FC-εCAR的制作方法

文档序号:40946078发布日期:2025-02-18 19:09阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基因修饰的nk细胞,该基因修饰的nk细胞包含:

2.如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其中,该nk细胞是nk-92细胞。

3.如前述权利要求中任一项所述的基因修饰的nk细胞,其中,该重组表达的细胞因子是il-2。

4.如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其中,该重组表达的细胞因子包含内质滞留序列。

5. 如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其中,该重组表达的cd16是高亲和力cd16变体,该cd16变体具有seq id no:35所示的氨基酸序列并具有158v突变。

6.如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其中,该细胞外结合结构域与肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、或患者特异性抗原及肿瘤特异性抗原特异性结合。

7.如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其中,该细胞外结合结构域与病毒特异性抗原特异性结合。

8.如权利要求7所述的基因修饰的nk细胞,其中,该病毒特异性抗原是hiv病毒、hpv病毒、rsv病毒、流感病毒、埃博拉病毒或hcv病毒的抗原。

9.如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其中,该基因修饰的nk细胞包含三顺反子核酸序列,该三顺反子核酸序列包含编码该重组表达的细胞因子的序列、编码该重组表达的cd16的序列和编码该重组表达的car的序列。

10.如权利要求9所述的基因修饰的nk细胞,其中,该三顺反子核酸序列被整合至该nk细胞的基因组中。

11.如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其用于治疗癌症或病毒感染。

12. 如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其中,该铰链结构域包含多肽,该多肽具有seq id no:3所示的氨基酸序列。

13. 如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其中,该铰链结构域包含多肽,该多肽具有seq id no:4所示的氨基酸序列。

14. 如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其中,该跨膜结构域包含多肽,该多肽具有seq id no:6所示的氨基酸序列。

15. 如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其中,该细胞外结合结构域具有seq idno:11所示的氨基酸序列,该铰链结构域具有seq id no:3或seq id no:4所示的氨基酸序列,且该跨膜结构域具有seq id no:6所示的氨基酸序列。

16.如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,其中,该重组表达的细胞因子是il-15。

17. 如权利要求5所述的基因修饰的nk细胞,其中,该重组表达的cd16具有seq id no:35所示的氨基酸序列。

18.一种重组核酸,该重组核酸包含:

19.如权利要求18所述的重组核酸,其中,该核酸是三顺反子rna。

20.如权利要求18所述的重组核酸,其中,该核酸是三顺反子dna。

21.如权利要求18所述的重组核酸,其中,该细胞因子是il-2。

22.如权利要求18所述的重组核酸,其中,该细胞因子包含内质滞留序列。

23. 如权利要求18所述的重组核酸,其中,该cd16是高亲和力cd16变体,该cd16变体具有seq id no:35所示的氨基酸序列并具有158v突变。

24.如权利要求18所述的重组核酸,其中,该细胞外结合结构域与肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、或患者特异性抗原及肿瘤特异性抗原特异性结合。

25.如权利要求18所述的重组核酸,其中,该细胞外结合结构域与病毒特异性抗原特异性结合。

26.如权利要求18所述的重组核酸,其中,car包含cd8铰链结构域或cd28跨膜结构域,或者其中car包含cd8铰链结构域和cd28跨膜结构域。

27.一种重组细胞,该重组细胞包含如权利要求18所述的重组核酸。

28.如权利要求27所述的重组细胞,其中,该细胞是细菌细胞。

29.如权利要求27所述的重组细胞,其中,该细胞是自体nk细胞。

30.如权利要求29所述的重组细胞,其中,该nk细胞是经基因修饰的nk-92细胞。

31.如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞在制备用于治疗有需要的患者的癌症的药物中的用途,其中向该患者施用治疗有效量的如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,从而治疗该癌症。

32.如权利要求31所述的用途,其中施用至少一种另外的治疗实体,该另外的治疗实体选自由以下组成的组:病毒癌症疫苗、细菌癌症疫苗、酵母癌症疫苗、n-803、抗体、干细胞移植物和肿瘤靶向细胞因子。

33.如权利要求31或32所述的用途,其中,该癌症选自白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症、重链病和实体瘤。

34.如权利要求33所述的用途,其中,白血病包括急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病和慢性白血病。

35.如权利要求34所述的用途,其中,慢性白血病包括慢性髓细胞(粒细胞)白血病和慢性淋巴细胞白血病。

36.如权利要求33所述的用途,其中,淋巴瘤包括霍奇金氏病和非霍奇金氏病。

37.如权利要求33所述的用途,其中,实体瘤包括肉瘤和癌。

38.如权利要求37所述的用途,其中,肉瘤和癌包括纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管腔内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮癌、尤因瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、肾母细胞瘤、宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤。

39.如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞在制备用于治疗有需要的患者的病毒感染的药物中的用途,其中向该患者施用治疗有效量的如权利要求1所述的基因修饰的nk细胞,从而治疗该病毒感染。

40.如权利要求39所述的用途,其中施用抗病毒药物。

41. 如权利要求31或39所述的用途,其中,向该患者以1 x 108至1 x 1011个细胞/m2患者体表面积施用所述基因修饰的nk细胞。


技术总结
重组NK细胞,特别是重组NK‑92细胞表达具有FcεRIγ的细胞内结构域的嵌合抗原受体(CAR)。值得注意的是,具有FcεRIγ的细胞内结构域的CAR构建体具有显著延长的表达持续时间和随时间显著延长的细胞毒性。CAR可以从RNA和DNA表达,优选作为进一步编码CD16和细胞因子以赋予自分泌生长支持的三顺反子构建体。有利地,此类构建体还能够实现重组蛋白的高水平转染和表达,并提供方便的选择标志物,以促进重组NK/NK‑92细胞的快速生产。

技术研发人员:劳伦·H·布瓦塞尔,汉斯·G·克林格曼,班纳吉·丹达帕特,希玛蒂·钦娜彭
受保护的技术使用者:免疫生物公司
技术研发日:
技术公布日:2025/2/17
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