一株灵香草内生真菌及其发酵物抑制皮脂分泌活性的应用

本发明属于护肤品，具体涉及一株灵香草内生真菌及其发酵物抑制皮脂分泌活性的应用。

背景技术：

1、皮脂腺附属于皮肤，与毛囊相关，主要的生理功能是产生和分泌皮脂，以滋润和保护皮肤。从青春期开始，面部皮脂分泌逐渐增加，额头、鼻子、下巴的油脂分泌高于两颊。如果面部皮脂分泌过度，容易引起痤疮、脂溢性皮炎、毛孔变大、面部油光等问题。

2、目前，常用的减少皮肤油脂的方法主要有：抗雄性激素药物、维甲酸类药物、抗坏血酸衍生物护肤品、含有吸油粉末的护肤品等。其中，维甲酸类药物及抗雄性激素类药物是治疗痤疮、抑制皮脂分泌的经典用药，但是这些药物在临床应用中具有较大副作用，例如维甲酸类外用药具有刺激性，可出现脱皮红肿等副作用。因此，由于目前可用的抑制皮脂分泌的药物具有不良副作用，人们更偏向于开发温和的具有抗皮脂分泌的天然活性物质。研究表明，某些植物或微生物提取物中含有的天然活性物质不仅具有抗氧化、清除自由基的作用，而且在调控皮脂分泌方面也有一定的效果。

3、植物内生菌是整个生命活动都寄生于宿主植物细胞间隙、组织和器官内，但不会引起宿主排斥反应、对宿主本身无危害的微生物。内生菌与宿主植物在共生过程中能够产生与宿主相同或相似的代谢产物。药用植物内生真菌相比植物具有生长周期短，生产成本低的优点。同时内生真菌发酵也具有制备方法简单，成本低廉，易于大规模生产等优点。因此，从药用植物中发掘内生菌，并获得具有抑菌、抗癌、抗氧化、抗炎等活性的代谢产物是目前研究的热点之一，但目前关于内生真菌抑制油脂分泌的活性研究涉及较少。

4、灵香草(lysimachia foenum-graecum hance)为报春花科多年生草本植物，在临床上可用于治疗伤风、咽喉肿痛等症状，具有散风寒、辟秽等功效。目前已有研究从灵香草中分离出多种成分(如黄酮类、多酚类、皂苷类化合物以及挥发性成分等)，这些成分具有抗氧化、抗炎、抗肥胖等多种作用。也研究表明，灵香草中的活性成分foenumoside b能够作为选择性pparγ拮抗剂，抑制pparγ刺激的脂肪细胞分化，减轻体重和肝脂肪变性，并改善胰岛素抵抗。由此推测，在灵香草中可能存在具有抑制脂质生成活性的内生真菌，并有望从中开发具有抑制皮脂分泌的天然活性物质。然而，目前尚无关于来自灵香草内生真菌的皮脂分泌抑制药物的报道。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术的不足，本发明从灵香草中分离得到一株炭疽菌属内生真菌，即尖孢炭疽菌(colletotrichum acutatum)lxcy25菌株，并以其为基础通过发酵培养得到代谢物，该代谢物具有抗皮脂分泌的功效。

2、为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

3、本发明第一方面提供了一株尖孢炭疽菌(colletotrichum acutatum)lxcy25菌株，所述尖孢炭疽菌lxcy25菌株于2023年12月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为：gdmcc no:64194；所述尖孢炭疽菌lxcy25菌株的its rdna序列如seq id no：1所示。

4、本发明第二方面提供了第一方面所述的尖孢炭疽菌(colletotrichum acutatum)lxcy25菌株在制备抑制皮脂分泌的护肤品中的应用。

5、本发明第三方面提供了第一方面所述的尖孢炭疽菌(colletotrichum acutatum)lxcy25菌株的发酵产物在制备抑制皮脂分泌的护肤品中的应用。

6、经研究发现，通过本发明方法制备得到的内生真菌lxcy25发酵液，具有良好的抑制人皮脂腺细胞皮脂分泌的作用。具体表现为：可以有效降低人皮脂腺细胞中的中性脂质含量，减少了人皮脂腺细胞中的5a-还原酶含量，降低人皮脂腺细胞中脂质生成相关基因mapk、castor2的表达量。可见，本发明的灵香草内生真菌及其发酵产物具有抑制细胞皮脂分泌的用途，有望应用于化妆品领域，为具抑制油脂分泌功效的化妆品原料的开发提供了新途径。

7、优选地，所述发酵产物的制备方法为：将尖孢炭疽菌(colletotrichum acutatum)lxcy25菌株接种到pdb培养基中，24-28℃下摇菌培养6-8天后收集发酵液即得。

8、更优选地，以90-200r/min的转速进行摇菌培养。

9、更优选地，收集发酵液后，还经过纱布过滤、0.22um微孔滤膜除菌和干燥的步骤。

10、更优选地，每100ml pdb培养基中接种3-6个1cm2的菌块。

11、更优选地，菌株接种前，先将尖孢炭疽菌(colletotrichum acutatum)lxcy25菌株接种pda培养基上，28℃培养3-6天对其进行菌种活化。

12、本发明第四方面提供了一种具有抑制皮脂分泌功效的护肤品，所述护肤品以第一方面所述的尖孢炭疽菌(colletotrichum acutatum)lxcy25菌株的发酵产物作为主要活性成分。

13、优选地，所述护肤品还包括外用护肤品领域的常规辅料。

14、更优选地，所述常规辅料包括(但不限于)乳化剂、表面活性剂、润肤剂、增溶剂、增稠剂、皮肤调理剂、保湿剂、ph调节剂、防腐剂、螯合剂、香精、去离子水的一种或多种的混合。

15、本发明的护肤品除了包括尖孢炭疽菌(colletotrichum acutatum)lxcy25菌株的发酵产物外，其他组分的选用可以按照本领域中的常规操作进行，例如可包括一些常规的油相和水相，或者进一步包括所属领域中常用的其他添加相。在一些乳化型护肤品中，通常包括乳化剂、赋型(增稠)剂，还会添加护肤品通常含有的基础原料和必要的添加剂，例如润肤剂(例如植物油、白油、动物油脂及其衍生物等)、保湿剂(例如甘油、丙二醇、1,3-丁二醇等)、香精、去离子水、抗氧化剂、防腐剂等，还可添加一些营养成分，这些具体成分的应用及用量可根据所述护肤品的具体种类而进行选择，或者按照常规量添加，这对于本领域的技术人员而言是很容易掌握的。

16、更优选地，所述护肤品的剂型包括(但不限于)面霜、面膜、精华液、乳液或水剂。

17、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

18、本发明从云南省红河区采集的新鲜、无明显病害灵香草叶片中分离获得一株纯化菌株lxcy25，其形态特征为：菌落初为白色,后期覆盖有粉红色的分生孢子堆，分生孢子为椭圆形,有稀疏的刚毛，结合后续的分子生物学鉴定结果，该菌被鉴定为尖孢炭疽菌(colletotrichum acutatum)。然后以该菌为基础，通过发酵培养得到其代谢物，通过本发明方法得到的内生真菌发酵产物，具有良好的抑制人皮脂腺细胞皮脂分泌的作用。具体表现为：可以有效降低人皮脂腺细胞中的中性脂质含量，减少了人皮脂腺细胞中的5a-还原酶含量，降低人皮脂腺细胞中脂质生成相关基因mapk、castor2的表达量。此外，以从灵香草中分离得到的炭疽菌属内生真菌lxcy25为基础制备发酵产物的方法操作简单、成本低廉，绿色环保。可见，本发明的灵香草内生真菌及其发酵产物具有抑制细胞皮脂分泌的用途，有望应用于化妆品领域，为具抑制油脂分泌功效的化妆品原料的开发提供了新途径。