角豆多糖、纳米粒及其制备方法与用途与流程

本发明涉及医药和保健食品领域，具体涉及一种角豆多糖、纳米粒及其制备方法与用途。

背景技术：

1、角豆树分布于地中海沿岸、美国的加里佛尼亚及澳大利亚等地，主要种植在中国广西、四川、云南和广东等地。角豆低热量，不含脂肪且富含天然多糖、多种维生素、蛋白质及微量元素，目前豆角提取物主要应用在食用香料、天然食物增稠剂和稳定剂领域。角豆不但具有非常高的营养价值，而且具有极高的药用价值。角豆荚制成的糖浆对感冒、咳嗽和喉咙痛可以起到良好的缓解作用。角豆荚主要成分为糖类。

2、呼吸道疾病是常见的疾病之一，通常会有咳嗽、咳痰甚至咳出血等症状，往往会引起人体免疫力下降。目前市面上止咳化痰的药品种类繁多。西药治疗既不能有效地根除，还易产生抗药性，副作用大。中药类产品治疗效果慢，气味难以接受。而口感，气味良好的产品却难以兼顾疗效。因此研究出见效快、疗效好，同时可以提高免疫力的产品非常重要。

技术实现思路

1、本发明实施例提供一种角豆多糖，可以改善呼吸道止咳化痰，还可增强免疫力。本发明实施例角豆多糖适用范围广，疗程短，见效快，未见毒副作用。

2、根据本发明一方面，提供一种角豆多糖，由半乳糖和葡萄糖这2种单糖组成，半乳糖和葡萄糖的摩尔比为(88-92):(0.8-1.2)，角豆多糖通过糖苷键(1→4)-glu、(1→3,4,6)-glu、(1→3)-gal、(3→6)-gal、(2→4,6)-gal、(2→6)-gal、(1→)-gal连接组合而成。

3、在本发明一些实施例中，所述角豆多糖中半乳糖和葡萄糖的摩尔比为89.666:1.068。

4、本文中，glu代表葡萄糖，gal代表半乳糖。

5、在本发明一些实施例中，所述角豆多糖的分子量为(1-6)×106。可选为(4.8-5)×106。

6、在本发明一些实施例中，所述角豆多糖的分子量为(1-2)×106。

7、在本发明一些实施例中，所述角豆多糖的分子量为(2-3)×106。

8、在本发明一些实施例中，所述角豆多糖的分子量为(3-4)×106。

9、在本发明一些实施例中，所述角豆多糖的平均分子量为(4.8-5)×106。

10、在本发明一些实施例中，所述角豆多糖的分子量分布宽度(mw/mn)为1.5-1.6，可选为1.574。

11、在本发明一些实施例中，所述角豆多糖是从角豆树果荚中分离得到的。

12、在本发明一些实施例中，所述角豆多糖至少具有止咳化痰和提高免疫力的作用。

13、根据本发明另一方面，提供本发明所述角豆多糖作为药物或保健品的用途。

14、根据本发明另一方面，提供本发明所述角豆多糖在制备用于止咳化痰的药物中的用途。

15、根据本发明另一方面，提供本发明所述角豆多糖在制备用于提高免疫力的药物中的用途。

16、根据本发明另一方面，还提供一种治疗疾病有效剂量的上述角豆多糖。

17、其中，所述疾病包括咳嗽、咳痰、免疫力低下。

18、根据本发明另一方面，提供药物组合物，其包含本发明所述角豆多糖，还包含药学上可接受的载体。

19、根据本发明另一方面，提供食品，其包含本发明所述角豆多糖，进一步地还包括食品原辅料。

20、在本发明一些实施例中，所述食品包括功能食品、膳食补充剂。

21、在本发明一些实施例中，所述食品可以是饮料、糖果、糖浆、甜味剂、香料等中的一种或几种。

22、根据本发明另一方面，还提供一种治疗疾病的方法，包括对有需要的受试者或患者通过口服或非口服途径给予有效剂量的上述角豆多糖或上述药物组合物或上述食品。其中，所述疾病包括咳嗽、咳痰、免疫力低下。

23、根据本发明另一方面，还提供角豆多糖的制备方法，采用该方法可制备出本发明所述角豆多糖，纯度可达到≥93％。

24、一种角豆多糖的制备方法，包括：取经粉碎的去种子的角豆树果荚，用90-95％乙醇脱脂(1-5倍重量)，将脱脂后细粉晾干；加水提取；将提取液离心，上清液浓缩，加入乙醇，使乙醇质量分数为55-60％，离心收集沉淀；用水将所得沉淀分散，经sevage法脱除蛋白后，大孔吸附树脂d101进行吸附，用蒸馏水洗脱，收集流动相组分，经deae-52纤维素柱层析，用蒸馏水洗脱，经g-100葡聚糖凝胶柱层析，流动相为去离子水，收集洗脱液，再经g-150葡聚糖凝胶柱层析流动相为去离子水，收集洗脱液，合并同一洗脱峰，减压浓缩，冷冻干燥，得到角豆多糖。

25、在本发明一些实施例中，将角豆树果荚粉碎至80-300目细粉，打破果荚细胞结构利于胞内物质溶出，同时增加果荚粉与提取液的接触面积提高萃取率。在本发明一些实施例中，可采用超微破壁粉碎技术进行粉碎。

26、在本发明一些实施例中，脱脂所用乙醇为去种子的角豆树果荚重量的2-5倍。

27、在本发明一些实施例中，提取温度为40-50℃，例如45℃。在该温度范围内有利于充分溶出角豆多糖。

28、在本发明一些实施例中，提取2-4次，每次提取时间1-5h。

29、在本发明一些实施例中，将滤液(提取液)在5000rpm超速离心离心10min，合并上清液。

30、在本发明一些实施例中，将上清液在60℃、100pa的条件下减压浓缩至粘稠状的浓缩液。

31、在本发明一些实施例中，所述角豆树果荚为豆科长豆角属植物角豆树(拉丁学名：ceratonia siliqua linn.)干燥的果荚。

32、实验证明，将小白鼠放进具浓氨水的大烧杯里诱导小白鼠咳嗽，通过测量不同浓度灌胃角豆多糖hocacy组、阳性组及空白对照组咳嗽次数，以及对研究小鼠气管酚红排泌量的分析，结果表明本发明实施例角豆多糖hocacy具有良好的止咳化痰功效。通过“改善发出红色荧光的转基因斑马鱼的t细胞减少的效果”的实验，表明本发明实施例角豆多糖hocacy具有提高免疫力的作用。

33、引起咳嗽咳痰的原因很复杂。引起咳嗽的常见疾病有上呼吸道感染，支气管炎、肺炎和急性喉炎等。临床上呼吸系统疾病常用药物的种类很多，目前多用抗生素治疗等，但这些药物毒性强，并具有导致肝损伤等副作用，因此开发出绿色天然、安全性强、无毒副作用的药物至关重要。

34、上述角豆多糖来源于角豆树果荚，具有绿色安全、天然易取等特点。纳米药物可以有效提高小分子药物的水溶性、改善小分子药物的药物动力学参数、控制药物释放速度、减少药物毒副作用。

35、本发明还提供一种角豆粗多糖的制备方法，包括：取经粉碎的去种子的角豆树果荚，用90-95％乙醇脱脂(1-5倍重量)，将脱脂后细粉晾干；加水提取；将提取液离心，上清液浓缩，加入乙醇，使乙醇质量分数为55-60％，离心收集沉淀；用水将所得沉淀分散，经sevage法脱除蛋白后，大孔吸附树脂d101进行吸附，用蒸馏水洗脱，收集流动相组分，经deae-52纤维素柱层析，用蒸馏水洗脱，得到角豆粗多糖。

36、在一些实施例，上述角豆粗多糖的制备方法，在用蒸馏水洗脱后还包括：收集洗脱液，冷冻干燥的步骤。

37、本发明还包括上述方法制备的角豆粗多糖。

38、在一些实施例，该角豆粗多糖中，含有上文角豆多糖(hocacy)的含量≥50％，例如≥55％，例如≥60％，例如50-65％。

39、本发明还提供一种角豆粗多糖、纳米粒及其在制备药物或食品中的用途。

40、一种纳米粒，包括活性成分和稳定剂；所述活性成分为上述角豆多糖或上述角豆粗多糖。

41、在一些实施例，所述稳定剂选自大豆油、维生素e、泊洛沙姆、油酸中的一种或多种。

42、在一些实施例，所述泊洛沙姆优选为泊洛沙姆p188。

43、在一些实施例，所述纳米粒中，所述活性成分与稳定剂的重量比为1:(1-10)，例如1:(1-5)，例如1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10。

44、在一些实施例，所述纳米粒即是由所述活性成分与稳定剂组成或制成。

45、在一些实施例，所述纳米粒可采用常规方法制备。

46、在一些实施例，当所述稳定剂选自大豆油、维生素e或油酸时，所述纳米粒的制备方法包括：提供所述活性成分和稳定剂，在超声条件下完全溶于乙醇中作为有机相；将所述有机相缓慢滴加在水中获得混合相；将所述混合相减压旋转蒸发(温度一般为45-55℃)，得到纳米粒。

47、在一些实施例，当所述稳定剂为泊洛沙姆时，所述纳米粒的制备方法包括：提供所述活性成分和稳定剂；将稳定剂在超声条件下溶于水中作为水相；再将活性成分溶于乙醇作为有机相；将有机相缓慢滴加在水相中获得混合相；将所述混合相减压旋转蒸发(温度一般为45-55℃)，得到纳米粒。

48、本发明还提供一种药物或食品，包括上述角豆粗多糖或上述纳米粒。

49、本发明还提供上述角豆粗多糖或上述纳米粒在制备药物或食品中的用途；可选地，所述用途包括止咳化痰。

50、本发明提供的纳米粒，活性成分为为上述角豆多糖或角豆粗多糖，属于天然物质，具有安全，易取，成本低等特点。

51、活性研究表明，本发明纳米粒具有良好的止咳化痰功效。

52、本发明研究了上述角豆多糖、角豆粗多糖及纳米粒在体内止咳化痰功效活性。根据本发明实例，通过小鼠急性肺损伤及咳嗽模型上进行尾静脉注射及口服两种给药方式，研究了上述角豆多糖、角豆粗多糖及纳米粒体内止咳、化痰效果，并检测肺组织炎症因子水平。检测发现角豆多糖及其纳米粒能够减轻实验小鼠肺组织炎症。

53、根据本发明实施例，表明本发明无细胞毒性，安全性好，角豆多糖及其纳米粒能够延长小鼠咳嗽潜伏期，减少咳嗽次数，能够山高小鼠气管酚红分泌量，具有显著的止咳化痰功效。在功能食品和/或药物领域具有很强的潜力。

54、本发明还提供了另一种角豆多糖(编号为hocacy-1)，具有止咳化痰功效。

55、在本发明一些实施例，所述角豆多糖(hocacy-1)的分子量为(3-9)×105，可选为(6-7)×105。

56、在本发明一些实施例中，所述角豆多糖(hocacy-1)的分子量分布宽度(mw/mn)为1.6-1.7，可选为1.615。

57、根据本发明另一方面，还提供所述角豆多糖(hocacy-1)的制备方法，采用该方法可制备出本发明所述角豆多糖(hocacy-1)，纯度可达到≥95％。

58、一种角豆多糖(hocacy-1)的制备方法，包括：取经粉碎的去种子的角豆树果荚，用90-95％乙醇脱脂(1-5倍重量)，将脱脂后细粉晾干；加水提取；将提取液离心，上清液浓缩，加入乙醇，使乙醇质量分数为55-60％，离心收集沉淀；用水将所得沉淀分散，经sevage法脱除蛋白后，大孔吸附树脂d101进行吸附，用蒸馏水洗脱，收集流动相组分，经deae-52纤维素柱层析，用氯化钠溶液洗脱，经g-100葡聚糖凝胶柱层析，流动相为去离子水，收集洗脱液，合并同一洗脱峰，减压浓缩，冷冻干燥，得到角豆多糖(hocacy-1)。

59、具体地，所述氯化钠溶液的浓度为0.05-1.5mol/l，例如0.1mol/l。所述氯化钠溶液的用量可为1-5倍柱体积，例如2倍。

60、本发明还包括上述方法制备的角豆多糖(hocacy-1)。

61、本发明还包括上述角豆多糖(hocacy-1)在制备药物或食品中的用途；可选地，所述用途包括止咳化痰。

62、实验证明，将小白鼠放进具浓氨水的大烧杯里诱导小白鼠咳嗽，通过测量不同浓度灌胃角豆新多糖hocacy-1组、角豆多糖纳米组、阳性组及空白对照组咳嗽次数，以及对研究小鼠气管酚红排泌量的分析，结果表明本发明实施例角豆多糖hocacy及角豆新多糖hocacy-1具有良好的止咳化痰功效。通过“改善发出红色荧光的转基因斑马鱼的t细胞减少的效果”的实验，表明本发明实施例角豆多糖hocacy具有提高免疫力的作用。