一种含胆固醇聚合物修饰的脂质、阿霉素脂质体及其制备方法与应用

本发明属于生物医药，尤其涉及基于一种含胆固醇聚合物修饰的脂质、阿霉素脂质体及其制备方法与应用。

背景技术：

1、肿瘤依然是目前威胁人类健康的重大疾病之一。近年来，纳米药物的飞速发展为肿瘤治疗带来了新的策略和希望。纳米药物是指通过纳米技术将传统小分子化疗药物或蛋白、核酸等大分子药物，通过自组装或装载于纳米载体上形成具有纳米尺度结构的一类药物。在众多的纳米药物载体中，脂质体是迄今为止临床应用最成功的纳米药物载体，因其具有良好的生物相容性、无毒、无免疫原性、表面易修饰等优点。

2、化疗药物阿霉素属于细胞周期非特异性药物，通过直接作用于dna来抑制dna的合成和干扰rna转录，以此抑制或杀死肿瘤细胞。因此，阿霉素与大多数化疗药物一样，对正常组织具有毒副作用，且由于它与心肌的亲和力高于其他组织，故阿霉素具有严重的心脏毒性，导致其临床应用受到极大限制。相比于阿霉素，阿霉素脂质体具有诸多优势：(1)阿霉素脂质体为80～100nm左右的纳米颗粒，可以通过epr效应被动靶向肿瘤组织，增加药物在肿瘤组织的富集；(2)阿霉素脂质体通过聚乙二醇修饰能够避免单核巨噬系统的清除，因此具有延长的血液循环时间，有利于阿霉素从脂质体载体中缓慢释放，从而提高疗效；(3)阿霉素脂质体能够降低阿霉素对心肌、骨髓、肝脏等正常组织的毒性，减少脱发、过敏、骨髓抑制等不良反应。

3、然而，尽管阿霉素脂质体比游离阿霉素在肿瘤组织具有更高的蓄积量，但是阿霉素脂质体在临床实践中仅表现出有限的治疗效果。这是由于阿霉素脂质体被严重限制在肿瘤微环境中，无法特异性到达肿瘤细胞，且阿霉素脂质体无法高效穿透细胞膜屏障，导致肿瘤细胞的摄取量有限。因此，尽管阿霉素脂质体能够降低药物毒副作用，但面临着难以显著提高疗效的挑战。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术存在的问题，本发明的目的之一在于提供一种含胆固醇聚合物修饰的脂质。本发明的目的之二在于提供上述含胆固醇聚合物修饰的脂质的制备方法。本发明的目的之三在于提供一种阿霉素脂质体。本发明的目的之四在于提供上述阿霉素脂质体的制备方法。本发明的目的之五在于提供上述含胆固醇聚合物修饰的脂质和阿霉素脂质体的应用。

2、为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

3、本发明第一方面提供了一种含胆固醇聚合物修饰的脂质，所述脂质包括共价连接的脂质和共聚嵌段，所述共聚嵌段的组成包括胆固醇或其衍生物单体、亲水性单体；所述脂质的结构式如式i所示：

4、

5、其中，r1为脂质，r2为亲水性单体，r3为胆固醇或其衍生物单体，r4为氢或甲基，r5为氢或甲基；x＝1～50，y＝1～50，z＝2～50，n＝2～200，x、y、z和n为正整数。

6、优选地，所述x＝5～30，y＝1～30，z＝8～30，n＝2～50。

7、优选地，所述脂质选自二脂肪酸甘油酯类、双烷基甘油醚类、磷脂酰乙醇胺类、双烷基胺类、二烷基乙醇胺类脂质中的一种。

8、更优选地，所述二脂肪酸甘油脂类选自二月桂酸甘油酯、二肉豆蔻酸甘油酯、二棕榈酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、二异硬脂酸甘油酯或二油酸甘油酯中的至少一种，所述双烷基甘油醚类选自双十二烷基甘油醚、双十四烷基甘油醚、双十六烷基甘油醚或双十八烷基甘油醚中的至少一种，所述磷脂酰乙醇胺类选自二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二异硬脂酰磷脂酰乙醇胺或二油酰磷脂酰乙醇胺中至少一种，所述双烷基胺类为具有两条直链或支链c10-30烷基疏水链的胺，所述二烷基乙醇胺类为具有两条直链或支链c10-30疏水链的乙醇胺。

9、进一步优选地，所述r1选自如下结构式：

10、

11、其中n1独自地为6-26，n1为正整数。

12、优选地，所述胆固醇或其衍生物单体选自胆固醇、脂溶性维生素或植物甾醇中的一种。更优选地，所述r3选自如下结构式：

13、

14、

15、优选地，所述亲水性单体选自丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酰胺、n-异丙基丙烯酰胺、n,n-二甲胺基乙基甲基丙烯酸酯中的一种。

16、更优选地，所述r3选自如下结构式：

17、

18、本发明第二方面提供了本发明第一方面所述含胆固醇聚合物修饰的脂质的制备方法，包括如下步骤：

19、将含脂质的氰基硫基硫代化合物、胆固醇及其衍生物单体、低聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯和/或亲水性单体，以及催化剂在溶剂中进行聚合反应，制得所述含胆固醇聚合物修饰的脂质；

20、所述含脂质的氰基硫基硫代化合物的结构式如式ⅱ所示：

21、

22、其中r1为脂质。

23、优选地，所述聚合反应的反应温度为50-80℃。更优选地，所述聚合反应的反应温度为60-70℃。

24、优选地，所述聚合反应的反应时间为15-25h。更优选地，所述聚合反应的反应时间为17-21h。

25、优选地，所述胆固醇及其衍生物单体与亲水性单体的摩尔比为1：：(1-3)。

26、优选地，所述胆固醇及其衍生物单体与低聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯的摩尔比为1：(2-4)。

27、优选地，所述胆固醇及其衍生物单体与含脂质的氰基硫基硫代化合物的摩尔比为1：(0.1-0.5)。

28、优选地，所述催化剂为偶氮类催化剂。

29、优选地，所述胆固醇及其衍生物单体与催化剂的摩尔比为1：(0.0.5-0.2)。

30、优选地，所述溶剂为二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、四氯化碳、四氢呋喃、二氧六环、丙酮、乙腈、乙二醇二甲醚、甲苯或二甲苯。

31、本发明第三方面还提供了一种阿霉素脂质体，其组成包括阿霉素、磷脂、胆固醇、第一方面所述含胆固醇聚合物修饰的脂质。

32、优选地，所述阿霉素脂质体的粒径为60-100nm。更优选地，所述阿霉素脂质体的粒径为70-90nm。

33、优选地，所述阿霉素与所述含胆固醇聚合物修饰的脂质的质量比为1：(3-6)。

34、优选地，其组成包括阿霉素、氢化大豆卵磷脂、胆固醇、线性peg磷脂、第一方面所述含胆固醇聚合物修饰的脂质。

35、更优选地，由氢化大豆卵磷脂、胆固醇、线性peg磷脂所组成的脂质与含胆固醇聚合物修饰的脂质的质量比为(1-3)：1。

36、优选地，所述含胆固醇聚合物修饰的脂质后插入。

37、本发明第四方面还提供了本发明第三方面所述阿霉素脂质体的制备方法，包括如下步骤：将由阿霉素、磷脂、胆固醇所组成的阿霉素脂质体与第一方面所述含胆固醇聚合物修饰的脂质混合，进行反应，制得胆固醇表面修饰的阿霉素脂质体。

38、优选地，所述反应温度为55-85℃。

39、优选地，所述反应时间为5-40min。

40、优选地，所述阿霉素与所述含胆固醇聚合物修饰的脂质的质量比为1：(3-6)。

41、本发明第五方面还提供了本发明第一方面所述含胆固醇聚合物修饰的脂质，或本发明第三方面所述阿霉素脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用。

42、优选地，所述含胆固醇聚合物修饰的脂质或所述阿霉素脂质体在制备肿瘤靶向治疗药物中的应用。

43、更优选地，所述含胆固醇聚合物修饰的脂质或所述阿霉素脂质体在制备高表达npc1l1蛋白肿瘤细胞靶向治疗药物中的应用。

44、本发明的有益效果是：

45、1、本发明提供了一种含胆固醇聚合物修饰的脂质，其中共聚嵌段含有可聚合的低聚聚乙二醇(或寡聚乙二醇)，该新型的结构设计可以在亲水链中结合更多的官能团，如胆固醇基团和带电荷基团等，进而实现纳米药物更多的功能。

46、2、本发明的含胆固醇及其衍生物的聚合物修饰的脂质可对阿霉素脂质体进行后插入，制备得到胆固醇及其衍生物表面修饰的阿霉素脂质体，所制得阿霉素脂质体表面存在胆固醇，且其表面修饰的胆固醇具有较高的分子可及性，有利于胆固醇的分子识别，因此该阿霉素脂质体能够特异性靶向高表达胆固醇转运蛋白npc1l1(niemann-pick c1-like1，尼曼-匹克c1型类似蛋白1)的肿瘤，实现肿瘤细胞的高效摄取，具有显著增强的抗肿瘤能力。