一种外泌体低温提取装置及其使用方法与流程

本发明涉及外泌体提取领域，具体是涉及一种外泌体低温提取装置及其使用方法。

背景技术：

1、外泌体提取是细胞生物学研究中的一个重要步骤，主要用于从复杂的生物样本中分离和纯化外泌体，在进行外泌体提取时，应尽量避免样本中内容物的降解和变性，所有操作应在4℃条件下进行，提取外泌体的操作过程需要严格控制提取温度。

2、中国专利cn218596389u公开了一种外泌体提取装置，包括壳体以及位于壳体内并依次连通的第一过滤器、第二过滤器以及切向流过滤器。壳体上设置有用于对壳体内进行冷却的冷却元件。第二过滤器上设置有用于对第二过滤器以及第一过滤器内产生负压的真空泵；第二过滤器与切向流过滤器之间设置有第一蠕动泵；第一过滤器、第二过滤器以及切向流过滤器的滤孔孔径依次减小；该外泌体提取装置不仅可以使得整个外泌体提取过程处于低温环境，有效抑制待提取体系中酶的活性，以避免待提取体系中的酶将蛋白水解成较多的杂质小分子；也无需借助昂贵的超速离心设备，相比于超速离心方式可有效缩短提取分离外泌体的时间，更高效。

3、多次过滤提取外泌体涉及到多个过滤结构、传输液体的泵体、管道结构，整体提取设备的体积较大，并且细胞液在经过多次过滤后，过滤隔离在滤膜上的液体量逐渐减少，部分外泌体沉淀在滤膜上，外泌体无法完全被传输到不同过滤结构中，传输过滤过程中外泌体存在损耗，并且沉淀在滤膜上的部分外泌体对于滤膜过滤的效果也产生较大的影响，使得部分小分子物质难以被过滤出来，从而影响到最终过滤外泌体的纯度。

技术实现思路

1、针对上述问题，提供一种外泌体低温提取装置及其使用方法，通过转向组件和液体输送组件简化多次过滤结构，并且收集筒在转动至不同的过滤筒下方时通过振荡组件对过滤筒中的细胞液进行振荡分散解决了次过滤提取外泌体涉及到多个过滤结构、传输液体的泵体、管道结构，整体提取设备的体积较大，并且细胞液在经过多次过滤后，过滤隔离在滤膜上的液体量逐渐减少，部分外泌体沉淀在滤膜上，外泌体无法完全被传输到不同过滤结构中，传输过滤过程中外泌体存在损耗，并且沉淀在滤膜上的部分外泌体对于滤膜过滤的效果也产生较大的影响，使得部分小分子物质难以被过滤出来，从而影响到最终过滤外泌体的纯度等问题。

2、为解决现有技术问题，本发明提供一种外泌体低温提取装置，包括提取架和固定在提取架上的承载台，外泌体提取装置还包括等角度安装在承载台上的多个过滤筒、圆周滑动安装有提取架上的收集筒、连接在收集筒上的真空管、固定在过滤筒中用于加入辅助外泌体提取试剂的进液管；多个过滤筒中安装有孔隙大小不同的滤膜；所述收集筒侧壁上滑动安装有滑行块，滑行块上固定有连接密封收集筒与过滤筒的连接环，收集筒上固定连接有转向架，转向架上固定安装有衔接升降杆，衔接升降杆升降端固定有滑行块；所述提取架上设置有控制收集筒转动至不同过滤筒下方的转向组件，转向组件上设置有控制不同过滤筒中液体传输的液体输送组件。

3、优选的，所述转向组件包括固定在提取架上的驱动电机，驱动电机输出端固定连接有驱动转杆，驱动转杆上固定有下齿柱，下齿柱上卡合滑动套设有内齿槽杆，内齿槽杆活动连接在承载台上，提取架上转动安装有上齿柱，上齿柱与内齿槽杆之间卡合滑动连接；所述转向架上固定安装有移位升降杆，移位升降杆升降端固定有升降环，升降环与内齿槽杆之间转动装配。

4、优选的，所述液体输送组件包括固定套设在内齿槽杆上的支撑架，支撑架上固定安装有泵体，泵体上连接有吸收外泌体液体的吸收管，泵体上还连接有排出外泌体液体的排液管，吸收管和排液管分别与圆周相邻的两组过滤筒位置相互对应；所述吸收管和排液管的出口端与过滤筒同轴对应，吸收管的长度大于排液管的长度。

5、优选的，所述进液管上设置有控制过滤筒振荡从而避免滤膜被细胞液沉淀物堵塞的振荡组件。

6、优选的，所述振荡组件包括开设在进液管上的s形滑槽，s形滑槽上滑动连接有滑环，滑环上转动装配有定位环；所述滑环上固定连接有振荡杆，振荡杆上固定连接有用于振动敲击过滤筒内侧壁的振荡锤。

7、优选的，所述提取架上转动安装有与上齿柱固定连接的主动齿轮，提取架上转动连接有多个与主动齿轮啮合装配的从动齿轮，从动齿轮的数量与过滤筒的数量相同，所述从动齿轮上偏轴心连接有滑柱，所述提取架上固定安装有导向滑轨，导向滑轨上滑动装配有导向滑架，导向滑架与滑柱之间滑动装配，所述导向滑架上转动连接有推行杆，推行杆与定位环之间转动连接。

8、优选的，所述提取架上套设安装有用于调控外泌体提取温度的低温控制组件；所述低温控制组件包括套设在提取架上的保温罩，保温罩上安装有冷却管，保温罩中固定有冷凝器，冷凝器与冷却管之间连接的一端安装有压缩机，冷凝器与冷却管之间连接的另一端安装有节流阀，保温罩上安装有控制冷凝器散热的风机。

9、优选的，所述冷却管上连接有均匀调控过滤筒中外泌体提取温度的分流冷却组件。

10、优选的，所述分流冷却组件包括同轴套设在过滤筒外部的冷却环，冷却环中安装有冷却支管，冷却支管上贯通连接有控制冷却液进出的进水管和出水管，进水管和出水管通过伸缩导管与冷却管贯通连接；所述进水管、出水管和冷却环之间固定安装有固定架，固定架与定位环之间固定装配有定位架。

11、本发明还包括一种外泌体低温提取装置的使用方法，具有上述的一种外泌体低温提取装置，包括以下步骤：

12、s1、简化提取设备多次过滤，通过进液管将细胞液导入一个过滤筒中，初步过滤后关闭过滤筒的阀门，通过液体输送组件将该过滤筒中的液体导入相邻过滤筒中，且通过转向组件控制收集筒移动到不同的过滤筒下方，多个过滤筒和一组液体输送组件可以完成对细胞液的多次过滤。

13、s2、振荡细胞液辅助外泌体提取，外泌体颗粒沉淀的情况下容易堵塞滤膜，在转动收集筒的过程中振荡过滤筒，避免过滤筒中的外泌体沉淀堵塞在滤膜上。

14、s3、调节外泌体提取温度，通过调节过滤筒的温度精准控制外泌体提取的环境温度，保持提取温度在4℃，避免外泌体在提取时出现降解的情况，提取后外泌体存放温度控制在-70℃。

15、本发明相比较于现有技术的有益效果是：

16、1.本发明中设置有转向组件和液体传输组件简化设备且能完成对细胞液多次过滤处理，细胞液经过一次过滤处理后，通过液体传输组件可以传输到另一个过滤筒中，并且通过转向组件转动切换收集筒和液体输送组件的位置，使得细胞液可以多次被过滤处理，并且细胞液在传输的过程中可以关闭过滤筒下方的阀门结构，通过进液管向过滤筒中添加辅助外泌体提取的试剂，增加液体容积，减少外泌体在不断传输过程中的损耗。

17、2.本发明中设置有振荡组件在转向组件驱动的过程中对过滤筒产生振荡，转向组件驱动控制收集筒圆周转动，转向组件中的上齿柱带动主动齿轮转动，在齿轮啮合传动作用下控制从动齿轮转动，从动齿轮通过滑柱推动导向滑架横向往复移动，导向滑架通过推行杆控制定位环纵向移动，定位环在纵向移动过程中控制滑环在进液管外部上下移动的同时往复转动，定位环转动通过振荡杆和振荡锤振荡敲击过滤筒，使得过滤筒中的细胞液振荡分散，避免细胞液中的外泌体沉淀在滤膜上，降低外泌体传输时的损耗，同时也避免外泌体沉淀堵塞在滤膜上。

18、3.本发明中设置有分流冷却组件可以均匀有效调控过滤筒提取外泌体的温度，冷却管中流动的冷却液通过伸缩导管、进水管流动进入冷却支管中，冷却支管套设对应在过滤筒外部，近距离调整过滤筒周边的温度，并且当振荡组件中的定位环纵向移动过程中，定位环通过定位架打动冷却环同步上下移动，冷却环上下往复移动能够扩大冷却支管调控过滤筒温度的范围，提高调控温度的效果，快速有效保持过滤筒中的细胞液在低温的环境下提取外泌体。