外泌体在脓毒症患者早期诊断和预测预后中的应用的制作方法

本发明涉及医药诊断领域，具体涉及外泌体在诊断脓毒症患者中的应用。

背景技术：

1、脓毒症是机体对感染的反应失调而导致危及生命的器官功能障碍。脓毒症起病急、病情重、病死率高，给社会和家庭都造成了沉重的经济负担。尽管目前在脓毒症的认识和支持技术等方面已经取得很大进步，但是脓毒症病死率仍居高不下。因此，寻找血浆生物标记物对脓毒症患者早期诊断和预测预后非常重要。

2、目前常规的临床和实验室指标往往不能早期识别脓毒症，现有的生物标志物也不能直接反映炎症细胞的反应，不能预测早期免疫细胞激活的程度，因此使用常规生物标志物对脓毒症患者进行预后评估效果不佳。迄今为止，尚未发现有效的生物标记物能够早期预测器官耐受阈值的早期紊乱和单个器官功能障碍向其他远距离器官扩散的可能性。近年来，纳米技术、生物技术和组学(基因组学、蛋白质组学和代谢组学)的迅速发展为设计和寻找脓毒症新的、可靠的血浆生物标记物提供了可能性。

3、外泌体是由细胞主动分泌的脂质双分子包裹的囊状小体，由脂质、蛋白质、mrna、mirna和长链非编码rna组成，其在维持外泌体生物学功能中发挥重要作用。mrna、microrna和lncrna等能够通过靶细胞膜融合被受体细胞吸收，控制受体细胞蛋白表达或激活信号通路。外泌体中富含的胆固醇、神经酰胺、甘油磷脂和长饱和脂肪酰基链等脂类物质维持外泌体结构的稳定。外泌体表面的蛋白成分具有标志性作用。外泌体还有亲水和亲脂性外壳，帮助识别和穿过体液循环中亲水性和疏水性的结构。几乎所有细胞都能分泌外泌体，这些外泌体存在于体液循环中，通过介导细胞间信息传递在疾病发生和发展过程中起作用。因此可以通过患者体液中外泌体相关蛋白质和rna的含量，预测某些潜在疾病。

4、近年来，越来越多的研究聚焦于体液外泌体中成分作为疾病早期诊断和预测预后的标记物。研究已经证实，从生物样品如血、尿、唾液和脑脊液分离外泌体可用于癌症、神经退化性疾病、肾脏和肝脏等疾病的早期诊断和预测预后，并且外泌体在器官应激状

5、态下甚至危重病状态中还能继续保持一定的浓度水平。从器官功能障碍到衰竭的过程中，外泌体可能发挥监视及调控作用，并在预测病情转归中扮演重要角色。但是目前现有技术中用于脓毒症早期诊断和预测预后，且敏感性好、特异性高的外泌体生物标志物的报道仍较少。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明包括以下几个方面：

2、本发明的第一方面提供一种用于脓毒症早期诊断和预测预后的mirna组合物，所述mirna组合物包含hsa-mir-107、hsa-mir-15a-5p、hsa-mir-576-5p、hsa-mir-191-3p和hsa-mir-190b-5p。

3、优选的，所述mirna组合物进一步包含hsa-mir-32-5p、hsa-mir-27b-5p中的一种或两种。

4、更优选的，所述mirna组合物进一步包含hsa-mir-32-5p和hsa-mir-27b-5p。

5、本发明的第二方面提供检测上述mirna组合物的试剂组合物在制备用于脓毒症早期诊断和预测预后的试剂盒中的应用。

6、本发明的第三方面提供一种用于脓毒症休克早期诊断和预测预后的mirna组合物，所述mirna组合物包含hsa-mir-92a-3p、hsa-mir-6842-5p和hsa-mir-5683。

7、优选的，所述mirna组合物进一步包含hsa-mir-616-5p、hsa-let-7e-5p、hsa-mir-5100-p3、hsa-mir-548h-3p中的一种或多种。

8、更优选的，所述mirna组合物进一步包含hsa-mir-616-5p、hsa-let-7e-5p、hsa-mir-5100-p3和hsa-mir-548h-3p。

9、本发明的第四方面提供检测上述mirna组合物的试剂组合物在制备用于脓毒症休克早期诊断和预测预后的试剂盒中的应用。

10、本发明的第五方面提供一种用于脓毒症早期诊断和预测预后的生物标志物组合物，所述生物标志物组合物包含(a)上述用于脓毒症早期诊断和预测预后的mirna组合物和(b)基因组合物，所述基因组合物包含肥大细胞表达膜蛋白1基因(mast cell expressedmembrane protein 1gene，mcemp1)，s100钙结合蛋白a12基因(s100 calcium-bindingprotein a12 gene，s100a12)、脂肪因子抵抗素基因(adipokine resistance factorgene，retn)、c型凝集素结构域家族4成员基因(c-type lectin structural domainfamily 4membergene，clec4d)和过氧化酶增殖因子活化受体基因(peroxisomeproliferator-activated receptor gene，pparg)。

11、优选的，所述基因组合物为mcemp1、s100a12、retn、clec4d和pparg的组合物。

12、本发明的第六方面提供检测上述生物标志物组合物的试剂组合物在制备用于脓毒症早期诊断和预测预后的试剂盒中的应用。

13、本发明的第七方面提供一种用于脓毒症休克早期诊断和预测预后的生物标志物组合物，所述生物标志物组合物包含(a)上述用于脓毒症休克早期诊断和预测预后的mirna组合物和(b)基因组合物，所述基因组合物包含肥大细胞表达膜蛋白1基因(mast cellexpressed membrane protein 1gene，mcemp1)，s100钙结合蛋白a12基因(s100calcium-binding proteina12 gene，s100a12)、脂肪因子抵抗素基因(adipokine resistancefactor gene，retn)、c型凝集素结构域家族4成员基因(c-type lectin structuraldomain family 4membergene，clec4d)和过氧化酶增殖因子活化受体基因(peroxisomeproliferator-activated receptor gene，pparg)。

14、优选的，所述基因组合物为mcemp1、s100a12、retn、clec4d和pparg的组合物。

15、本发明的第八方面提供检测上述生物标志物组合物的试剂组合物在制备用于脓毒症休克早期诊断和预测预后的试剂盒中的应用。

16、本发明产生的技术效果：

17、本发明从脓毒症患者血浆中分离外泌体，进行外泌体芯片检测，分析差异microrna参与的功能和信号通路，筛选出对脓毒症患者早期诊断和预测预后具有临床应用价值的差异性mirna和基因。本发明的外泌体可以作为血浆生物标记物在脓毒症早期诊断和预测预后方面发挥作用，提高脓毒症及脓毒症休克患者的早期诊断率和预测预后的敏感性和特异性。