1.一种基于pcr的多色荧光通道检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种基于pcr的多色荧光通道检测方法,其特征在于:步骤s2中所述的荧光探针有两条,每条荧光探针均在5’端的+7位掺杂lna碱基,+14位掺杂rna碱基;5’端的+3~+7位以及+15~+18位序列互补;且所述荧光探针的两端分别偶联荧光基团和淬灭基团。
3.根据权利要求2所述的一种基于pcr的多色荧光通道检测方法,其特征在于:两条所述荧光探针的核苷酸序列分别如seq id no.1及seq id no.2所示。
4.根据权利要求3所述的一种基于pcr的多色荧光通道检测方法,其特征在于:步骤s2中所述的特异性引物为特异性长引物或者工作浓度比为1:3的特异性长引物与特异性短引物混合液。
5.根据权利要求4所述的一种基于pcr的多色荧光通道检测方法,其特征在于:所述特异性长引物是在特异性引物5’端引入与荧光探针序列相同的tag,并在tag和特异性引物序列间插入碱基bridge序列,bridge序列与荧光探针中5’末端的悬挂碱基ac互补;
6.根据权利要求5所述的一种基于pcr的多色荧光通道检测方法,其特征在于:步骤s2中同步双酶pcr的反应程序为:热启动94℃5min,解旋94℃30s,退火加酶切61℃~63℃1min,扩增35个循环,最后63~65℃终延伸兼终酶切10min。
7.一种pcr反应用荧光探针,其特征在于:所述荧光探针掺杂有lna碱基和rna碱基,且所述荧光探针的两端分别偶联荧光基团和淬灭基团。
8.一种pcr反应体系,其特征在于:包括dna模板5-50ng,特异性引物400-800nm,通用反向引物400-800nm,荧光探针100-200nm,rnase hii酶25-50mu,pcrmix 1×,其它体积用水补足。
9.一种包含权利要求8所述的pcr反应体系的产品。
10.根据权利要求9所述的产品,其特征在于,所述产品包括试剂盒。