一种多功能皮尔瑞俄类芽孢杆菌及其应用的制作方法

本发明涉及微生物，更具体地说，它涉及一种多功能皮尔瑞俄类芽孢杆菌及其应用。

背景技术：

1、植物病害严重威胁农业生产，以往因化学农药成本低、杀菌谱广、见效快，其常作为防治植物病害的主要措施，但化学农药存在着残留、污染环境、危害人类健康等问题。随着国家农业绿色发展的需要，生物防治愈来愈受到人们的重视。有益微生物来源广泛，种类众多、作用机制多样并且能够很好的适应环境，因此充分发挥有益微生物有效控制植物病害，对人畜安全、不污染环境、防治作用持久等优点，目前已形成许多效果良好的商业产品，逐渐成为植物病害生物防治的常用手段之一，是病害综合防治的重要环节，具有广阔的应用前景。

2、氮、磷、钾作为植物生长发育所必需的营养元素，在农作物生产中发挥关键作用。传统施用化肥在农作物生产中发挥着重要作用，但相关研究也表明植物对每年投入的大量化肥的利用率只有35％左右，而剩余的化肥则可能进入地下水系统，对环境造成危害。同时，随着国家农业全面绿色转型的必然要求，农业农村部已经开始实施化肥减量化行动方案，因此，提高土壤中氮、磷、钾营养元素的利用率，在未来农作物生产和土壤健康质量保障中具有重要意义。而微生物恰好在土壤养分转化中扮演着重要角色，如硅酸盐细菌能够将钾长石中的钾溶解供植物吸收利用，具有溶磷功能的细菌则能够将土壤中无机/有机态的难溶性磷转化为可被植物吸收利用的磷。不仅于此，部分微生物还能够合成并分泌具有促进植物生长功能的代谢物质，如生长素、嗜铁素、acc脱氨酶等。

3、植物根际是根系自身生命活动和代谢对土壤影响最直接、最强烈的区域。在植物根系分泌物的吸引下，土壤中细菌、真菌等微生物被吸引并富集在根际土壤中，在植物生长发育过程中发挥了重要作用。而相关研究表明，根际益生菌-植物之间存在着一定的互作模式，这使得在微生物菌株资源挖掘过程中有了更明确的方向——根际。随着根际有益微生物越来越多地被发掘，并应用到农田生产中，根际有益微生物的重要性不言而喻。在以往的研究中，所挖掘的根际有益微生物最终能够形成微生物制剂的菌属，大多数为芽孢杆菌属，其他有益微生物开发成微生物制剂面临着难发酵，不易保存等问题。

4、类芽孢杆菌属(paenibacillus)是从芽孢杆菌属分类上新发展的，其分布广泛，在植物根际环境中普遍存在。类芽孢杆菌属的菌株具有芽孢杆菌属菌株的一些共性，具有显著的生防潜力，还能产生耐热抗逆的芽孢，有利于生防菌剂的生产及在土壤中的定殖。以往的报道已表明，皮尔瑞俄类芽孢杆菌可分泌多种水解酶、抑制多种植物病原真菌的生长，产生多种拮抗物质，具有防治植物病害的潜力。但国内外关于皮尔瑞俄类芽孢杆菌具体地应用于植物生防的报道较少。

5、因此，本发明旨在提供一种多功能皮尔瑞俄类芽孢杆菌及其应用，通过挖掘皮尔瑞俄类芽孢杆菌具体的促生、拮抗细菌、真菌等功能，明确其对植物的促生作用以及对植物病害的抑制效果，能够为多功能微生物肥料的研发提供重要的资源基础，为植物病害的绿色防控和土壤耕地质量的提升提供重要参考。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种多功能皮尔瑞俄类芽孢杆菌及其应用，本发明通过从根际土壤中分离得到paenibacilluspeoriae s6330，该皮尔瑞俄类芽孢杆菌对番茄细菌性溃疡病菌、水稻白叶枯病菌、水稻条斑病菌、十字花科黑腐病、番茄细菌性叶斑病菌、燕麦嗜酸菌、西瓜嗜酸菌、烟草青枯病菌等病原细菌，以及小麦茎基腐病的病原假禾谷镰刀菌、西瓜枯萎病的病原尖孢镰刀菌西瓜专化型、水稻纹枯病的病原立枯丝核菌、棉花枯萎病的病原尖孢镰刀菌萎蔫专化型、水稻恶苗病的病原藤仓赤霉菌、烟草根黑腐病的病原烟草根串珠霉菌、烟草黑胫病的病原烟草疫霉、油菜菌核病的病原核盘菌等病原真菌和卵菌均具有良好的抑制效果；同时，该皮尔瑞俄类芽孢杆菌具有解钾、产蛋白酶、产淀粉酶、产纤维素酶、产嗜铁素等功能，对小麦、玉米、西瓜、小油菜、烟草等多种作物具有促生作用，能够显著提高植物的叶绿素含量、株高、鲜重、地上部分重量、地下部分重量等指标；此外，该皮尔瑞俄类芽孢杆菌能够有效抑制烟草青枯病；该皮尔瑞俄类芽孢杆菌无环境污染问题、培养条件简单，在农业生产上具有广阔的防病促生应用前景。

2、本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种多功能皮尔瑞俄类芽孢杆菌及其应用，所述皮尔瑞俄类芽孢杆菌的拉丁名称为paenibacillus peoriaes6330，保藏编号为cgmcc no.29816，于2024年01月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称cgmcc)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号(中国科学院微生物研究所)，邮政编码：100101。

3、本发明进一步设置为：所述皮尔瑞俄类芽孢杆菌的16s rrna基因序列如seq idno：1所示。

4、本发明还提供一种皮尔瑞俄类芽孢杆菌或/和皮尔瑞俄类芽孢杆菌的代谢物在解钾、产蛋白酶、产淀粉酶、产纤维素酶和产嗜铁素中的应用。

5、本发明还提供一种皮尔瑞俄类芽孢杆菌或/和皮尔瑞俄类芽孢杆菌的代谢物在烟草防病、烟草促生、西瓜促生、小油菜促生、玉米促生和小麦促生中的应用。

6、本发明还提供一种皮尔瑞俄类芽孢杆菌或/和皮尔瑞俄类芽孢杆菌的代谢物在拮抗番茄细菌性溃疡病菌、水稻白叶枯病菌、水稻条斑病菌、十字花科黑腐病菌、番茄细菌性叶斑病菌、燕麦嗜酸菌、西瓜嗜酸菌、茄科雷尔氏菌、假禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌西瓜专化型、立枯丝核菌、尖孢镰刀菌萎蔫专化型、藤仓赤霉菌、烟草根串珠霉菌、烟草疫霉和核盘菌中的应用。

7、以下为本发明方案涉及的序列：

8、seq id no：1(16srrna的基因序列)：

9、tcccttgcgggttaccccaccgacttcgggtgttgtaaactctcgtggtgtgacgggcggtgtgtacaagacccgggaacgtattcaccgcggcatgctgatccgcgattactagcaattccgacttcatgtaggcgagttgcagcctacaatccgaactgagaccggcttttctaggattggctccacctcgcgatttcgcttcccgttgtaccggccattgtagtacgtgtgtagcccaggtcataaggggcatgatgatttgacgtcatccccaccttcctccggtttgtcaccggcagtctgcttagagtgcccagcttgacctgctggcaactaagcataagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacaaccatgcaccacctgtctcctctgtcccgaaggaaaggtctatctctagaccggtcagagggatgtcaagacctggtaaggttcttcgcgttgcttcgaattaaaccacatactccactgcttgtgcgggtccccgtcaattcctttgagtttcagtcttgcgaccgtactccccaggcggaatgcttaatgtgttaacttcggcaccaagggtatcgaaacccctaacacctagcattcatcgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgtttgctccccacgctttcgcgcctcagcgtcagttacagcccagagagtcgccttcgccactggtgttcctccacatatctacgcatttcaccgctacacgtggaattccactctcctcttctgcactcaagctccccagtttccagtgcgacccgaagttgagcctcgggattaaacaccagacttaaagagccgcctgcgcgcgctttacgcccaataattccggacaacgcttgccccctacgtattaccgcggctgctggcacgtagttagccggggctttcttctcaggtaccgtccctcttgtagcagttactctacaagacgttcttccctggcaacagagctttacgatccgaaaaccttcatcactcacgcggcgttgctccgtcaggctttcgcccattgcggaagattccctactgctgcctcccgtaggagtctgggccgtgtctcagtcccagtgtggccgatcaccctctcaggtcggctacgcatcgtcgccttggtaggcctttaccccaccaactagctaatgcgccgcaggcccatccacaagtgacagattgctccgtctttcctccttctcccatgcaggaaaaggatgtatcgggtattagctaccgtttccggtagttatccctgtcttgtgggcaggttgcctacgtgttactcacccgtccgccgctaggttgtttagaagcaagcttctaatcaaccccgctcgacttgcag。

10、综上所述，本发明具有以下有益效果：

11、1、本发明的菌株p.peoriae s6330菌落圆形，边缘整齐，不透明，正面灰白色，表面光滑；通过实验证明，本发明的p.peoriae s6330是一种稳定高效且广谱的植物防病促生菌，该菌株对番茄细菌性溃疡病菌、水稻白叶枯病菌、水稻条斑病菌、十字花科黑腐病菌、番茄细菌性叶斑病菌、燕麦嗜酸菌、西瓜嗜酸菌、烟草青枯病菌等病原细菌，以及小麦茎基腐病的病原假禾谷镰刀菌、西瓜枯萎病的病原尖孢镰刀菌西瓜专化型、水稻纹枯病的病原立枯丝核菌、棉花枯萎病的病原尖孢镰刀菌萎蔫专化型、水稻恶苗病的病原藤仓赤霉菌、烟草根黑腐病的病原烟草根串珠霉菌、烟草黑胫病的病原烟草疫霉、油菜菌核病的病原核盘菌等病原真菌和卵菌均具有良好的抑制效果。

12、2、本发明的菌株p.peoriae s6330具有解钾、产蛋白酶、产淀粉酶、产纤维素酶、产嗜铁素等功能，能够有效改善土壤营养环境、促进植物生长，通过结果表明，p.peoriaes6330是一种具有广谱杀菌活性、多途径促生功能，易培养、易发酵、好保存、环境友好且对人畜无害等优势的植物根际益生菌，该菌株具有良好的工业化生产前景。