一种从无花果叶中提取补骨脂素和绿原酸的方法

本发明属于天然产物加工，具体涉及一种从无花果叶中提取补骨脂素和绿原酸的方法。

背景技术：

1、无花果果实具有皮薄、肉厚、汁丰，成熟时为淡黄色，一年结三次果的优点。根据文献报道，无花果在全世界有100多种。在新疆主要有浅黄色芯，深紫色芯两种，其中深紫色无花果有很好的药理作用，故有“无花果王”的美誉。新疆人自古以来不仅将无花果制成干果，杏脯和罐头使用外，还将其作为药物使用，无花果汁有润肺、止咳、清热润肠、补血、补脑、补肾作用。此外，无花果叶、根、茎除了具有以上的作用外，还有散热，消肿，止泻等功能。有关新疆无花果叶的成分研究未见文献报道。新疆民医将浸泡无花果叶子的水和压榨的无花果果实汁涂抹在皮肤上对治疗牛皮癣和白癜风等皮肤病效果甚佳。根据近年以来国内外对无花果叶的研究，以水提取液再以乙醚萃取物已发现了86个吸收峰，已经鉴定出了59个化合物。据文献报道，无花果中含有萄萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、柠檬酸、丙二酸和少量苹果酸以及植物生长素，抗癌物质，它的根和根皮、茎、干果和不成熟的果汁中含有补骨脂素、糖酶、蛋白酶、脂肪酶和抗癌物质等。无花果叶主要含有补骨脂素、氨基酸、果胶、绿原酸、树脂、黄酮、呋喃香豆素、香柠檬酸内酯、芦丁(0.1％)、β-谷甾醇、维生素c等物质。国内外研究证明其中的补骨脂素是光敏性较好的一种物质，能促进人体皮肤黑色素的生成，对治疗白癜风效果显著。补骨脂素是无色针状结晶(乙醇)，熔点为189℃～190℃，能溶于乙醇、氯仿，微溶于水、乙醚和石油醚。叶子浸泡液，乙酸乙酯提取物经硅胶层析获得针状无色结晶。

2、沈薇等人用hplc法测定无花果叶中补骨脂素的含量，建立无花果叶中补骨脂素含量测定的hplc法，流动相为甲醇水溶液，流速1ml/min，检测波长245nm，柱温35℃，该法简单、灵敏、准确，可作为无花果叶中补骨脂素含量的测定方法。

3、沙吾提等人采用rp-hplc同时测定维吾尔药材无花果叶中芦丁和补骨脂素含量，建立维吾尔药材无花果叶薄层色谱鉴别及hplc含量测定方法，使用kromasil c18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-0.4％磷酸(40：60)；流速:1.0ml/min；检测波长:245nm；柱温:25℃；同时测定无花果叶中芦丁和补骨脂素含量。该方法简便、准确，专属性强，可用于无花果叶药材的质量控制。

4、刘毅等人对无花果叶炮制前后补骨脂素含量比较，采用hplc法测定补骨脂素的含量，色谱柱:diamonsil c18(250mm×4.6mm，5μm)，检测波长：246nm，柱温：25℃，流动相：甲醇：水(50：50)，流速:1.0ml/min，发现无花果叶生品中补骨脂素含量明显高于炮制品。

5、徐晓薇等人对不同采收期无花果叶中补骨脂素含量的测定与分析，将无花果叶茂盛期内每隔15d采集的叶子利用乙醇浸提，然后采用薄层层析法和高效液相色谱(hplc)分析法测定叶中补骨脂素的含量。结果表明，6月中旬采集的无花果叶中补骨脂素的含量最低，10月初采集的无花果叶中补骨脂素的含量最高，为无花果叶中补骨脂素的开发应用提供参考。

6、丛丽娜等人对无花果叶中补骨脂素的分离纯化工艺研究，以补骨脂素洗脱率和纯度为考察指标，确定dm101型大孔吸附树脂分离纯化补骨脂素的吸附性能和洗脱参数，建立用紫外分光光度法进行大孔树脂前处理的方法。结果表明，dm101型大孔吸附树脂吸附容量以干树脂计为9.76mg/g，用纯化水和不同浓度的乙醇依次洗脱，以60％乙醇洗脱效果最佳，洗脱率达90.76％，总干燥物中补骨脂素含量达69.28％。大孔吸附树脂对补骨脂素有较好的分离纯化作用，且工艺简单，成本低，易于工业化生产。

7、王通对无花果叶中补骨脂素的绿色高效提取富集及纯化工艺研究，建立了定量分析无花果叶中补骨脂素和补骨脂苷的高效液相色谱方法，优化了超声辅助的ph依赖基于离子液体的双水相体系提取富集技术，建立了高速逆流色谱纯化无花果叶中和补骨脂素和佛手柑内酯的方法.

8、田源红等人对无花果中绿原酸含量测定方法研究，采用反相高效液相色谱法对不同产地的无花果中所含的绿原酸进行含量测定。色谱柱为wondasil c18柱(250mm×4.6mm，5μm)柱，流动相：乙腈-0.4％磷酸水(13：87)；流速为1.0ml/min，检测波长：327nm；柱温：30℃。该法分离效果好，操作简单，稳定性好，重复性好，可用于无花果中绿原酸的含量测定。

9、从上述文献资料表明，针对无花果叶中功能成分利用研究方面，并未得到充分利用。因此，提供一种可同时提取无花果叶中多种功能成分的方法，十分必要。

技术实现思路

1、针对无花果叶功能成分利用不充分、纯化效率不高等问题，本发明的目的在于提出一种从无花果叶中提取补骨脂素和绿原酸的方法，该方法以新鲜无花果叶为原料，经杀青捣碎、分别加水和乙醇进行加热提取、减压浓缩上柱纯化、结晶重结晶获得补骨脂素和绿原酸纯品，可同时提取无花果叶中的补骨脂素和绿原酸，有效防止提取过程中绿原酸被氧化的问题，降低了生产成本，提高了产品品质。

2、为了实现上述的技术目的，本发明所采用的技术方案为：

3、一种从无花果叶中提取补骨脂素和绿原酸的方法，包含如下步骤：

4、(1)对新鲜无花果叶进行杀青、捣碎处理；在捣碎后的无花果叶中加入水和维生素c，加热至50～60℃提取2～3h，其中加入水的体积l与新鲜无花果叶的重量kg比为(3～6)：1；过滤，得到滤渣ⅰ和滤液ⅰ；

5、(2)向滤渣ⅰ中加入体积分数为70～85％的乙醇溶液，加热至60～80℃提取2～3h，过滤，得到滤渣ⅱ和滤液ⅱ；其中加入乙醇溶液的体积l与新鲜无花果叶的重量kg比为(3～5)：1；

6、(3)滤液ⅱ经减压浓缩至无乙醇味后，2～6℃低温放置0.5～1.5h；然后过滤，得到滤渣ⅲ和滤液ⅲ；

7、(4)滤液ⅲ经真空浓缩至原有体积的1/15～1/20后与滤液ⅰ合并，得到绿原酸提取液；在绿原酸提取液中加入活性碳脱色20～50min，然后过滤除活性碳，得到滤液ⅳ；滤液ⅳ经真空浓缩至原有体积的1/10～1/15，得浓缩液ⅰ；

8、(5)滤渣ⅲ加入体积分数为95％的乙醇溶解，上ab-8大孔树脂层析，先用2～4倍柱体积的体积分数为20％～30％的乙醇溶液进行冲洗，再用3～5倍柱体积的体积分数为70％～80％的乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液ⅰ；

9、(6)将浓缩液ⅰ上ads-7大孔树脂层析，先用2～4倍柱体积的水进行冲洗，再用3～5倍柱体积的体积分数为20％～30％的乙醇溶液进行洗脱，得洗脱液ⅱ；

10、(7)将洗脱液ⅰ进行减压浓缩至原有体积的1/3～1/8，静置结晶，得到补骨脂素产品；

11、(8)将洗脱液ⅱ进行减压浓缩至原有体积的1/20～1/25，调节ph值至1.5～2.5，再加入体积分数为95％的乙醇至乙醇终浓度为45％，避光静置结晶，重结晶，得到绿原酸产品。

12、步骤(1)中所述的杀青的具有操作优选为：

13、采用滚筒杀青机对新鲜无花果叶进行杀青2～3min；

14、步骤(1)中所述的捣碎优选采用捣碎机进行；

15、步骤(1)中所述的维生素c的加入量kg与新鲜无花果叶的重量kg比为(2.5～10)：1000。

16、步骤(4)中所述的活性碳的加入量kg与绿原酸提取液的体积l比为(5～30)：1000；

17、步骤(8)中所述的调节ph优选采用0.01mol/l盐酸溶液调节ph值；

18、所述的过滤为陶瓷膜过滤；

19、所述的减压浓缩的温度在50～60℃进行；

20、所述的乙醇溶液的配制为乙醇加入一定的水混合制成的，例如：70％乙醇溶液的配制为70ml无水乙醇加入30ml水，混合即可。

21、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

22、(1)本发明采用现代分离纯化技术，采用醇提、柱层析与结晶技术等对无花果叶进行加工提取(图1)，获得大量的补骨脂素和绿原酸纯品，有效提高了无花果叶的资源利用效率，极大地降低了其生产成本。

23、(2)本发明充分利用补骨脂素和绿原酸溶解度差异，提高了这两种活性成分的分离效率，便于后期工业化应用。