具有抗菌活性的含二氢茋类母核的衍生物及其制备方法与应用

本发明涉及二氢茋类化合物的制备方法与抗幽门螺旋杆菌活性，属于医药领域。

背景技术：

1、幽门螺杆菌是一类革兰氏阴性、呈螺旋形或弧形弯曲状的微需氧菌。它定植在人的胃黏膜上，引起慢性炎症，是慢性胃炎、胃十二指肠溃疡的重要致病因素，与胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等疾病的发生密切相关。在1994年，世界卫生组织将幽门螺杆菌定为胃癌的i类致癌原，它也因此成为世界上第一个被正式认可的可致癌的细菌。幽门螺杆菌在全球自然人群的感染率超过50％，而世界上几乎没有一种慢性传染病会使全球超过半数的人口受到感染。根据相关统计分析，幽门螺杆菌在我国人群的感染率高达55.82％，感染人数接近8亿人。值得注意的是，我国是胃癌的高发区域，全球有近一半的胃癌发生在中国。

2、根除幽门螺杆菌，不仅可促进机体消化性溃疡的愈合、降低溃疡并发症的发生率、阻止或延缓胃黏膜萎缩、阻止肠化生的发生和发展，还可以使胃癌的发生率降低1/3。目前，推荐铋剂四联方法，然而，由于幽门螺杆菌耐药菌株的不断出现，常规治疗策略愈发难以根除幽门螺杆菌，亟需发现新型抗幽门螺杆菌药物或先导化合物。

3、甘草，为豆科植物甘草、胀果甘草和光果甘草(glycyrrhiza uralensis fisch.、g.inflata bat.、g.glabra l.)的干燥根及根茎，具有益气补中，祛痰止咳，解毒，缓急止痛，缓和药性的功效，用于治疗脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性的历史悠久，临床应用广泛，为常用药材之一。甘草茎叶为甘草非药用部位，多弃置于田，没有得到合理应用。前期研究表明，甘草茎叶中富含异戊烯基类化合物，且有研究表明异戊烯基化能够增强化合物抑菌作用。综上，我们对其进行成分分离，以期得到新型、高效的抗幽门螺旋杆菌先导化合物

技术实现思路

1、本发明解决的技术问题是：本发明提供一种新型二氢茋类的制备方法及其在抗幽门螺旋杆菌的应用，制得的化合物1、3、6-7、9对两种耐药性和敏感性幽门螺杆菌均具有较好的活性，mic为4-8μg/ml，可用于制备抗幽门螺杆菌药物或作为抗幽门螺杆菌药物开发的先导化合物。

2、抗幽门螺旋杆菌的含二氢茋类母核的衍生物，它包括如下结构通式的化合物：

3、

4、其中r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7均可为氢、酰基、异戊烯基、羟基、甲氧基、醛基。

5、以上作为优选，以上所述的抗幽门螺旋杆菌的含二氢茋类母核的衍生物，其结构式为：

6、

7、本发明提供的所述的抗幽门螺旋杆菌的含二氢茋类母核的衍生物的制备方法，包括以下步骤：

8、(1)称取甘草茎叶药材，粉碎，加乙醇或甲醇水溶液室温浸泡药材，加热回流提取，提取液过滤后收集合并，通过减压浓缩至无醇味，得甘草茎叶浓缩液；

9、(2)将步骤(1)中得到的浓缩液，上大孔树脂柱，并用不同体积比的乙醇水洗脱，得到6个子流fr.1-1-fr.1-5；

10、(3)将步骤(2)中得到的洗脱液流分fr.1-4，上硅胶柱，并用不同体积比的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂洗脱，得到13个子流分fr.2-1-fr.2-13；

11、(4)将步骤(3)中得到的洗脱液流分fr.2-4，经c18-中压制备梯度洗脱，得到5个次流分fr.3-1-fr.3-5；将流分fr.3-3经凝胶柱分离，制备型高效液相色谱纯化得到化合物3；

12、(5)将步骤(3)中得到的洗脱液流分fr.2-5，经mci-中压制备相梯度洗脱，得到8个次流分fr.8-1-fr.8-16；流分fr.8-4经制备型高效液相色谱得到化合物8；将流分fr.8-8经制备型高效液相色谱得到化合物6；将流分fr.8-11经制备型高效液相色谱得到化合物1和9；将流分fr.8-12经制备型高效液相色谱得到化合物2和7；将流分fr.8-13经半制备型高效液相色谱得4和5。

13、作为优选方案，以上所述的抗幽门螺旋杆菌的含二氢茋类母核的衍生物的制备方法，其包括以下步骤：

14、(1)称取甘草茎叶药材，粉碎，加乙醇或甲醇水溶液室温浸泡药材，105℃热回流提取3次，每次2h，提取液过滤后收集合并，通过减压浓缩至无醇味，得甘草茎叶浓缩液；

15、(2)将步骤(1)中得到的浓缩液，进行大孔树脂柱层析，柱体积20l，用体积浓度0-100％的甲醇水梯度洗脱，得到流分fr.1-1-fr.1-5；

16、(3)将步骤(2)中得到的流分fr.1-4进行硅胶柱层析，柱体积10l，依次用体积比6:1,3:1,1:1,1:2,0:1的石油醚/乙酸乙酯体系洗脱，得到流分fr.2-1-fr.2-13；

17、(4)将步骤(3)中得到的洗脱液流分fr.2-4，经c18-中压制备梯度洗脱，流动相为纯水a-甲醇b，采用45-100％ b梯度洗脱300min；流速25ml/min，得到5个次流分fr.3-1-fr.3-5；将流分fr.3-3采用凝胶柱(ab-8,1.5cm×210cm)层析，用甲醇洗脱，甲醇洗脱后经制备型高效液相色谱，以纯水a-甲醇b为流动相，体积比为28:32等度洗脱，在76-80min时间段得到化合物3；

18、(5)将步骤(3)中得到的洗脱液流分fr.2-5，经mci-中压制备，以纯水a-甲醇b为流动相，梯度洗脱：45-100％ b；时间：300min；流速25ml/min，得到16个次流分fr.8-1-fr.8-16；将流分fr.8-4经制备型高效液相色谱，以纯水a-甲醇b为流动相，体积比45:55等度洗脱65min，在52-56min时间段得到化合物8；fr.8-8经制备型高效液相色谱，以纯水a-甲醇b为流动相，体积比57:43等度洗脱洗脱90min，在76-80min时间段得到化合物6；将流分fr.8-11经制备型高效液相色谱，以纯水a-甲醇b为流动相，按体积比61:39等度洗脱70min，分别在48-60min和60-64min时间段得到化合物1和9；将流分fr.8-12经制备型高效液相色谱，以纯水a-甲醇b为流动相，按体积比61:39等度洗脱80min，分别在58-62min和66-71min时间段得到化合物2和7；将流分fr.8-13经半制备型高效液相色谱以纯水a-甲醇b为流动相，按体积比68:32等度洗脱70min，分别在54-58min和60-63min时间得4和5。

19、活性实验采用微量肉汤稀释法评价了各化合物的抗幽门螺旋杆菌活性，选择临床用甲硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素和万古霉素作为阳性对照药物。实验结果表明，其中化合物1、3、6-7、9对两种耐药性和敏感性幽门螺杆菌均具有较好的活性，mic为4-8μg/ml，与阳性药甲硝唑相当，可用于制备抗幽门螺杆菌药物或作为抗幽门螺杆菌药物开发的先导化合物。

20、本发明首次从甘草茎叶中发现新型二氢茋类，并提供了该新化合物的提取分离技术、结构鉴定方法和抗幽门螺旋杆菌方面的用途。

21、有益效果

22、(1)本发明在于提供一种具有抗幽门螺旋杆菌作用的新型含二氢茋类母核的衍生物oxalactam a及其制备方法。

23、(2)本发明首次发现二氢茋类对幽门螺旋杆菌具有较好的抑制作用。化合物1、3、6-7、9对两种耐药性和敏感性幽门螺杆菌均具有较好的活性，mic为4-8μg/ml。可用于制备抗幽门螺杆菌药物或作为抗幽门螺杆菌药物开发的先导化合物。