阻断bFGF的新型胶原来源天然短肽及应用

本发明涉及多肽合成，具体涉及阻断bfgf的新型胶原来源天然短肽及应用。

背景技术：

1、本技术发明人前期报道了源自胶原蛋白片段分子的大多肽hepv， 其是首次文献报道的第一个依赖于肝素结合位点（hbs）阻断fgf的天然基质胶原多肽分子（matrix biol2020；94：18-30.）。该多肽hepv源自胶原蛋白collagen vα1的天然肽(hepv，该肽是由mmp2或mmp9蛋白酶降解胶原蛋白v衍生而来的)，通过其肝素结合位点(heparin-bindingsite)，能够特异地抑制bfgf而非vegf165a诱导的血管生成。

2、bfgf介导其受体fgfr（成纤维细胞生长因子受体）信号通路广泛参与生理、病理作用，包括肿瘤。阻断bfgf-fgfr是重要的治疗“泛癌（多种固体肿瘤）”的途径。然而目前，临床使用阻断的bfgf-fgfr信号通抑制剂仅仅是fgfr小分子激酶抑制剂，其毒性大是限制其抗肿瘤更多适应症应用“卡脖子”的问题之一。

3、小分子抑制剂对“靶点的高选择性”不等同于其对“肿瘤病灶/组织/器官的高选择性”，其毒性更多源于“on-target”效应作用非病灶外的正常细胞、组织和器官，这可以解释为正常（非突变）的fgfr家族成员在生理和病理环境中的多样功能。临床试验中，使用fgfr选择性激酶抑制剂治疗lscc患者，已经被广泛报道的药物毒性包括：乏力、脱发、口腔炎、指甲和皮肤毒性等，以及腹泻和其他胃肠道不良事件，特别是fgfr小分子抑制剂破坏了bfgf3（从骨骼分泌并作用于肾脏）生理维持的磷酸盐稳态，引发fgfr抑制剂非常常见（≥20%患者）的高磷血症不良反应。

4、本技术发明人研究证明，hepv保留肝素结合位点结构域（hbs），显示和fgf体内、体外特异的高亲和力，并能显著抑制体内外fgf诱导的血管生成。小鼠动物实验室没有显示出毒性。但是本技术发明人前期报道的这个多肽hepv的分子量为12kda，有144个氨基酸，其分子量过大，极大的限制了它的使用和临床转化价值。

5、为此，本发明旨在提供阻断bfgf的新型胶原来源天然短肽及应用，以解决上述问题。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决上述问题，提供阻断bfgf的新型胶原来源天然短肽及应用。

2、为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：

3、本发明提供了阻断bfgf的新型胶原来源天然短肽，所述天然短肽来源于type v胶原蛋白，为截短型type v胶原蛋白；所述天然短肽为基于hepv核心结构域的小多肽分子hbs-p1和hbs-p3，所述小多肽分子hbs-p1和hbs-p3的序列分别见seq id no.1和seq idno.2所示；所述小多肽分子hbs-p1和hbs-p3在原核表达体系中表达的核苷酸序列分别如seq id no.3和seq id no.4所示。

4、进一步地，所述小多肽分子hbs-p1由45个氨基酸组成，分子量为4.3kda。

5、进一步地，所述小多肽分子hbs-p3由68个氨基酸组成，分子量为6.4kda。

6、进一步地，所述小多肽分子hbs-p1或小多肽分子hbs-p3的氨基酸序列与his-sumo融合标签的c末端融合，得his-sumo-p1融合蛋白或his-sumo-p3融合蛋白；所述his-sumo-p1融合蛋白和所述his-sumo-p3融合蛋白的氨基酸序列分别如seq id no.5和seq id no.6所示；所述his-sumo-p1融合蛋白和所述his-sumo-p3融合蛋白经密码子优化后的核苷酸序列分别如seq id no.7和seq id no.8所示。

7、本发明还提供了上述所述的阻断bfgf的新型胶原来源天然短肽的应用，所述小多肽分子hbs-p1和hbs-p3在制备抑制fgf诱导的体内外血管生成的药物中的应用。

8、进一步地，所述药物为fgf新型阻断剂。

9、本发明还提供了上述所述的阻断bfgf的新型胶原来源天然短肽的另一应用，所述小多肽分子hbs-p1和hbs-p3在制备抗上皮样肿瘤细胞的增殖的药物中的应用。

10、在本发明方案中，涉及的序列为：

11、seq id no.1（小多肽分子hbs-p1）：

12、angekggrgtpgkpgprgqrgptgprgerg prgitgkpgp kgnsg

13、seq id no.2（小多肽分子hbs-p3）：

14、gsigfpgfpgangekggrgtpgkpgprgqrgptgprgergprgitgkpgp kgnsggdgpagppgergp

15、seq id no.3（小多肽分子hbs-p1）：

16、gccagagttgcctttcgggcccggtttaccggtgataccgcgcggaccgcgttcgccgcgcggaccagttggaccacgctgaccgcgcggacccggtttacccggggtaccacgaccacctttttcgccgttagc

17、seq id no.4（小多肽分子hbs-p3）：

18、acggaccacgctcacccggcggaccggccgggccgtcaccgccggagttacccttcggacccggtttgccagtgataccgcgtggaccacgctcaccacgcgggccggtcggaccacgctgaccacgtggacccggtttacccggcgtgccacgaccgcctttctcgccattcgcgcccggaaaacccgggaagccgatagaacc

19、seq id no.5（his-sumo-p1融合蛋白）：

20、hhhhhhmsdsevnqeakpevkpevkpethinlkvsdgsseiffkikkttplrrlmeafakrqgkemdslrflydgiriqadqtpedldmedndiieahreqiggangekggrgtpgkpgprgqrgptgprgergprgitgkpgpkgnsg

21、seq id no.6（his-sumo-p3融合蛋白）：

22、hhhhhhmsdsevnqeakpevkpevkpethinlkvsdgsseiffkikkttplrrlmeafakrqgkemdslrflydgiriqadqtpedldmedndiieahreqigggsigfpgfpgangekggrgtpgkpgprgqrgptgprgergprgitgkpgp kgnsggdgpa gppgergp

23、seq id no.7（his-sumo-p1融合蛋白）：

24、gccagagttgcctttcgggcccggtttaccggtgataccgcgcggaccgcgttcgccgcgcggaccagttggaccacgctgaccgcgcggacccggtttacccggggtaccacgaccacctttttcgccgttagcgccgccaatctgttcgcgatgcgcttcgatgatgtcgttatcttccatatccagatcttccggagtctggtcggcctgaatgcggataccgtcgtacaggaaacgcaggctatccatttctttaccctgacgttttgcgaatgcctccatcagacggcgcagcggcgtagtttttttgattttgaagaagatttcgctagagccgtcggagaccttcaggttaatatgggtttccggtttaacttccggctttacctccggtttagcttcttggttaacttcagaatcagacatgtgatgatggtggtggtgcatatg

25、seq id no.8（his-sumo-p3融合蛋白）：

26、acggaccacgctcacccggcggaccggccgggccgtcaccgccggagttacccttcggacccggtttgccagtgataccgcgtggaccacgctcaccacgcgggccggtcggaccacgctgaccacgtggacccggtttacccggcgtgccacgaccgcctttctcgccattcgcgcccggaaaacccgggaagccgatagaaccaccaccaatctgttcgcggtgtgcctcaatgatgtcattgtcctccatatccagatcttcaggggtctggtctgcctgaatacggataccatcgtacaggaaacgcaggctatccatttccttaccttggcgtttcgcgaacgcttccatcaggcgacgcagcggggtagtttttttgattttgaagaaaatttcgctagagccatcggaaactttcaggttgatgtgagtttccggtttcacttccggcttaacttccggtttcgcttcctggttcacttcagaatcggacatgtggtggtgatggtggtgcatatg

27、本发明方案解决技术问题的难度及意义在于：

28、本技术发明人前期报道的这个多肽hepv的分子量为12kda，有144个氨基酸，其分子量过大，极大的限制了它的使用和临床转化价值。本技术发明人从细胞外基质（ecm）胶原蛋白分子中寻找特异性阻断bfgf的天然多肽类药物，相比较小分子抑制剂，前者治疗可能更具有“成药”的潜力，尤其是规避毒性的可能性。相比较申请人首次报道的阻断bfgf天然基质来源的多肽hepv（126aa，已发表），本发明方案旨在提供胶原来源天然短肽，基于对大分子肽优化改进的小分子短肽，使可能具有更强的细胞、组织穿透力，提高其安全性以及其的使用和临床转化价值。

29、与现有技术相比，本发明具体以下有益效果：

30、1、相比现有技术中报道的首个源自胶原蛋白collagenvα1的天然肽hepv（120个氨基酸），本发明方案提供的新型的短肽hbs-p1只有45个氨基酸，其具备更高的临床应用价值，且短肽hbs-p1的细胞、组织穿透力更强；

31、2、本发明方案提供的短肽本身来自于哺乳动物包括的基质胶原蛋白，相比较现有临床使用的fda批准的fgfr小分子抑制剂，本发明提方案的为天然多肽，其毒性更小；同时，由于本发明的hbs-p1肽的母肽hepv特异靶点是bfgf，因此其只抑制bfgf诱导的fgfr激活，靶向性更好。

32、3、目前临床使用的fgfr1/2/3/4小分子抑制剂可以阻断所有fgf激活fgfr1/2/3/4受体，特别是fgfr小分子抑制剂破坏了fgf配体bfgf3（从骨骼分泌并作用于肾脏）生理维持的磷酸盐稳态，引发fgfr抑制剂非常常见（≥20%患者）的高磷血症不良反应，因此，本发明的短肽较现有的fgfr1/2/3/4小分子抑制剂更安全。