一种鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物及制备方法与应用

本发明涉及一种鞣花酸的复合物，具体涉及一种鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物及制备方法与应用。

背景技术：

1、鞣花酸(ellagic acid，ea)，在自然界中主要以鞣花单宁或苷等缩合形式存在于植物中，是分子式为c14h6o8。鞣花酸广泛存在于各种植物中，尤其是葡萄、苹果、草莓、石榴等水果中，其在石榴中各部位中均有分布。它以其强大的抗氧化特性而闻名，能够中和自由基，减少氧化应激，从而保护细胞免受损伤。此外，鞣花酸还显示出抗炎、抗菌和抗癌的生物活性。研究表明，它能够抑制某些癌细胞的生长，并通过调节细胞信号通路来减缓肿瘤的发展。鞣花酸的这些特性使其成为研究和开发新型药物和保健品的有前景的优选物质。但是鞣花酸的溶解性较差，在胃肠道吸收效率低，往往需要肠道菌群转化为尿石酸，发挥生物活性。

2、石榴皮多糖是从石榴皮中提取的一种天然多糖类物质，近年来因其多样的生物活性而受到广泛关注。石榴皮多糖具有显著的抗氧化作用，能够清除体内自由基，减缓细胞老化。此外，它还显示出抗炎和免疫调节的特性，有助于减轻炎症反应并增强机体的免疫防御能力。在抗癌研究中，石榴皮多糖也被证明能够抑制某些癌细胞的增殖，并通过影响细胞周期和凋亡途径来对抗肿瘤的发展。新疆石榴品质优良、产量高，石榴种植业已经成为新疆部分地区的支柱产业。除了鲜食，部分石榴会被加工成产品售卖，但加工过程会产生大量的石榴皮副产物。通过提取石榴皮中的天然多糖，得到纯化后的石榴皮酸性多糖，能够实现综合利用石榴资源，提升新疆地区经济产业效益。

3、目前，利用通过制备鞣花酸-石榴皮多糖复合物，使得鞣花酸溶解度提高，增强鞣花酸的生物利用率的技术在国内外还尚无报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于，提供一种鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物及其制备方法，具体涉及一种提高鞣花酸溶解度及其利用率的方法及其制备方法制得的鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物。本发明提供的制备方法以石榴皮多糖为载体，提高鞣花酸的生物利用度发挥健康活性，属于功能活性小分子的保护技术。

2、本发明所提供的一种提高鞣花酸溶解度及利用率的方法，即一种鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物的制备方法具体为：将鞣花酸溶液与石榴皮酸性多糖溶液进行混合，在温度为15～35℃的中性或碱性条件下，反应0.5～2.0h，获得鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物溶液；

3、其中，石榴皮酸性多糖与鞣花酸的质量比为1:1～10:1。

4、该质量比具体指反应过程中，所述鞣花酸溶液和石榴皮酸性多糖溶液中的石榴皮酸性多糖与鞣花酸溶液的质量比。

5、其中，所述鞣花酸溶液为乙醇(80％)，与石榴皮酸性多糖溶液的溶剂为水。

6、优选的，所获得鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物溶液还可以进一步冻干制成鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物粉末进行储存。

7、本发明提供一种提高鞣花酸溶解性、增强其生物可及性的方法。通过石榴皮酸性多糖与鞣花酸进行相互作用，从而改善鞣花酸的特性。通过制备鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物，二者协同增效，使得鞣花酸可以发挥健康功效，为开发鞣花酸相关保健食品及营养强化食品提供思路。

8、其中，所述石榴皮酸性多糖优选采用如下方法制得：

9、采用deae纤维素-52法对石榴皮粗多糖溶液进行纯化，得到石榴皮酸性多糖，收集石榴皮酸性多糖；

10、优选的，将1～10mg/ml的石榴皮粗多糖溶液，采用deae纤维素-52法进行纯化石榴皮酸性多糖，然后冷冻干燥获得石榴皮酸性多糖。

11、其中，石榴皮粗多糖具体采用如下方法制得：采用-20℃冷冻石榴皮，冻干后粉碎，得到石榴皮粉末；将石榴皮粉用超纯水溶解，采用复合酶提取法进行提取，然后纯化获得石榴皮粗多糖溶液。

12、优选的，具体采用如下方式：

13、1、取无霉变的石榴皮，冷冻干燥用粉碎机粉碎；

14、2、将石榴皮粉溶于超纯水中，采用果胶酶复合纤维素酶进行提取，再进行脱脂、脱蛋白、脱色及透析的纯化操作，即可。

15、优选的，所述石榴皮粗多糖溶液的浓度为1～10mg/ml。

16、本发明采用deae纤维素-52法分级可以分别获得中性多糖和酸性多糖。

17、本发明进一步提出的，所述鞣花酸溶液的浓度为0～0.5mg/ml；优选为0.1～0.5mg/ml；最优选为0.1mg/ml。

18、本发明进一步提出的，所述石榴皮酸性多糖溶液的浓度为0～1mg/ml；优选为0.1～0.8mg/ml；最优选为0.6mg/ml。

19、本发明进一步提出的，所述反应的温度为室温；如20～30℃，尤其优选为25℃。

20、本发明进一步提出的，所述反应的ph值为7.0～8.0；优选为7.0～7.5。本发明优选在中性或弱碱条件下进行反应。

21、本发明提供的制备方法中，除了优化反应浓度和反应条件外，发现当加入的石榴皮酸性多糖与鞣花酸的质量比为6时，所获得的鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物的效果尤其显著。在荧光滴定实验中，随着体系中石榴皮酸性多糖添加量的递增，鞣花酸发射峰的荧光强度逐渐被淬灭。该结果表明石榴皮酸性多糖与鞣花酸相互作用形成了非荧光性的复合物，使得其荧光降低。经过拟合发现石榴皮酸性多糖与鞣花酸之间的结合位点为5.34±0.38。

22、由于石榴皮酸性多糖的分子量远大于鞣花酸，及相同质量下石榴皮酸性多糖的浓度要远小于鞣花酸。由于鞣花酸的水溶性较差，复合物中鞣花酸质量要比酸性石榴皮多糖少。本发明优选所述石榴皮酸性多糖与鞣花酸的质量比为1:1～10:1。

23、优选的，石榴皮酸性多糖与鞣花酸的质量比为1:1～6:1；尤其是6：1。

24、本发明提供一种优化方案，所述制备方法包括如下步骤：

25、1)制备浓度为0～0.5mg/ml的鞣花酸溶液；

26、2)制备浓度为0～1mg/ml的石榴皮酸性多糖溶液；

27、3)将鞣花酸溶液缓慢滴入石榴皮酸性多糖溶液中，在室温中性或弱碱性的条件下，缓慢搅拌反应0.5～2.0h，即得鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物溶液；

28、其中，石榴皮酸性多糖与鞣花酸的质量比为1:1～6:1。

29、在实际过程中，搅拌时间可根据溶解情况进行调整；保证其完全溶解。

30、采用上述制备方法制得的鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物溶液，根据荧光光谱结果，经过拟合发现石榴皮酸性多糖与鞣花酸之间的结合位点为5.34±0.38。可将鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物溶液进行冻干处理，获得鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物粉末。

31、本发明所述的制备方法还包括过滤；

32、所述过滤具体为：采用0.45μm的一次性针式过滤膜(有机系)进行纯化及除菌。

33、过滤的目的除了纯化之外，还有除菌的作用。

34、采用本发明方法制备的鞣花酸-石榴皮酸性多糖复合物澄清透明，具有较好的抗氧化能力，鞣花酸的溶解性和生物可及性显著提高。石榴皮酸性多糖作为载体，可以保护鞣花酸，并促进鞣花酸发挥自身健康功效。为鞣花酸营养强化的开发及应用，提供理论及技术上的支持与引导。另外，本技术对于利用石榴副产物中的功能性成分开发相关功能性食品和保健品，增加石榴产业的附加值具有较高的应用前景及社会效益。