用于胃癌诊断和预后判断的生物标志物及其应用的制作方法

本发明涉及生物医药，特别是涉及一种用于胃癌诊断和预后判断的生物标志物及其应用。

背景技术：

1、目前诊疗手段多样，而且多学科综合诊治模式(multi-disciplinary team，mdt)的兴起使患者获益，但胃癌患者的预后仍不理想。其中一个很重要的原因是大多数胃癌患者早期并无明显症状，错过了早期诊断的黄金时间，确诊时已处于进展期。约90％的胃癌患者在确诊时已出现淋巴结转移，30％的患者更是出现远处转移。因此，早期诊断、早期干预仍是改善治疗疗效和提高生存时间的关键。目前胃镜是确诊胃癌的标准诊断手段，对胃癌的早期诊断率有质的提升。毕竟是有创检查，与操作者水平密切相关，所以目前胃镜筛查暂未能广泛普及。临床上肿瘤标志物常被用于辅助胃癌的诊断和疗效评估，包括癌胚抗原(carcino-embryonic antigen，cea)和糖链标志物(carbohydrate antigen，ca)，如糖链抗原19-9(ca19-9)和糖链抗原72-4(ca72-4)等，鉴于其诊断胃癌时较低的敏感性或特异性，需要发现能够更好地辅助胃癌诊断的生物标志物，从而对胃癌患者进行早期干预，进一步改善患者的预后。her2是另一种用于胃癌诊断和预后判断的常用生物标志物。her2是egfr家族的重要成员，在正常上皮细胞中表达较低但在包括乳腺癌、胃癌和结直肠癌等多种肿瘤类型中过表达或扩增，易与 her其他家族受体形成异二聚体，导致受体酪氨酸残基磷酸化并启动包括 mpk、pi3k、jak、stat3 和 pkc 等多种信号通路，从而导致细胞增殖和肿瘤发生。然而这些生物标志物在胃癌诊断和预后判断中的应用仍需更深入研究，并且仍然需要寻找其他新的胃癌诊断和预后判断生物标志物。

2、循环肿瘤细胞是从原发肿瘤或者转移肿瘤上脱落下来、释放进入血液循环中的一群肿瘤细胞亚群。近些年的研究发现，一方面，循环肿瘤细胞在肿瘤发生的很早期就可能出现在患者的外周血中，这为癌症的早期诊断提供了帮助。另一方面，这些循环肿瘤细胞还可以用来预测癌症患者的预后，循环肿瘤细胞的发现往往预示着肿瘤的复发或转移，这也提示患者的预后不良。如何使用循环肿瘤细胞来对癌症尤其是特定癌症例如胃癌进行诊断或者预后，这也是我们未来在循环肿瘤细胞系列探索中的一个重要方向。使用循环肿瘤细胞进行诊断或预后的一大好处是其可以有效替代肿瘤活检，对于那些无法进行病理组织活检的患者，这是一个很好的替代指标，它可以帮助临床医生实时地对癌症的生物学特征进行动态监测和判断。然而，由于循环肿瘤细胞数量稀少，利用其作为诊断癌症尤其是特定癌症例如胃癌的手段存在挑战，并非所有的癌症相关标志物都可以在循环肿瘤细胞中被检测到。因此，寻找适用于借助循环肿瘤细胞进行诊断的生物标志物具有重要的临床价值。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明人已发现，hecw2、ankfy1和arhgap31在胃癌患者中的表达水平高于健康人群中的表达水平。更特别地，本发明人发现，hecw2、ankfy1和arhgap31的高水平表达在用于诊断胃癌时具有良好的灵敏度和特异性，并且与胃癌患者的预后相关，因此可以作为用于胃癌诊断和预后判断的生物标志物。

2、如本文所用，hecw2是含c2和ww结构域的e3泛素蛋白连接酶2（c2 and ww domaincontaining e3 ubiquitin protein ligase 2，hecw2）的简称，其ncbi gene id为57520。

3、如本文所用，ankfy1是含锚蛋白重复序列和fyve结构域1（ankyrin repeat andfyve domain containing 1，ankfy1）的简称，其ncbi gene id为51479。

4、如本文所用，arhgap31是rho gtpase激活蛋白31（rho gtpase activatingprotein 31，arhgap31）的简称，其ncbi gene id为57514。

5、具体地，本发明提供了一种用于胃癌诊断的生物标志物，其中所述生物标志物选自hecw2、ankfy1和arhgap31中的一种或多种，优选全部。

6、在其他方面，本发明还提供了一种用于胃癌预后判断的生物标志物，其中所述生物标志物选自hecw2、ankfy1和arhgap31中的一种或多种，优选全部。

7、在其他方面，本发明还提供了一种用于胃癌诊断的试剂盒，所述试剂盒包含用于检测hecw2、ankfy1和arhgap31表达的试剂。

8、在其他方面，本发明还提供了一种用于胃癌预后判断的试剂盒，所述试剂盒包含用于检测hecw2、ankfy1和arhgap31表达的试剂。

9、在其他方面，本发明还提供了检测hecw2、ankfy1和arhgap31表达的试剂在制备用于胃癌的诊断的工具中的用途。

10、在其他方面，本发明还提供了检测hecw2、ankfy1和arhgap31表达的试剂在制备用于胃癌的预后判断的工具中的用途。

11、进一步地，所述胃癌的诊断包括以下步骤：

12、（1）收集待测受试者的样本，和收集对照样本；

13、（2）检测并比较待测受试者样本和对照样本中hecw2、ankfy1和arhgap31的表达水平；

14、如果待测受试者的样本中hecw2、ankfy1和arhgap31的表达水平与对照样本中hecw2、ankfy1和arhgap31的表达水平相比升高，则诊断所述待测受试者患有胃癌或处于患有胃癌的风险中。

15、进一步地，所述对照样本来源于健康人群或待测受试者的健康组织。

16、进一步地，所述胃癌的预后判断包括以下步骤：

17、（1）收集预后胃癌患者的样本为待测组，并以预前胃癌患者的样本为对照组；

18、（2）检测并比较待测组和对照组的样本中hecw2、ankfy1和arhgap31的表达水平；

19、如果待测组样本中hecw2、ankfy1和arhgap31的表达水平与对照组样本中hecw2、ankfy1和arhgap31的表达水平相比降低，则判断待测组的预后良好。

20、如本文所用，所述受试者包括哺乳动物，优选为灵长类哺乳动物，更优选为人。

21、如本文所用，所述待测受试者的样本包括受试者的临床生物样本，包括但不限于血清、血浆、全血、分泌物、棉拭子、脓液、体液、组织、器官、石蜡切片、肿瘤组织、活检样本、循环肿瘤细胞、循环肿瘤dna或尿液脱落细胞中的一种或几种。在优选的实施方案中，所述待测受试者的样本包括待测受试者的胃组织，例如胃活检样本，所述对照样本来源于健康受试者的胃组织，例如胃活检样本，或待测受试者的健康组织，例如癌旁组织。在优选的实施方案中，所述待测受试者的样本为循环肿瘤细胞。

22、如本文所用，所述预后和预前胃癌患者的样本包括受试者的临床生物样本，包括但不限于血清、血浆、全血、分泌物、棉拭子、脓液、体液、组织、器官、石蜡切片、肿瘤组织、活检样本、循环肿瘤细胞、循环肿瘤dna或尿液脱落细胞中的一种或几种。在优选的实施方案中，所述预后和预前胃癌患者的样本包括待测受试者的胃组织，例如胃活检样本。在优选的实施方案中，所述预后和预前胃癌患者的样本为循环肿瘤细胞。

23、如本文所用，检测待测受试者的样本中hecw2、ankfy1和arhgap31的表达的试剂没有特别限制，并且是本领域技术人员熟知且容易获得的用于检测受试者样本中hecw2、ankfy1和arhgap31在mrna或蛋白质水平上的表达的试剂。例如，用于检测受试者样本中hecw2、ankfy1和arhgap31的表达的试剂可以包括用于实时荧光定量pcr、酶联免疫吸附法(elisa)、蛋白/肽段芯片检测、化学发光、免疫印迹、微珠免疫检测、微流控免疫的相应试剂。

24、本发明的有益效果

25、本发明人已发现，hecw2、ankfy1和arhgap31在胃癌患者中的表达水平高于健康人群中的表达水平。更特别地，本发明人发现，hecw2、ankfy1和arhgap31的高水平表达，尤其是这三者在联合使用时，在用于诊断胃癌时具有良好的灵敏度和特异性，并且与胃癌患者的预后相关，因此可以作为用于胃癌诊断和预后判断的生物标志物。此外，本发明还发现可以通过收获受试者的循环肿瘤细胞并检测其中hecw2、ankfy1和arhgap31的表达水平来对胃癌进行诊断和预后判断。