一种提取分离松茸醇、虫草酸和松茸多糖的方法与流程

本发明涉及松茸边角料加工利用，尤其涉及一种提取分离松茸醇、虫草酸和松茸多糖的方法。

背景技术：

1、松茸是松、栎等树木外生的菌根真菌。松茸富含多糖、蛋白质、多肽、松茸醇等成分，具有广泛的药理作用，包括抗肿瘤、抗病毒、抗糖尿病和心血管疾病、抗氧化、保肝、抗衰老、抗辐射、抗突变、抗菌、促进肠胃蠕动以及激活免疫系统等作用。松茸产品以鲜品、干制品和速冻品等初级加工产品为主，精深加工产品较少，比如云南出口松茸产品主要有新鲜松茸、冷藏松茸、冷冻松茸和盐水松茸。

2、经在西藏工布江达、四川甘孜等地调研发现，松茸产品的开发多为新鲜松茸切片烘干或冷冻干燥等初加工方式，切片后剩余松茸边角料约占松茸总重的10-15％左右，这一部分原料多被丢弃或沤有机肥，是对松茸资源的极度浪费。目前已有技术资料显示对松茸活性成分的提取效率和纯化质量缺乏对比研究，对松茸初级加工的边角废料残回收利用研究更是少见。随着松茸资源的持续走俏及越来越稀少的野生资源，因此，对松茸资源的综合利用开发具有重要意义。对松茸边角废料进行拓展开发，利用现代新型提取技术和复合提取方法提取松茸多糖、松茸多肽和松茸醇、虫草酸等活性成分，提高活性成分的得率，研制高纯度的生物制剂，可以极大的提高松茸的经济附加值。

3、松茸在食药产品、化妆品方面的应用较为广泛，品类丰富。大多产品采用的并不是松茸经过提取纯化后的成分，因此，开发松茸多糖、松茸多肽、虫草酸和松茸醇等单一活性成分的产品具有较大潜力。

4、经检索，中国专利申请号为201510735216.7的申请方案，公开了一种从松茸中提取松茸多糖的方法，该方法包括以下步骤：(1)用质量分数为0.25-0.35％的盐酸溶液在30-40℃提取松茸1-3h，得提取液；(2)将所述提取液加碱调节ph值至7.5-8.0，再固液分离除去不溶物，得澄清的水溶液a；(3)在所述水溶液a中加酸调节ph值至4.0-4.5，再固液分离除去不溶物，得澄清的水溶液b；(4)将所述水溶液b加入到大孔吸附树脂柱中，先用水洗涤大孔吸附树脂除去未被吸附的杂质；再用体积分数为15-20％的乙醇溶液洗涤大孔吸附树脂除去极性较高的杂质；再用体积分数为65-70％的乙醇溶液作为解吸液洗涤大孔吸附树脂，收集洗涤后的解吸液，经减压浓缩、干燥得松茸提取物。上述文献中的方法存在以下不足：环保性欠佳，且资源消耗较大，还有待改进。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种提取分离松茸醇、虫草酸和松茸多糖的方法。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、一种提取分离松茸醇、虫草酸和松茸多糖的方法，包括以下步骤：

4、s1：取松茸边角料100g-200g进行粉碎，过筛，将松茸粉末装入超临界萃取釜中，加入夹带剂5％-20％，得到粗提物；

5、s2：将s1得到粗提物进行正相硅胶柱柱层析分离得到目标组分，将该组分经过凝胶柱柱层析分离纯化，得到高纯度的单体化合物；

6、s3：将s1萃取釜中的残渣100g，采用水加热提取，料液比为1:5-1:15(g/g)，过滤，浓缩得到松茸提取物；

7、s4：取s3制备的松茸提取物进行混合溶剂醇沉处理，松茸提取物与混合溶剂的比例为1:2-1:5(g/g)；

8、s5：取s4的醇沉后的上清液进行浓缩，浓缩得到精提物，对精提物加入溶液→结晶→洗出结晶→粗结晶复溶→重结晶，经过反复重结晶分离纯化得到高纯度的晶体物质；

9、s6：对s5的结晶进行结构进行鉴定；

10、s7：将取s4的醇沉后的沉淀称重，按1:10-1:25的料液比向沉淀中加入蒸馏水，于恒温水浴85-95℃中搅拌溶解，静置后离心，得到松茸多糖粗提物；

11、s8：取一定量的s7松茸多糖粗提物，向溶液中加入sevage试剂，密封后在摇床中震荡30-60min后将其倒入分液漏斗中静置30min，移除下层有机相，重复3～5次，随后使用透析袋用流动水对其透析，除去小分子杂质，浓缩、冻干得松茸多糖。

12、作为本发明一种优选的：所述s1中过筛目数为100目，萃取温度30-60℃，萃取压力20-40mpa，分离釜ⅰ温度30-45℃，分离釜ⅰ压力8-14mpa，分离釜ⅱ温度30-45℃，分离釜ⅱ压力4-10mpa，萃取时间30-60min。

13、作为本发明一种优选的：所述s3中，提取温度50-100℃，提取时间2-6h；

14、所述s4中，乙醇浓度为50％-85％，醇沉温度-20℃-25℃，醇沉时间为4-24h；

15、所述s8中，使用截留量为3500da的透析袋用流动水进行透析72-96h。

16、作为本发明一种优选的：所述s1中的夹带剂种类为乙醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或多种。

17、作为本发明一种优选的：所述s2的凝胶柱的洗脱溶剂为氯仿：甲醇＝1:4。

18、作为本发明一种优选的：所述s4的混合溶剂为乙醇：丙二醇，比例为10:0-6:4。

19、作为本发明一种优选的：所述s7的sevage试剂为三氯甲烷：正丁醇＝4:1(v/v)，添加量为多糖：sevage＝2:1-4:1(v/v)。

20、作为本发明一种优选的：所述方法中，在进行物料搅拌时，采用搅拌装置进行，所述搅拌装置包括：

21、装置主体，所述装置主体上安装有安装板；

22、空心搅拌架，空心搅拌架可转动的安装于安装板上，空心搅拌架底部设置有圆周分布的输出管；

23、加料室，加料室一体式设置于空心搅拌架顶端，加料室经过空心搅拌架内与输出管导通；

24、驱动电机，驱动电机安装于安装板上；

25、驱动齿轮，驱动齿轮的轴与驱动电机的输出端传动连接；加料室外侧设置有圆周分布的从动齿，从动齿与驱动齿轮相啮合；

26、输出管，输出管设置于装置主体底部，输出管上设置有控制阀。

27、作为本发明一种优选的：所述输出管顶部设置有弹力囊，弹力囊顶部固定有球形头，球形头外侧固定有导向柱，导向柱上下滑动连接于输出管顶端侧壁；弹力囊内与输出管内部导通；

28、所述装置主体内侧安装有环形座，环形座底面为波纹起伏状结构；球形头滑动于环形座的底面。

29、作为本发明一种优选的：所述装置主体底部内侧设置有圆周分布的传热座，传热座外侧可转动的安装有叶轮，传热座和叶轮均采用传热性好的材质；传热座底部设置有安装腔，所述装置主体底部安装有加热座，加热座的加热端安装于安装腔内；

30、所述空心搅拌架上安装有均匀圆周分布的球头杆，叶轮位于球头杆的运动路径上。

31、本发明的有益效果为：

32、1.本发明通过超临界萃取、硅胶柱层析、凝胶柱层析等多种分离纯化技术，实现了对松茸中有效成分的高效提取和分离，提高了提取物的纯度和得率；该方法适用于松茸边角料等废弃物的利用，降低了生产成本，提高了资源利用率。

33、2.本发明通过设置搅拌装置，能够基于驱动电机工作，带动加料室转动，进而利用空心搅拌架进行搅拌处理，通过加料室加入物料，物料经过空心搅拌架内后从输出管输出，能够实现更充分和混合。

34、3.本发明通过设置球形头、弹力囊和环形座等结构，能够在空心搅拌架转动过程中，球形头滑动于环形座底面，由于环形座底面为波纹起伏状结构，能够周期性的挤压球形头，从而利于推动物料输出，且结构的运动能够更好地促进搅拌，提升了作业效率。

35、4.本发明通过设置加热座、叶轮和球头杆等结构，能够基于加热座工作，以及传热座和叶轮的热传递，对装置主体内的物料进行加热处理，空心搅拌架转动时，能够利用球头杆拨动叶轮转动，从而提升搅拌效果和加热均匀性。