人,《科学转化医学(sci transl med.)》(5):177ra38(2013))。car t细胞已经显示出在表达cd19的恶性肿瘤患者中诱导完全缓解，这些患者的化学疗法已经导致耐药性和肿瘤进展。cd19car疗法的成功为治疗其他血液恶性肿瘤(诸如急性髓系白血病(aml))带来了希望。急性骨髓性白血病是成人中最常见的急性白血病。aml是骨髓系血细胞癌，其特征在于积聚于骨髓和血液中的异常细胞的快速生长，以及干扰正常血细胞。有时，aml可以扩散到大脑、皮肤或牙龈。针对aml的标准化学疗法治疗在过去40年中没有发生实质性变化(pulte等人，2008)，总体存活期仍然很短。

2、开发针对aml的car疗法的一个挑战是缺乏合适的靶标。鉴定适当的car靶标的能力对于有效靶向和治疗肿瘤而不损害表达相同的靶抗原的正常细胞是重要的。因此，仍然需要靶向aml细胞而不靶向正常细胞或组织的基于car-t细胞的aml疗法。

技术实现思路

1、本文提供了一种特异性结合至人内皮粘蛋白(emcn)的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：

2、可变重链(vh)区，所述可变重链区含有具有seq id no:1的氨基酸序列的vh互补区1(cdrh1)、具有seq id no:6的氨基酸序列的vh互补区2(cdrh2)和具有seq id no:8的氨基酸序列的vh互补区3(cdrh3)；以及

3、可变轻链(vl)区，所述可变轻链区含有具有seq id no:9的氨基酸序列的vl互补区l(cdrl1)、具有seq id no:10的氨基酸序列的vl互补区2(cdrl2)和具有seq id no:11的氨基酸序列的vl互补区3(cdrl3)，其中所述抗体或其抗原结合片段是人源化的。

4、本文还提供了一种特异性结合至人内皮粘蛋白(emcn)的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：可变重链(vh)区，所述可变重链区含有具有选自由seq id no:2-5组成的组的氨基酸序列的vh互补区1(cdrh1)、具有seq id no:7的氨基酸序列的vh互补区2(cdrh2)和具有seq id no:8的氨基酸序列的vh互补区3(cdrh3)；以及可变轻链(vl)区，所述可变轻链区含有具有seq id no:9的氨基酸序列的vl互补区l(cdrl1)、具有seq id no:10的氨基酸序列的vl互补区2(cdrl2)和具有seq id no:11的氨基酸序列的vl互补区3(cdrl3)，其中所述抗体或其抗原结合片段是人源化的。

5、本文还提供了一种特异性结合至人内皮粘蛋白(emcn)的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：可变重链(vh)区，所述可变重链区含有具有选自由seq id no:2-4组成的组的氨基酸序列的vh互补区1(cdrh1)、具有seq id no:7的氨基酸序列的vh互补区2(cdrh2)和具有seq id no:8的氨基酸序列的vh互补区3(cdrh3)；以及可变轻链(vl)区，所述可变轻链区含有具有seq id no:9的氨基酸序列的vl互补区l(cdrl1)、具有seq id no:10的氨基酸序列的vl互补区2(cdrl2)和具有seq id no:11的氨基酸序列的vl互补区3(cdrl3)。

6、在一些方面，cdrh1如seq id no:2中所示。

7、在一些方面，vh区具有选自由seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14和seqid no:15组成的组的氨基酸序列。

8、在一些方面，vh区具有如seq id no:12中所示的氨基酸序列。

9、在一些方面，vh区具有选自由seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18和seqid no:19组成的组的氨基酸序列。

10、在一些方面，vh区具有如seq id no:16中所示的氨基酸序列。

11、在一些方面，vl具有如seq id no:20中所示的氨基酸序列。

12、本文还提供了一种特异性结合至人内皮粘蛋白(emcn)的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含重链可变(vh)区和轻链可变(vl)区，其中所述vh包含：包含在选自由seq id no:12-19组成的组的vh区氨基酸序列内的重链互补决定区1(cdr-h1)、重链互补决定区2(cdr-h2)和重链互补决定区3(cdr-h3)，并且所述vl包含：包含在seq id no:20的vl区氨基酸序列内的轻链互补决定区1(cdr-l1)、轻链互补决定区2(cdr-l2)和轻链互补决定区3(cdr-l3)。

13、本文还提供了一种特异性结合至人内皮粘蛋白(emcn)的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含可变重链(vh)区和可变轻链(vl)区，其中所述vl具有如seq id no:20中所示的氨基酸序列。

14、本文还提供了一种特异性结合至人内皮粘蛋白(emcn)的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含可变重链(vh)区和可变轻链(vl)区，其中所述vh具有选自由以下各项组成的组的氨基酸序列：seq id no:12、seq id no:13、seq idno:14、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18和seq id no:19。

15、在一些方面，vh具有选自由seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14和seq idno:15组成的组的氨基酸序列。在一些方面，vh区具有如seq id no:12中所示的氨基酸序列。

16、在一些方面，vh具有选自由seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18和seq idno:19组成的组的氨基酸序列。在一些方面，vh区具有如seq id no:16中所示的氨基酸序列。

17、在一些方面，vl具有如seq id no:20中所示的氨基酸序列。

18、在一些方面，抗体或其抗原结合片段是抗原结合片段。在一些方面，所述抗原结合片段包括f(ab)片段、f(ab')片段或单链可变片段(scfv)。在一些方面，所述抗原结合片段包括单链可变片段(scfv)。

19、在一些方面，所述scfv的vh和vl由肽接头分开。在一些方面，所述抗原结合结构域包含结构vh-l-vl或vl-l-vh，其中vh是重链可变域，l是肽接头，并且vl是轻链可变域。在一些方面，肽接头包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：seq id no:21-37。

20、在一些方面，所述scfv包含选自由以下各项组成的组的氨基酸序列：seq id no:68、70、72和74。

21、本文还提供了一种嵌合蛋白，所述嵌合蛋白包含如本文所提供的抗体或其抗原结合片段、以及异源性分子或部分。

22、在一些方面，嵌合蛋白为抗体-药物共轭物，并且异源分子或部分包含治疗剂。

23、在一些方面，所述嵌合蛋白是嵌合抗原受体(car)，并且所述异源性分子或部分包含选自由以下各项组成的组的多肽：跨膜结构域、一个或多个胞内信号传导结构域、铰链结构域、间隔区、一个或多个肽接头以及它们的组合。在一些方面，所述car包含跨膜域。在一些方面，所述car包括一个或多个细胞内信号传导域。

24、在一些方面，所述car是包括刺激免疫反应的一个或多个细胞内信号传导域的活化性car。

25、在一些方面，所述car是包括一个或多个抑制免疫反应的细胞内抑制域的抑制性car。在一些方面，所述细胞内抑制域包括酶促抑制域。在一些方面，所述细胞内抑制域包含细胞内抑制性共信号传导域。

26、在一些方面，所述car包括在抗原结合结构域与跨膜域之间的间隔区。在一些方面，所述间隔区具有选自由seq id no:41-52组成的组的氨基酸序列。

27、本文还提供了一种组合物，所述组合物包含如本文所提供的抗体或其抗原结合片段或者如本文所提供的嵌合蛋白以及药学上可接受的载剂、药学上可接受的赋形剂，或者它们的组合。

28、本文还提供了一种工程化核酸，所述工程化核酸编码如本文所提供的抗体或抗原结合片段或者如本文所提供的嵌合蛋白。

29、本文还提供了一种表达载体，所述表达载体包含编码本文提供的抗体或抗原结合片段中的任一种的工程化核酸。

30、本文还提供了一种组合物，所述组合物包含如本文所提供的工程化核酸或如本文所提供的表达载体以及药学上可接受的载剂、药学上可接受的赋形剂，或者它们的组合。

31、本文还提供了一种制备工程化细胞的方法，所述方法包括用如本文所提供的工程化核酸或如本文所提供的表达载体来转导分离的细胞。

32、本文还提供了一种分离的细胞，所述分离的细胞包含如本文所提供的工程化核酸、如本文所提供的表达载体或如本文所提供的组合物。

33、本文还提供了一种工程化细胞群，所述工程化细胞群表达如本文所提供的工程化核酸或如本文所提供的表达载体。

34、本文还提供了一种分离的细胞，所述分离的细胞包含如本文所提供的抗原结合片段或如本文所提供的嵌合蛋白。

35、本文还提供了一种工程化细胞群，所述工程化细胞群表达如本文所提供的抗原结合片段或如本文所提供的嵌合蛋白。

36、在一些方面，所述嵌合蛋白由细胞或细胞群重组表达。在一些方面，所述嵌合蛋白从载体或所述细胞的基因组的选定基因座表达。

37、在一些方面，所述细胞或细胞群还包含在所述细胞表面上表达的一种或多种肿瘤靶向性嵌合受体。在一些方面，所述一种或多种肿瘤靶向性嵌合受体中的每种是嵌合抗原受体(car)或工程化t细胞受体。

38、在一些方面，所述细胞或细胞群选自由以下各项组成的组：t细胞、cd8+t细胞、cd4+t细胞、γ-δt细胞、细胞毒性t淋巴细胞(ctl)、调节性t细胞、病毒特异性t细胞、自然杀伤t(nkt)细胞、自然杀伤(nk)细胞、b细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞(til)、先天淋巴样细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性细胞、中性粒细胞、骨髓细胞、巨噬细胞、单核细胞、树突细胞、红细胞、血小板细胞、人胚胎干细胞(esc)、esc源性细胞、多能干细胞、间充质基质细胞(msc)、诱导性多能干细胞(ipsc)和ipsc源性细胞。

39、在一些方面，所述细胞是自体的。在一些方面，所述细胞是同种异体的。

40、本文还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含有效量的如本文提供的细胞或工程化细胞群以及药学上可接受的载剂、药学上可接受的赋形剂或者它们的组合。

41、本文还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含有效量的表达如本文所提供的抗原结合片段或如本文所提供的嵌合蛋白的经遗传修饰的细胞以及药学上可接受的载剂、药学上可接受的赋形剂，或者它们的组合。

42、在一些方面，所述药物组合物用于治疗和/或预防肿瘤。

43、本文还提供了一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括施用治疗有效剂量的如本文提供的组合物或如本文提供的细胞中的任一种。

44、本文还提供了一种在受试者中刺激针对肿瘤细胞的细胞介导的免疫反应的方法，所述方法包括将治疗有效剂量的如本文提供的组合物或如本文提供的细胞中的任一种施用于患有肿瘤的受试者。

45、在一些方面，所述方法包括将如本文所提供的细胞或细胞群施用于受试者，其中所述细胞或细胞群表达包含如本文所提供的活化性car的嵌合蛋白。

46、本文还提供了一种在受试者中抑制针对肿瘤细胞的细胞介导的免疫反应的方法，所述方法包括将治疗有效剂量的如本文提供的组合物或如本文提供的细胞中的任一种施用于患有肿瘤的受试者。在一些方面，所述方法包括将如本文所提供的细胞或细胞群施用于受试者，其中所述细胞或细胞群表达包含如本文所提供的抑制剂的嵌合蛋白。

47、本文还提供了一种治疗患有肿瘤的受试者的方法，所述方法包括施用治疗有效剂量的如本文提供的组合物或如本文提供的细胞中的任一种。

48、本文还提供了一种用于治疗和/或预防肿瘤的试剂盒，所述试剂盒包括如本文所提供的嵌合蛋白。

49、在一些方面，所述试剂盒还包括使用所述嵌合蛋白来产生用于治疗和/或预防受试者的肿瘤一种或多种抗原特异性细胞的书面说明。

50、本文还提供了一种用于治疗和/或预防肿瘤的试剂盒，所述试剂盒包含如本文提供的细胞或细胞群。在一些方面，所述试剂盒还包含使用所述细胞来治疗和/或预防受试者的肿瘤的书面说明。

51、本文还提供了一种用于治疗和/或预防肿瘤的试剂盒，所述试剂盒包括如本文所提供的工程化核酸。在一些方面，所述试剂盒还包括使用所述核酸来产生用于治疗和/或预防受试者的肿瘤一种或多种抗原特异性细胞的书面说明。

52、本文还提供了一种用于治疗和/或预防肿瘤的试剂盒，所述试剂盒包括如本文所提供的载体。在一些方面，所述试剂盒还包括使用所述载体来产生用于治疗和/或预防受试者的肿瘤一种或多种抗原特异性细胞的书面说明。

53、本文还提供了一种用于治疗和/或预防肿瘤的试剂盒，所述试剂盒包括如本文所提供的组合物。在一些方面，所述试剂盒还包括使用所述组合物来治疗和/或预防受试者的肿瘤的书面说明书。