一种鹰嘴桃过敏原蛋白Q2及其应用

本发明属于水果过敏原检测，具体涉及一种鹰嘴桃过敏原蛋白q2及其应用。

背景技术：

1、鹰嘴桃作为岭南地区的特色桃品种，它肉色鲜美，蜜甜可口，并且富含蛋白质、铁、钙、磷、维生素c等营养成分，同时还具有活血化痰、平喘止咳的功效，被评为“岭南十大佳果”之一。桃是主要引发人体过敏的水果之一，随着物流的发展将货架期较短的地域性桃品种发售全国各地，由桃过敏原引发的过敏反应也日益增多。水果过敏通常呈现轻微症状，例如口腔过敏综合征，但也有严重的症状，例如全身系统性过敏反应、荨麻疹、胃肠道症状等过敏反应，对过敏患者的生活质量有明显影响。因此，对水果过敏原的研究越来越重要。

2、专利文献cn109837282a公开了一种柑橘过敏原cits1.01抗原表达纯化、多克隆抗体制备及应用。该方法通过优化cits1.01基因原核表达序列，基因合成，构建过敏原cits1.01的原核表达体系，利用已表达纯化的cits1.01蛋白制备兔多克隆抗体anti-cits1.01，对诸如柑橘果皮、果肉中过敏原cits1.01含量进行检测，并可以利用光密度值衡量western blot印迹强弱的方法评价诸如柑橘果实可食用部分过敏原cits1.01潜在的致敏性。

3、专利文献cn113504089a公开了一种用于提取西红柿中过敏原的提取液及提取方法。该提取液包括：ph值为7.0～8.0的pbs缓冲液、0.5～1.5mm的edta、3～8mm的l-半胱氨酸、1x蛋白酶抑制剂、占所述的提取液的总质量的0.05％～0.2％的果胶酶。该提取液能够从西红柿中提取出更多不同分子量的致敏原蛋白，尤其是小分子量的致敏原蛋白，获得的西红柿过敏原提取液透明度高、过敏原以外的杂质含量低，能够直接用于体外检测试剂盒，具有较高的生物学活性及阳性检出率，本底干净。

4、专利文献cn118546211a公开了一种特征肽段组合及其制备方法和在桃过敏原蛋白检测中的应用。该特征肽段组合能够正确判定出待测样本中是否含有桃过敏原蛋白，以桃子含量计算，浓缩饮料中最低检出浓度为2.4g/100ml，果酱中最低检出浓度为5.1g/100g，具有质谱响应强度高、稳定性强的特点。

5、然而，目前鲜少有针对鹰嘴桃过敏原的研究。鹰嘴桃过敏原蛋白的制备研究对于深入探究其致敏机制、免疫检测分析具有重要意义。因此，非常有必要提供一种鹰嘴桃过敏原蛋白的制备方法及应用。

技术实现思路

1、为了解决现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供了一种鹰嘴桃过敏原蛋白q2及其应用。本发明利用制备的鹰嘴桃过敏原蛋白q2建立了鹰嘴桃过敏原蛋白q2的免疫检测方法，为鹰嘴桃过敏原的检测提供了一种快速、可靠、操作简便的检测方法。

2、为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

3、本发明提供了一种鹰嘴桃过敏原蛋白q2，所述鹰嘴桃过敏原蛋白q2的氨基酸序列如seq id no:1所示。

4、进一步地，所述鹰嘴桃过敏原蛋白q2的氨基酸序列为(seq id no:1)：mgvftyeseftseippprlfkafvldadnlvpkiapqaikhseilegdggpgtikkitfgegs qygyvkhkidsidkenhsysytliegdalgdnlekisyetklvaspsggsiikstshyhtk gdveikeehvkagkekasnlfklietylkghpdayn。

5、进一步地，所述鹰嘴桃过敏原蛋白q2的抗原表位为13～15(eip)、62～64(gsq)、77～79(ken)、95～96(nl)、124～125(kg)、128～130(eik)、155～157(hpd)。

6、进一步地，本发明提供了一种鹰嘴桃过敏原蛋白q2的编码基因，所述编码基因编码上述鹰嘴桃过敏原蛋白q2，所述鹰嘴桃过敏原蛋白q2的编码基因的核苷酸序列如seq idno:2所示。

7、进一步地，所述鹰嘴桃过敏原蛋白q2的编码基因的核苷酸序列为(seq id no:2)：

8、atgggtgtcttcacctacgagagcgaattcacctctgaaattccgccaccacgtctgtttaaagcgttcgttctggacgcggataatctggttccgaaaattgcaccgcaggcgatcaaacatagcgaaattctggaaggcgacggcggtccgggtaccatcaaaaagattaccttcggcgaaggtagccagtacggttacgtcaaacacaaaatcgacagcatcgacaaagagaaccacagctacagctataccctgattgaaggcgacgcactgggcgataacctggaaaaaatcagctatgaaaccaaactggttgcgagcccgtctggcggtagcattatcaaaagcaccagccattaccacaccaaaggcgacgtcgaaatcaaagaagaacatgtcaaagcgggcaaagaaaaagcgagcaacctgttcaaactgatcgaaacctacctgaaaggccatccggacgcatataac。

9、进一步地，本发明提供了一种鹰嘴桃过敏原蛋白q2重组载体，所述重组载体包含上述鹰嘴桃过敏原蛋白q2的编码基因。

10、进一步地，本发明提供了一种包含上述鹰嘴桃过敏原蛋白q2的编码基因或上述鹰嘴桃过敏原蛋白q2重组载体的表达系统，所述表达系统包括但不限于大肠杆菌表达系统或酵母表达系统。

11、另外，本发明还提供了所述鹰嘴桃过敏原蛋白q2在制备免疫学诊断试剂、食物过敏原诊断试剂或诊断试剂盒中的应用。

12、进一步地，本发明还提供了一种检测鹰嘴桃过敏原蛋白q2的试剂盒，所述试剂盒包含上述鹰嘴桃过敏原蛋白q2。

13、进一步地，所述试剂盒还包含鹰嘴桃过敏原蛋白q2抗体、酶标二抗、底物液、校准品和/或质控品。

14、进一步地，所述鹰嘴桃过敏原蛋白q2抗体由上述鹰嘴桃过敏原蛋白q2免疫兔子、小鼠或驼科动物制备获得，也可通过将含有过敏原蛋白q2的鹰嘴桃天然蛋白提取物免疫兔子、小鼠、驼科动物等动物制备获得，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程抗体。

15、进一步地，所述酶标二抗为hrp标记羊抗兔或小鼠或驼igg二抗。

16、进一步地，本发明还提供了所述检测鹰嘴桃过敏原蛋白q2试剂盒的免疫检测方法：

17、步骤s1、将鹰嘴桃过敏原蛋白q2包被于微孔板的微孔内，孵育、洗板、封闭、干燥；

18、步骤s2、将梯度稀释的鹰嘴桃过敏原蛋白q2或经前处理的待测样品加入化学发光板微孔内，并将鹰嘴桃过敏原蛋白q2的抗体加入微孔内，孵育、洗板；

19、步骤s3、将酶标二抗加入微孔内，孵育、洗板；

20、步骤s4、将底物液加入微孔内，振荡混匀，在一定波长下测定信号值；

21、步骤s5、以各标准品浓度孔信号值为纵坐标，以药物标准液浓度的log10值为横坐标，绘制免疫检测方法的标准曲线，根据建立的标准曲线分析样品中鹰嘴桃过敏原蛋白q2含量。

22、本发明利用蛋白质谱的方法从鹰嘴桃中筛选得到鹰嘴桃过敏原蛋白q2，利用外源表达技术制备鹰嘴桃过敏原蛋白q2，经过深入研究，发明人发现了鹰嘴桃过敏原蛋白q2的抗原表位为13～15(eip)、62～64(gsq)、77～79(ken)、95～96(nl)、124～125(kg)、128～130(eik)、155～157(hpd)。发明人将该鹰嘴桃过敏原蛋白q2应用于免疫学诊断试剂、食物过敏原诊断试剂或诊断试剂盒中，利用该鹰嘴桃过敏原蛋白q2建立了鹰嘴桃过敏原蛋白q2的免疫检测方法，可计算出待测样品中过敏原蛋白q2的含量。该免疫检测方法中鹰嘴桃过敏原蛋白q2的检测限为1.8μg/ml，半抑制浓度36.3μg/ml，线性范围为5.9～224.4μg/ml，抑制率与过敏原蛋白q2的对数值成显著的s型曲线关系，相关系数r2为0.997，可用于鹰嘴桃过敏原蛋白q2的快速检测。

23、总之，与现有技术相比，本发明提供的鹰嘴桃过敏原蛋白q2的免疫检测方法具有简便快速、特异性强和灵敏度较高的特点，可以直接检测食品中过敏原蛋白q2的含量或应用于鹰嘴桃过敏原的检测，为鹰嘴桃过敏原的检测提供了一种可靠、快捷的新方法。