一种兼具液体菌种和固体菌种特性的食用菌固化菌种的制备方法

本发明属于食用菌及生物工程领域，具体涉及一种兼具液体菌种和固体菌种特性的食用菌固化菌种的制备方法。所述制备方法对设备、场所、技术的要求低，制备的固化菌种适合用于即时、快速制备食用菌液体菌种，省去菌种活化和摇瓶培养步骤（或可缩短摇瓶培养时间），极大降低了菌种发生污染的风险，适合作为一种接种物用于制备液体菌种，促进食用菌工厂化栽培发展。

背景技术：

1、食用菌是一种高蛋白质含量的天然食物，味道鲜美，且含有丰富的活性和药用成分，因此深受消费者喜爱。食用菌独特的营养价值和保健功效使其在食品市场中占据重要地位。目前，我国是世界上食用菌栽培种类最多、栽培面积最大和产量最多的国家，是名符其实的食用菌生产大国。食用菌已成为我国的一项重要农业产业，其总产值在农业产业中仅次于粮、油、果、菜，居第5位，且该产业仍保持快速发展的势头，展现出广阔的发展前景，有望进一步推动我国农业的发展。

2、近年来，随着食用菌栽培技术的不断进步、生产设备的现代化以及产业发展的良好前景，栽培集中度不断提高，工厂化设施栽培已成为主要生产模式。目前，我国主要食用菌品种，如杏鲍菇、金针菇、真姬菇、秀珍菇，其栽培模式已从家庭作坊式操作、季节性生产，逐渐走向设施化、工厂化、周年化、规模化生产转变，食用菌工厂化栽培企业的数量持续增加，这不仅提高了生产效率，还有力促进了整个产业的蓬勃发展。

3、传统的食用菌栽培方法一般采用固体菌种。固体菌种具有生产设备简单、场所要求低、技术要求相对较低、投资少以及不易发生污染等优点。然而，固体菌种也存在制种周期长、菌龄不一致、接种不方便、定量接种困难、菌丝萌发吃料慢、出菇同步性差等缺点。

4、与固体菌种相比，食用菌液体菌种具有制备周期短、生产自动化程度高、菌龄一致、接种效率高、成本低、易分散、流动性强、吃料快、出菇同步性好等诸多优点。因此，液体菌种在食用菌工厂化栽培上的应用受到青睐，可降低菌种使用成本，提高效率和效益。液体菌种逐渐成为食用菌栽培上主要采用的菌种型态。目前，金针菇、杏鲍菇、秀珍菇等食用菌工厂化栽培基本上都采用液体菌种，可以预期其它种类食用菌的栽培采用液体菌种也将实现。

5、但另一方面，食用菌液体菌种在栽培上的应用还存在一些突出的制约因素，如生产设备投资大、技术要求高以及制备工艺流程繁琐等。食用菌液体菌种制备步骤繁琐，通常须经菌种活化、一级摇瓶培养、二级摇瓶培养以及液体菌种罐培养等步骤，其中菌种活化培养时间长，通常需7~15 d，再加之活化菌种转入液体培养基进行摇瓶培养时菌丝生长速度慢，通常需要4~7d，导致液体菌种制备周期过长，且极易发生污染，生产过程不易控制，不利于提高生产效率和降低菌种成本。检视液体菌种制备工艺，频繁的菌种活化操作以及耗时过长的摇瓶培养是最主要制约因素，且该过程极易发生污染，因此，为促进食用菌工厂化栽培发展，十分有必要开发适合应用于液体菌种制备的易生产、易保藏、使用周期长、生长速度快的新型接种物，代替传统的斜面菌种，从而省去频繁的转管活化操作和摇瓶培养（或缩短摇瓶培养时间）步骤，可用于液体菌种的即时和快速制备。但迄今为止，易保藏和商业流转，可随时和快速用于制备食用菌液体菌种的接种物未见报道。

6、本发明利用粉末状固体基质制备培养料，固态发酵制备固体菌种，制备的固体菌种加入营养液并搅拌，使之成为半固体状态，并进行半固态发酵，使固体菌种的菌丝萌发和适量生长，所生长的菌丝具有液体菌种的特性，半固态菌种再添加无菌木屑粉制备为固化菌种。制备的固化菌种具有易保藏、保藏期长、方便流通和应用，可即时、快速制备少量或大量食用菌液体菌种，省去了液体菌种制备过程中频繁的菌种活化操作和摇瓶培养等步骤，同时又降低菌种污染风险，因此，本发明的制备技术制备的固化菌种适合用于少量或大量食用菌液体菌种的即时和快速制备，使菌种技术人员从繁琐的菌种活化和摇瓶培养操作中摆脱，有利促进液体菌种在食用菌工厂化栽培中的应用，提高经济效益，减少劳动强度，具有重要的意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种兼具液体菌种和固体菌种特性的食用菌固化菌种的制备方法。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种兼具液体菌种和固体菌种特性的食用菌固化菌种的制备方法，包括以下步骤：

4、s1：菌种活化

5、将低温保藏的食用菌菌种移接至pda固体培养基斜面上活化培养7~15d，制得活化菌种；其中，所述pda固体培养基的配方为：去皮马铃薯200g加去离子水煮沸30min后取滤液，加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、七水硫酸镁1g、琼脂20g，加去离子水补足至1l，121℃高压灭菌20min；

6、s2：制备液体种子

7、将活化菌种切成菌块，接种于pdb液体培养基中摇床培养5~7d，再转接至pdb液体培养基中摇床培养2~4d，制得液体种子；其中，所述pdb液体培养基的配方为：去皮马铃薯200g加去离子水煮沸30min后取滤液，加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、七水硫酸镁1g，加去离子水补足至1l，121℃高压灭菌20min；

8、s3：固态发酵

9、将液体种子接入固体培养料中，发酵培养至菌丝吃料完全，制得固态菌种；其中，所述固体培养料的配方为：按照重量份称量杂木屑50~68份、玉米芯10~26份、麸皮20~22份、石膏粉2份，混匀，调节含水量至62%~65％，121℃高压灭菌1h；

10、s4：后熟发酵

11、将固态菌种后熟发酵5~10d，以使菌丝大量生长，制得后熟固态菌种；

12、s5：半固态发酵

13、将后熟固态菌种捣碎，用营养液调节含水量至80%~82%，发酵培养3d，以使菌丝萌发和生长，制得半固态发酵菌种；其中，所述营养液的配方为：葡萄糖5g/l、酵母粉1g/l、其余为水，121℃高压灭菌20min；

14、s6：菌种固化

15、将半固态发酵菌种用无菌的杂木屑粉调节含水量至60%~63%，制得食用菌固化菌种，置4℃低温保藏。

16、上述步骤s1中，活化培养的条件为：温度25℃。

17、上述步骤s2中，摇床培养的条件为：温度25℃，转速150rev/min。

18、上述步骤s3，发酵培养的条件为：温度25℃。

19、上述步骤s4中，后熟发酵的条件为：温度25℃。

20、上述步骤s5中，发酵培养的条件为：温度23~25℃，通气量0.5l/min。

21、上述一种兼具液体菌种和固体菌种特性的食用菌固化菌种的制备方法在食用菌栽培中的应用。

22、一种由上述的制备方法制得的食用菌固化菌种。

23、上述一种食用菌固化菌种在食用菌栽培中的应用。

24、本发明的有益效果在于：

25、1）本发明固化菌种的制备无需使用昂贵设备，技术要求低，无菌条件易控制，菌种纯度高；

26、2）本发明制备的固化菌种兼有液体菌种的特性，接种至液体培养基菌丝生长速度快，适合用于快速制备液体菌种；

27、3）本发明制备的固化菌种兼具固体菌种的特性，易保藏，保藏期长，方便流通，可长期多次使用；

28、4）本发明制备的固化菌种应用方便，可即时、快速用于制备食用菌液体菌种，省去繁锁的菌种活化操作和摇瓶培养（或缩短培养时间），有效降低潜在污染风险；

29、5）本发明制备的固化菌种生长点多、生长速度快，短时间内即可制备液体菌种。