多瘤病毒复制的抑制

本发明涉及特异性结合多瘤病毒rna的分子。在一些实施方案中，所述分子包含识别具有多瘤病毒t抗原编码区的前体mrna的反义寡核苷酸。多瘤病毒的例子是人类多瘤病毒，如jc病毒(jcv)、bk病毒(bkv)或merkel细胞病毒(mcv)。

背景技术：

1、多瘤病毒是小型无包膜双链dna病毒，其天然宿主通常是哺乳动物和鸟类。成年感染大多无症状，但当免疫系统受损时，可能会变成病理性感染。人类多瘤病毒的非限制性例子是bk病毒、jc病毒和merkel细胞病毒。

2、jcv和bkv都是机会性病原体，感染人类的幼儿期人群(leploeg, m.d. et. al.,clinical infectious diseases, 2001)。成人的血清阳性率很高。这两种病毒都被认为持续潜伏在宿主的肾细胞中(wunderink, h.f. et. al., american journal oftransplantation, 2017)。例如，在免疫抑制的个体中可以发生再激活(wunderink, h.f.et. al., american journal of transplantation, 2017; parajuli, s. et. al.,clinical transplantation, 2018; gard, l. et. al., plos one, 2017)。

3、多瘤病毒具有共同的基因组结构。它们具有在感染周期的早期和晚期都表达的基因。早期和晚期基因均产生rna，所述rna通过差异剪接可翻译多种蛋白质。如图1所示，晚期rna通常编码三种衣壳蛋白，而早期基因编码小和大t抗原，通常还有一个或多个其他选择性剪接的编码区(helle, f. et. al., viruses, 2017)。

4、wo2015/042466描述了一种基于反义寡核苷酸的方法来抑制jc病毒的复制和增殖。其中公开的反义寡核苷酸可以是寡脱氧核糖核苷酸(odn)，也可以是嵌合寡核苷酸（其具有odn内部，侧翼是一个或多个具有核酸酶抗性骨架的核苷酸。后者使rna:寡核苷酸杂交体对rnaseh的作用敏感。所述脱氧核糖核苷酸内部具有至少4个脱氧核糖核苷酸，并且其两侧是具有2’-糖修饰的核苷酸的核酸酶抗性区域。所述反义寡核苷酸针对jc病毒mrna中存在的特定序列。

5、在一些实施方案中，本发明提供了能够调节多瘤病毒t抗原前体mrna剪接的反义寡核苷酸。反义寡核苷酸可具有与所述前体mrna中的剪接供体位点和/或剪接受体位点互补的序列。反义寡核苷酸可具有与一个或多个外显子相邻内含子核碱基互补的序列(见图2)。在一些实施方案中，所述反义寡核苷酸使得所述反义寡核苷酸与其多瘤病毒t抗原前体mrna靶标的双链体对rnaseh的作用具有抗性。

技术实现思路

1、本发明提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其包含这样的序列，该序列是多瘤病毒大t抗原前体mrna的至少12个核碱基的连续延伸的反向互补序列，并且所述反义寡核苷酸可以调节所述大t抗原前体mrna在细胞中的剪接(见图1)。

2、本发明的调节剪接的反义寡核苷酸通常需要至少17个、优选至少18个、更优选至少19个、更优选至少20个与多瘤病毒大t抗原前体mrna互补的核碱基的连续延伸。

3、本发明还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其包含这样的序列，该序列是多瘤病毒大t抗原前体mrna的至少12个核碱基的连续延伸的反向互补序列，该延伸包含所述前体mrna中的剪接供体、剪接受体序列或其组合。所述剪接供体或受体序列优选为多瘤病毒大t抗原剪接受体或多瘤病毒大t抗原剪接供体序列。

4、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其与获自nc_001538的核苷酸4537-4596或4881-4940具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

5、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_001699的区域4397-4456或区域4741-4800中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

6、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_009238的区域4299-4358或区域4686-4745中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

7、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_009539的区域4477-4536或区域4876-4935中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

8、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_010277的区域4693-4752或区域5124-5183中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

9、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_014406的区域4264-4323或区域4654-4713中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

10、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_014407的区域4272-4331或区域4677-4736中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

11、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_014361的区域4352-4411或区域4765-4824中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

12、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_015150的区域4408-4467或区域4760-4819中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

13、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_018102的区域4303-4362或区域4658-4717中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

14、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_020106的区域4159-4218或区域4504-4563中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

15、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_020890的区域4392-4451或区域4791-4850中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

16、还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_024118的区域4471-4530或区域4859-4918中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。

17、如本文所述的反义寡核苷酸优选包含以下序列的至少12个连续核碱基：seq idno: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no: 5、seq id no: 6、seq idno: 7、seq id no: 8、seq id no: 9、seq id no: 10、seq id no: 11、seq id no: 12、seqid no: 13、seq id no: 14、seq id no: 15、seq id no: 16、seq id no: 17、seq id no:18、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24、seqid no: 25、seq id no: 26或seq id no: 27，其中所述至少12个核苷酸优选包含靶标前体mrna的剪接供体位点、剪接受体位点或其组合（即相应多瘤病毒的大t抗原前体mrna的剪接供体/受体）的反向互补序列。在优选的实施方案中，如本文所述的反义寡核苷酸包含以下序列的至少17个、优选至少18个、优选至少19个、更优选至少20个连续核碱基：seq id no:1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no: 5、seq id no: 6、seq id no:7、seq id no: 8、seq id no: 9、seq id no: 10、seq id no: 11、seq id no: 12、seq idno: 13、seq id no: 14、seq id no: 15、seq id no: 16、seq id no: 17、seq id no: 18、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24、seq idno: 25、seq id no: 26或seq id no: 27，优选seq id no: 1、seq id no: 2、seq id no:3、seq id no: 4、seq id no: 6、seq id no: 7、seq id no: 8、seq id no: 9、seq id no:10、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24或seqid no: 25，优选seq id no: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no:20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24或seq id no: 25，其中所述核苷酸优选包含靶标前体mrna的剪接供体位点、剪接受体位点或其组合（即相应多瘤病毒的大t抗原前体mrna的剪接供体/受体）的反向互补序列。反义寡核苷酸可能与所示的序列有一个错配，所述错配不在连续延伸的起点或终点，如具有17个核苷酸的连续延伸的aon，例如在位置1或17具有错配，则其实际上具有16个核苷酸的连续延伸。

18、还提供了抑制多瘤病毒在细胞中复制的方法，该方法包括向被所述多瘤病毒感染的细胞提供对多瘤病毒特异的本发明的反义寡核苷酸。

19、本发明还提供了一种制备移植用移植物的方法，该方法的特征在于供体细胞，优选供体肾细胞，具有对多瘤病毒特异的本发明的反义寡核苷酸。

20、还提供了一种治疗受试者中多瘤病毒感染的方法，该方法包括向有需要的个体施用对多瘤病毒特异的本发明的反义寡核苷酸。

21、还提供了一种给个体施用反义寡核苷酸的方法，用于与所述个体的细胞中的互补rna序列进行杂交，所述方法的特征在于所述反义寡核苷酸是包含第一区域和第二区域的嵌合的反义寡核苷酸，并且其中所述第一区域包含一个或多个脱氧核糖核苷酸，并且所述第二区域包含至少一个2’-o-(2-甲氧基-乙基)核苷酸(见图7)。

22、还提供了一种抑制多瘤病毒在细胞中复制的方法，所述方法包括向所述细胞提供长度为12至30个核苷酸的反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸包含多瘤病毒大t抗原前体mrna的至少12个核碱基的连续延伸的反向互补序列，并且所述反义寡核苷酸可以调节所述大t抗原前体mrna的剪接。所述反义寡核苷酸优选是本文所述的反义寡核苷酸，优选是本文所述或修饰的seq id no: 1-25的反义寡核苷酸。

23、发明详述术语“反义寡核苷酸”是指核糖核酸(rna)或脱氧核糖核酸(dna)的寡聚体或多聚体，或其模拟物、嵌合体、类似物和同系物。该术语包括由天然存在的核碱基、糖和共价内部核苷(骨架)连接组成的反义寡核苷酸，以及具有功能相似的非天然存在部分的反义寡核苷酸。这种经修饰或取代的反义寡核苷酸通常比天然形式更优选，因为其具有所需的性质，例如细胞摄取增强、对靶核酸的亲和力增强以及在核酸酶存在下的稳定性增加(见图7)。

24、本文所述的反义寡核苷酸优选为单链反义寡核苷酸。

25、本发明的反义寡核苷酸还包括修饰的反义寡核苷酸，其中不同的碱基存在于反义寡核苷酸的一个或多个核苷酸位置。例如，如果第一核苷酸是腺苷，则可以产生在该位置含有胸苷、鸟苷或胞苷的修饰的反义寡核苷酸。这可以在所述反义寡核苷酸的任何位置进行。然后使用本文所述的方法测试这些反义寡核苷酸，以确定它们抑制t抗原rna的能力。

26、本发明的反义寡核苷酸可以与易感细胞感染时产生的多瘤病毒rna杂交。因此，所述反义寡核苷酸包含的序列是靶rna序列(的一部分)的反向互补序列。所述反义寡核苷酸可以以单链、双链、部分单链或环状寡聚化合物的形式引入。在优选的实施方案中，所述反义寡核苷酸是单链反义寡核苷酸。

27、所述反义寡核苷酸可以连接到一个或多个其他化学结构上。所述其他结构可以是肽或蛋白质、糖、脂质或其他化学结构。所述其他结构也可以是一个或多个其他核苷酸。所述一个或多个其他核苷酸可以执行不同于反义部分的功能。例如，与另一核酸靶序列杂交。所述其他结构可以执行一个或多个不同功能中的任何一个。这种功能的非限制性例子是反义寡核苷酸的稳定性、生物利用度的增加、细胞渗透的增加、核传递的增加、靶向特定细胞等。

28、一旦引入系统，本发明的所述反义寡核苷酸可引发一种或多种酶或结构蛋白的作用，以实现靶核酸的修饰。本领域已知“dna样”的单链反义寡核苷酸引发rnase h，rnase h是裂解rna：dna双链体的rna链的细胞内核酸酶。因此，rnase h的激活导致rna靶标的切割。这是提高反义寡核苷酸介导的基因表达抑制效率的一种方法。在实施方案中，本发明的反义寡核苷酸不将rnase h的作用引入靶rna/反义寡核苷酸杂交体，也不设计成如此。对于其他核糖核酸酶，例如rnase iii和核糖核酸酶l家族的酶，也假定了类似的作用。本文所述的反义寡核苷酸优选具有赋予反义寡核苷酸和靶rna/反义寡核苷酸杂交体核酸酶抗性的修饰。本文“反义寡核苷酸”的定义中特别排除的是包含内部或外部“凸起”的核酶，所述凸起不与靶序列杂交。

29、根据本发明的反义寡核苷酸包含12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基(即约12至30个并包括30个相连的核苷)。本领域普通技术人员将理解，本发明包含了长度为12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核碱基的反义寡核苷酸。本领域普通技术人员将理解，这包含了长度为15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核碱基的反义寡核苷酸。本领域普通技术人员将理解，这包含了长度为17、18、19、20、21、22、23、24、25或26个核碱基的反义寡核苷酸。反义寡核苷酸通常长度为18、19、20、21或22个核碱基。本文所述的反义寡核苷酸优选长度为17、18、19、20、21或22个核苷酸。

30、在一个实施方案中，反义寡核苷酸包含寡核苷酸序列的至少12个连续核碱基，所述寡核苷酸序列在本文中被具体公开。包括选自示例性反义寡核苷酸中的至少十二(12)个连续的核碱基的延伸的长度为12-30个核碱基的反义寡核苷酸，也被认为是合适的反义寡核苷酸。

31、反义寡核苷酸包含这样的核碱基序列，所述核碱基序列是靶rna序列的反向互补序列。本文所述的反义寡核苷酸包含至少12个核碱基的延伸，所述延伸的序列是靶rna的至少12个连续核碱基序列的反向互补序列。所述延伸也被称为互补区或杂交区。本领域普通技术人员将理解，本发明包含了具有12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核碱基长的互补区的反义寡核苷酸。本领域普通技术人员将理解，本发明包含了具有15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核碱基长的互补区的反义寡核苷酸。本领域普通技术人员将理解，本发明包含了具有17、18、19、20、21、22、23、24、25或26个核碱基长的互补区的反义寡核苷酸。反义寡核苷酸通常具有长度为18、19、20、21或22个核碱基的互补区。本文所述的反义寡核苷酸优选具有长度为17、18、19、20、21或22个核碱基的互补区。

32、反义寡核苷酸的长度优选与互补区的长度相称。

33、本文所述反义寡核苷酸的靶序列是多瘤病毒t抗原前体mrna的一部分。前体mrna是一种未成熟的单链信使核糖核酸(mrna)。多瘤病毒t抗原前体mrna是由多瘤病毒dna模板在细胞核中通过转录合成的。所述前体mrna包含一个或多个内含子，这些内含子在前体mrna成熟为mrna的过程中被剪切出来。所述剪接过程从转录本中去除内含子，并将外显子连接在一起。内含子的两侧通常具有供体位点(内含子的5’端)和受体位点(内含子的3’端)。所述剪接位点是剪接所必需的，通常在内含子的5’端包含几乎不变的gu序列，在内含子的3’端包含具有几乎不变的ag序列的剪接受体位点。所述gu和ag序列以及间插序列被从前体mrna中被剪切出来。多瘤病毒t抗原前体mrna的一个特征是，它可以选择性剪接或不剪接，导致产生至少两个，通常是3、4或5个不同剪接的mrna(见图1)。病毒的繁殖取决于病毒基因组的可用性、病毒蛋白的存在、细胞机制，特别是不同阶段和组分之间的微妙相互作用。病毒rna的剪接过程是调节病毒繁殖过程的重要方法，它会影响某些产物在细胞中形成的水平以及可能也影响其形成时机。在本发明中，令人惊讶地发现，将本发明的寡核苷酸导向剪接供体或剪接受体位点以剪接大t抗原mrna不仅对t抗原mrna的产生有深远的影响，而且对被感染细胞产生的衣壳蛋白水平和病毒的产生也有深远的影响。

34、本文所述反义寡核苷酸的靶序列包含多瘤病毒t抗原前体mrna的剪接供体位点、多瘤病毒t抗原前体mrna的剪接受体位点或其组合。靶序列通常包含12个连续核碱基的延伸，该延伸包含多瘤病毒t抗原前体mrna的剪接供体位点或多瘤病毒t抗原前体mrna的剪接受体位点。除剪接供体或剪接受体序列外，所述连续序列优选包含内含子序列。在优选的实施方案中，所述连续序列包含与剪接供体或剪接受体序列相邻的一个或两个内含子核碱基。在优选的实施方案中，所述连续序列包含与剪接供体或剪接受体序列相邻的3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个内含子核碱基。在优选的实施方案中，所述连续序列包含与剪接供体或剪接受体序列相邻的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个外显子核碱基。所述反义寡核苷酸优选包含的序列是靶标前体mrna的连续核碱基序列的反向互补序列。内含子、剪接位点和外显子核碱基的总数不超过反义寡核苷酸中核碱基的总数。

35、所述靶序列优选包含剪接供体序列或剪接受体序列，它们定义了内含子，内含子另外被剪切出去以产生编码特定多瘤病毒大t抗原的mrna(见图8)。

36、本文所述反义寡核苷酸的序列包含剪接供体序列或剪接受体序列的互补序列，所述剪接供体序列或剪接受体序列定义了内含子，内含子被另外剪切出去以产生编码特定多瘤病毒大t抗原的mrna(见图8)。

37、在一个优选的实施方案中，第一寡核苷酸的靶序列是下面针对相应病毒指出的3’剪接位点靶区域中的序列。在一个优选的实施方案中，另一寡核苷酸的靶序列是下面针对相应病毒指出的5’剪接位点靶区域中的序列。针对下述区域中靶序列的寡核苷酸包含所示序列中剪接供体或剪接受体的互补序列。如果在本文所述的方法中使用了一种以上的aon，则优选的是，所述aon针对同一病毒的靶序列。

38、

39、第一列包含病毒名称的缩写。病毒的原型序列用序列数据库中该序列的收录号表示。第三和第四列指定了病毒原型序列中包含剪接供体(第4列)或剪接受体(第3列)的区域，其中本文所述的aon可包含互补区。

40、根据本发明的反义寡核苷酸可以调节受感染细胞中t抗原前体mrna的剪接。不受理论限制，据信本文所述的反义寡核苷酸抑制其靶向的剪接位点的使用。由此导致的大t抗原产生的减少影响了衣壳蛋白的表达，从而影响了病毒的产生(见图4-6)。不受理论的束缚，据信由本发明的反义寡核苷酸诱导的t-抗原特异性剪接产物的失衡对病毒繁殖的影响比通过rnai样方法减少t-抗原mrna特异性mrna更显著。

41、在本发明的上下文中，“杂交”是指核酸互补链的配对。在本发明中，优选的配对机制涉及到氢键，其可以是互补核苷或核苷酸碱基(核碱基)之间的watson-crick、hoogsteen或反向hoogsteen氢键。例如，腺嘌呤和胸腺嘧啶是互补的核碱基，它们通过氢键的形成进行配对。杂交可以在不同的环境下发生。互补链的杂交通常随着序列的长度而提高。两条链的特异性杂交是通过12个或更多的互补核碱基的连续延伸来完成的。反义寡核苷酸的序列可以，但不一定，与其待特异性杂交的靶序列100%互补。此外，反义寡核苷酸可以在一个或多个片段上杂交，使得间插片段或相邻片段不参与杂交事件。在本发明的一个实施方案中，本发明的反义寡核苷酸包含与靶标前体mrna内的靶区域的至少70%、或至少75%、或至少80%、或至少85%的序列互补性。在其他实施方案中，本发明的反义寡核苷酸包含与靶标前体mrna内的靶区域的至少90%的序列互补性，甚至包含至少95%或至少96%的序列互补性。例如，反义化合物的20个核碱基中有18个与靶区域互补，并因此可以特异性杂交，这代表互补性为90%。当18个核苷酸的反义寡核苷酸具有多瘤病毒大t抗原前体mrna的至少12个核碱基的连续延伸的反向互补序列时，剩余的6个互补核碱基可以与这12个核碱基成簇，也可以不与这12个核碱基邻接。反义寡核苷酸与靶标前体mrna的区域的互补百分比可以常规使用本领域已知的blast程序(基本的本地比对搜索工具)和powerblast程序(altschulet al.,j. mol. biol., 1990, 215, 403-410; zhang和madden, genome res., 1997, 7,649-656)来确定。由于核苷酸的数量总是一个整数，实际的百分比可能不是精确的90%或者不是精确的96%。所述连续序列优选与目标核酸序列没有或只有一个核苷酸错配。

42、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_001538的区域4537-4596或区域4881-4940中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_001538的核苷酸4537-4596或4881-4940具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。在一个优选的实施方案中，所述寡核苷酸的长度为12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基，并且优选包含如seq id no: 1、seq id no:2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no: 5、seq id no: 20、seq id no: 21、seq idno: 22、seq id no: 23、seq id no: 24、seq id no: 25、seq id no: 26或seq id no: 27所示的序列；优选包含如seq id no: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seqid no: 6、seq id no: 7、seq id no: 8、seq id no: 9、seq id no: 10、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24或seq id no: 25所示的序列；优选包含如seq id no: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no:20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24或seq id no: 25所示的序列。

43、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_001699的区域4397-4456或区域4741-4800中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_001699的核苷酸4397-4456或4741-4800具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

44、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_009238的区域4299-4358或区域4686-4745中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_009238的核苷酸4299-4358或区域4686-4745具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

45、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_009539的区域4477-4536或区域4876-4935中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_009539的核苷酸4477-4536或区域4876-4935具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

46、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_010277的区域4693-4752或区域5124-5183中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_010277的核苷酸4693-4752或区域5124-5183具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

47、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_014406的区域4264-4323或区域4654-4713中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_014406的核苷酸4264-4323或区域4654-4713具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

48、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_014407的区域4272-4331或区域4677-4736中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_014407的核苷酸4272-4331或区域4677-4736具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

49、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_014361的区域4352-4411或区域4765-4824中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_014361的核苷酸4352-4411或区域4765-4824具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

50、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_015150的区域4408-4467或区域4760-4819中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_015150的核苷酸4408-4467或区域4760-4819具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

51、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_018102的区域4303-4362或区域4658-4717中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_018102的核苷酸4303-4362或区域4658-4717具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

52、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_020106的区域4159-4218或区域4504-4563中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_020106的核苷酸4159-4218或区域4504-4563具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

53、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_020890的区域4392-4451或区域4791-4850中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_020890的核苷酸4392-4451或区域4791-4850具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

54、长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自nc_024118的区域4471-4530或区域4859-4918中的核苷酸具有至少80%的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性，优选与获自nc_024118的核苷酸4471-4530或区域4859-4918具有至少90%的互补性。所述12至30个，优选17、18、19或20至30个核碱基优选与靶标前体mrna的至少12、13、14、15、16、17、18、19、30、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的延伸互补。

55、如本文所述的反义寡核苷酸优选包含以下序列的至少12个连续核碱基：seq idno: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no: 5、seq id no: 6、seq idno: 7、seq id no: 8、seq id no: 9、seq id no: 10、seq id no: 11、seq id no: 12、seqid no: 13、seq id no: 14、seq id no: 15、seq id no: 16、seq id no: 17、seq id no:18、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24、seqid no: 25、seq id no: 26或seq id no: 27，优选seq id no: 1、seq id no: 2、seq idno: 3、seq id no: 4、seq id no: 6、seq id no: 7、seq id no: 8、seq id no: 9、seq idno: 10、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24或seq id no: 25，优选seq id no: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seqid no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24或seq id no:25，其中所述至少12个核苷酸优选包含靶标前体mrna的剪接供体位点、剪接受体位点或其组合（即相应多瘤病毒的大t-抗原前体mrna的剪接供体/受体）的反向互补序列。所述反向互补序列存在于相应seq id中。

56、本发明进一步涉及这样的反义寡核苷酸，其包含如下所述核苷酸序列的至少12个连续核碱基(见图3和图10):

57、5′ accucugagcuacuccaggu 3′ seq id no: 1;

58、5′ acaaaccucugagcuacucc 3′ seq id no: 2;

59、5′ cagcacaaaccucugagcua 3′ seq id no: 3;

60、5′ uccauagguuggcaccuaga 3′ seq id no: 4;

61、5′ uguuccauagguuggcaccu 3′ seq id no: 5;

62、5’ aaaccucugagcuacuccag 3'seq id no: 20;

63、5’ gcacaaaccucugagcuacu 3'seq id no: 21;

64、5’ aucagcacaaaccucugagc 3'seq id no: 22;

65、5’ aaaucagcacaaaccucuga 3'seq id no: 23;

66、5’ gaaaaucagcacaaaccucu 3'seq id no: 24;

67、5’ aggaaaaucagcacaaaccu 3'seq id no: 25;

68、5’ cauagguuggcaccuauaaa 3'seq id no: 26或

69、5’ uuccauagguuggcaccuau 3'seq id no: 27。

70、如本文所述的反义寡核苷酸优选包含以下序列的至少13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基：seq id no: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no:5、seq id no: 6、seq id no: 7、seq id no: 8、seq id no: 9、seq id no: 10、seq idno: 11、seq id no: 12、seq id no: 13、seq id no: 14、seq id no: 15、seq id no: 16、seq id no: 17、seq id no: 18、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq idno: 23、seq id no: 24、seq id no: 25、seq id no: 26或seq id no: 27，优选seq idno: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no: 6、seq id no: 7、seq idno: 8、seq id no: 9、seq id no: 10、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24或seq id no: 25，优选seq id no: 1、seq id no: 2、seqid no: 3、seq id no: 4、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no:23、seq id no: 24或seq id no: 25，其中所述至少13、14、15、16、17、18、19或20个核苷酸优选各自包含靶标前体mrna的剪接供体位点、剪接受体位点或其组合的反向互补序列。本文所指示的核碱基可以被具有相同碱基配对活性（种类上相同但量上不一定相同）的不同核碱基取代。这种替代物的一个例子是胸腺嘧啶碱基作为尿嘧啶的取代。其他核碱基可以替换为具有相同碱基配对活性的替代物。

71、另一种替代物是与任何碱基配对的碱基。所述碱基的一个例子是肌苷。相较于与靶标rna中的适当碱基配对的碱基，这种碱基通常不会增加所述寡核苷酸的特异性。如本领域技术人员所知，寡核苷酸可以在一定程度上适应这一点。如果需要相同的特异性，可以向寡核苷酸中加入额外的选择性碱基，例如但不限于每个肌苷的一个额外的选择性碱基或其他非选择性碱基。

72、所述反义寡核苷酸优选包含如下所述核苷酸序列的至少12个连续核碱基(见图9)：

73、

74、

75、 在一个实施方案中，本文所述的反义寡核苷酸包含至少一个骨架修饰。在一个实施方案中，反义寡核苷酸包含硫代磷酸酯修饰。所述硫代磷酸酯(ps)修饰用一个硫原子代替寡核苷酸磷酸骨架中的非桥接氧。这种修饰使得核苷酸间连接对核酸酶降解具有抗性。硫代磷酸酯键可以引入到寡核苷酸5’或3’末端的最后3至5个核苷酸之间，以抑制核酸外切酶降解(见图7)。在整个寡核苷酸中包含硫代磷酸酯键也有助于减少核酸内切酶的攻击(见图3)。

76、在另一个实施方案中，所述反义寡核苷酸包含吗啉代(磷酸二酰胺吗啉代)修饰。吗啉类化合物有标准的核酸碱基，这些碱基与通过磷酸二酰胺基而不是磷酸酯彼此连接的吗啉环结合。吗啉类不会引发其目标rna分子的降解。

77、在一个实施方案中，所述反义寡核苷酸在核苷的核糖部分的2’碳上包含至少一个糖修饰。在一个实施方案中，所述反义寡核苷酸包含至少一个2’糖修饰。prakash(2011;chem. biodivers. sept 8(9): 1616-1641. doi 10.1002/cbdv.201100081)给出了用于反义目的的糖修饰的综述。如图7所示，优选的2’糖修饰是2’-烷氧基或2’-烷氧基烷氧基修饰，更优选2’-甲氧基乙氧基修饰。优选的修饰是2'-o-甲基（2'-o-me）、2'-o-甲氧基乙基（2'-moe）、2'-s-约束乙基（2'-cet）和锁核酸（lna）。

78、其他修饰包括肽核酸(pna)。

79、在一些实施方案中，给定反义寡核苷酸中的所有位置均被统一修饰。在其他实施方案中，给定反义寡核苷酸中的某些位置没有被统一修饰。事实上，一个以上的上述修饰可以掺入单个反义寡核苷酸中，或者甚至掺入反义寡核苷酸中的单个核苷中。本发明还包括这样的反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸为嵌合反义寡核苷酸。嵌合反义寡核苷酸是包含两个或更多个化学上不同的区域的反义寡核苷酸，每个区域由至少一个核苷酸组成。这些反义寡核苷酸包含至少一个区域，其中反义寡核苷酸被修饰以赋予所述反义寡核苷酸以增加的核酸酶降解抗性、增加的细胞摄取和/或增加的对靶核酸的结合亲和力。

80、反义寡核苷酸可以作为能够切割rna:dna或rna:rna杂交体的酶的底物。通常这种可能性是通过在反义寡核苷酸内部包含一个区域来介导的。这种反义寡核苷酸也被称为“缺口体（gapmer）”。缺口体是一种嵌合反义寡核苷酸，其含有典型的脱氧核糖核苷酸单体中心嵌段，其长度足以诱导rnaseh切割。有效的rnase切割需要4个或更多的脱氧核糖核苷酸的延伸。通常这样的延伸具有9个或更多的脱氧核糖核苷酸。在本发明中，优选所述反义寡核苷酸不包含能够作为酶底物的区域，所述酶能够切割rna:dna或rna:rna杂交体。

81、所述反义寡核苷酸优选包含修饰的核苷酸，例如硫代磷酸酯修饰的核碱基和/或2’糖修饰，从而提供对核酸酶无意降解的抗性。如图7所示，优选的2’糖修饰是2’-烷氧基或2’-烷氧基烷氧基修饰，更优选2’-甲氧基乙氧基修饰。优选的2'糖修饰包括2'-o-甲基（2'-o-me）、2'-o-甲氧基乙基（2'-moe）、2'-s-约束乙基（2'-cet）和锁核酸（lna）。骨架中可能整个含有硫代磷酸酯。本发明还包括反义寡核苷酸的其他构型。所述反义寡核苷酸优选包含经修饰的核苷酸，以提供靶标rna对核酸酶无意降解的抗性，例如硫代磷酸酯修饰的核碱基和/或2’糖修饰。这种反义寡核苷酸在本发明的范围内。因此，本文公开的寡核苷酸优选具有对靶标rna提供核酸酶抗性的区域。由所述反义寡核苷酸和靶标rna形成的双链体对rnase h的作用不敏感。

82、在一个优选的实施方案中，所述反义寡核苷酸包含一个或多个具有修饰的聚合物骨架的核碱基。所述修饰的聚合物骨架优选是本文别处所示的修饰骨架。在一个优选实施方案中，所述修饰的聚合物骨架包含2′-o-甲基(2′-o-me)、2′-o-甲氧基乙基(2′-moe)、2′-s-约束乙基(2′-cet)、锁核酸(lna)、肽核酸(pna)或吗啉代(pmo)核苷酸。在一个优选的实施方案中，所述修饰的聚合物骨架中的所有核苷酸包含修饰的糖部分，优选在2’碳上。在一个优选的实施方案中，连接两个核苷酸的磷酸基团被修饰成硫代磷酸酯基团。优选地，在修饰的聚合物骨架中，所有的磷酸二酯键都是硫代磷酸酯键。

83、人类多瘤病毒可分为几个属，称为α、β和δ属(helle, f. et. al., viruses,2017)。在优选的实施方案中，多瘤病毒是α或β病毒，优选β病毒。下表列出了几种人类多瘤病毒。在优选的实施方案中，多瘤病毒是bk多瘤病毒（或bk病毒，在本技术中也称为bkpyv或bkv）、jc多瘤病毒（或jc病毒，在本技术中也称为jcv）或merkel细胞多瘤病毒（mc多瘤病毒、mc病毒，或在本技术中也称为mcv）。在优选的实施方案中，多瘤病毒是bk病毒或jc病毒，优选bk病毒。

84、

85、本发明还提供了抑制多瘤病毒在细胞中复制的方法，所述方法包括向被所述多瘤病毒感染的细胞提供本文所述的反义寡核苷酸。所述反义寡核苷酸优选是靶向所述感染的多瘤病毒的寡核苷酸(见图3)。所述细胞优选为对多瘤病毒复制敏感的细胞。当所述细胞是动物（如人）细胞时，优选所述动物是许可宿主，即允许病毒绕过其防御并复制病毒的宿主。对于多瘤病毒（如bk病毒和jc病毒）来说，通常首先通过检测动物尿液中的病毒来检测复制（尿毒血症）。然后，当感染持续时，也可以在动物的血清中检测到病毒（病毒血症）。大多数人在童年时期都会遇到bk和jc病毒，导致轻度疾病。然而，当在免疫受损的宿主中被重新激活或后天获得时，bk和jc病毒被认为与许多人类临床疾病状态有关。bk最常与肾脏受累相关，如输尿管狭窄、出血性膀胱炎和肾病(leploeg, m.d. et. al., clinical infectiousdiseases, 2001; helle, f. et. al., viruses, 2017)。宿主的易感性或许可性可以通过损害宿主的免疫系统来诱导。许多情况都可能导致宿主免疫能力的暂时性或永久性降低。免疫缺陷是指免疫系统对抗传染病和癌症的能力受到损害或完全缺乏的状态。大多数免疫缺陷病例是由于影响患者免疫系统的外部因素而后天获得的(“继发性”)。这些外部因素的例子包括hiv感染、极端年龄和环境因素（如营养）。免疫抑制也可以由一些药物诱导，如糖皮质激素、细胞抑制剂、抗体和作用于免疫亲和素的化合物(如钙调磷酸酶抑制剂、贝拉西普(一种具有ctla-4胞外结构域的免疫球蛋白样分子)和类似分子)。这可以是期望的效果，例如在器官移植手术中作为抗排斥措施，以及在免疫系统过度活跃的患者中，如在自身免疫性疾病中。然而，有时这种期望的效果具有降低个体对抗病毒感染（如多瘤病毒感染）的能力的额外效应。具有任何类型的免疫缺陷的人被称为免疫受损的人。除了可能影响每个人的普通感染之外，免疫受损的人可能特别容易受到机会性感染的侵害。

86、在一个实施方案中，本发明提供制备用于移植的移植物的方法，所述方法的特征在于向供体细胞（优选供体肾细胞）提供本文所述的反义寡核苷酸。所述反义寡核苷酸优选是靶向在移植物细胞中复制的多瘤病毒的寡核苷酸。在肾移植物或肾细胞移植物的情况下，所述多瘤病毒优选为bk病毒、jc病毒或mc病毒特异性寡核苷酸。如此处理的移植物细胞对反义寡核苷酸所特异的多瘤病毒的复制不太敏感。这增加了移植的成功率。它便于管理移植受体。控制移植受体中机会性多瘤病毒复制和患者中其他药物诱导的免疫抑制的方法之一是减少免疫抑制性药物的施用，从而使免疫系统恢复到降低病毒感染和/或复制的程度。当如本文所述制备移植物时，与接受未处理的移植物的患者相比，患者中多瘤病毒感染/复制的发生率较低，并且当检测时，通常不太严重。优选的是，移植物受体根据需要接受一次或多次附加的反义寡核苷酸施用。本发明还提供了一种治疗受试者中多瘤病毒感染的方法，所述方法包括向有此需要的个体施用本文所述的反义寡核苷酸。所述个体优选是免疫受损的个体。

87、所述移植物优选为同种异体移植物或异种移植物。这种移植物的受体通常用免疫抑制性药物治疗，以增加移植物的存活率，或降低宿主对抗移植物效应的发生率和/或严重性。许多组织目前可以被移植。当从另一个非遗传学相同的人或非人类动物移植细胞或器官时，宿主对抗移植物的效应通常是高风险的。移植物包括肺、心脏、心脏瓣膜、肾、肝、胰腺、肠、胸腺和骨髓。在器官移植后接受免疫抑制的患者中，多达3%的患者血浆中检测到多瘤病毒(de vlaminck, i. et. al., cell, 2013)。所述移植物优选包含肾或肾细胞。所述个体优选是肾脏或肾细胞移植的接受者。

88、所述反义寡核苷酸优选是赋予寡核苷酸和靶标rna双链体以rnase h抗性的那种。所述反义寡核苷酸优选包含一种序列，该序列是可存在于人肾细胞中的rna的至少12个、优选至少17个核碱基的连续延伸的反向互补序列，所述rna优选是可在人肾细胞中复制的人病毒的rna，所述病毒优选是多瘤病毒。

89、在一个实施方案中，本发明提供了长度为12至30，优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其包含多瘤病毒t-抗原前体mrna的至少12个核碱基的连续延伸的反向互补序列，并且所述反义寡核苷酸可以调节细胞中所述t-抗原前体mrna的剪接，其中所述反义寡核苷酸包含以下序列的至少12个连续核碱基: seq id no: 1、seq id no: 2、seqid no: 3、seq id no: 4、seq id no: 5、seq id no: 6、seq id no: 7、seq id no: 8、seqid no: 9、seq id no: 10、seq id no: 11、seq id no: 12、seq id no: 13、seq id no:14、seq id no: 15、seq id no: 16、seq id no: 17、seq id no: 18、seq id no: 20、seqid no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24、seq id no: 25、seq id no:26或seq id no: 27。

90、还提供了一种反义寡核苷酸，其包含以下序列的至少12个连续核碱基：seq idno: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no: 5、seq id no: 6、seq idno: 7、seq id no: 8、seq id no: 9、seq id no: 10、seq id no: 11、seq id no: 12、seqid no: 13、seq id no: 14、seq id no: 15、seq id no: 16、seq id no: 17、seq id no:18、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24、seqid no: 25、seq id no: 26或seq id no: 27，其中所述至少12个核苷酸包含相应多瘤病毒的大t抗原前体mrna的剪接供体序列或剪接受体序列的反向互补序列。

91、本文所述的反义寡核苷酸优选包含使所述mrna-寡核苷酸双链体对rnase h的作用具有抗性的修饰。优选包含至少一个具有修饰的聚合物骨架的核碱基，所述修饰的聚合物骨架优选2’-o-甲基(2’-o-me)、2’-o-甲氧基乙基(2’-moe)、2’-s-约束乙基(2’-cet)、锁核酸(lna)、肽核酸(pna)或吗啉代(pmo)核苷酸。优选地，所有的核碱基包含修饰的聚合物骨架，所述修饰的聚合物骨架优选2’-o-甲基(2’-o-me)、2’-o-甲氧基乙基(2’-moe)、2’-s-约束乙基(2’-cet)、锁核酸(lna)、肽核酸(pna)或吗啉代(pmo)核苷酸。

92、在一个优选的实施方案中，所述反义寡核苷酸包含以下序列的至少17个，优选至少18个、19个，优选至少20个连续的核碱基：seq id no: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no: 5、seq id no: 6、seq id no: 7、seq id no: 8、seq id no:9、seq id no: 10、seq id no: 11、seq id no: 12、seq id no: 13、seq id no: 14、seqid no: 15、seq id no: 16、seq id no: 17、seq id no: 18、seq id no: 20、seq id no:21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24、seq id no: 25、seq id no: 26或seqid no: 27，或包含以下序列的至少17个，优选至少18个、19个和优选至少20个连续的核碱基：seq id no: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no: 5、seq idno: 6、seq id no: 7、seq id no: 8、seq id no: 9、seq id no: 10、seq id no: 11、seqid no: 12、seq id no: 13、seq id no: 14、seq id no: 15、seq id no: 16、seq id no:17、seq id no: 18、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seqid no: 24、seq id no: 25、seq id no: 26或seq id no: 27，其具有一个错配，并且其中所述错配不是所述连续延伸的第一个或最后一个核苷酸。

93、还提供了抑制多瘤病毒在细胞中复制的方法，所述方法包括向被所述多瘤病毒感染的细胞提供所述反义寡核苷酸。还提供了制备用于移植的移植物的方法，所述方法的特征在于，供体细胞（优选供体肾细胞）被提供有所述反义寡核苷酸。

94、还提供了一种治疗受试者中多瘤病毒感染的方法，所述方法包括向有需要的个体施用本文所述的反义寡核苷酸。所述个体是免疫受损的个体。所述个体优选是肾脏或肾细胞移植的接受者。

95、还提供了一种给个体施用反义寡核苷酸的方法，用于与所述个体的肾细胞中的互补rna序列杂交，所述方法的特征在于，所述反义寡核苷酸是本文所述的寡核苷酸。

96、还提供了一种反义寡核苷酸，其包含使所述反义寡核苷酸和靶标mrna的双链体对rnase的作用具有抗性的修饰，其中所述反义寡核苷酸包含以下序列的序列：seq id no:1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4、seq id no: 5、seq id no: 6、seq id no:7、seq id no: 8、seq id no: 9、seq id no: 10、seq id no: 11、seq id no: 12、seq idno: 13、seq id no: 14、seq id no: 15、seq id no: 16、seq id no: 17、seq id no: 18、seq id no: 20、seq id no: 21、seq id no: 22、seq id no: 23、seq id no: 24、seq idno: 25、seq id no: 26或seq id no: 27，其没有错配、或具有一个或两个错配。

97、已经观察到，当给动物施用时，本文所述的寡核苷酸被有效地递送至相关肾细胞并被其吸收。施用方法优选iv施用。对于能够穿过血脑屏障进入中枢神经系统(cns)的多瘤病毒，如jc-病毒，可以给cns施用反义寡核苷酸。现有技术中已知多种方式。对于反义寡核苷酸介导的cns的jc病毒感染的治疗而言，鞘内递送是优选的。jc病毒感染也可以通过iv递送来对抗，因为最初的感染通常被认为是通过扁桃体或胃肠道，随即它扩散到其他器官，例如但不限于肾脏中的管状上皮细胞，在那里它可以保持潜伏或继续繁殖，在尿液和大脑中释放病毒颗粒。

98、所述反义寡核苷酸优选不具有由以下序列组成的序列：

99、5’-cacaaacctctgagcta;

100、5’-aaccucugaacuauuccaugu;

101、5’-accucugaacuauuccaugua;

102、5’-ttcatctgttccataggttggcaccta;或

103、5’-ttccataggttggcacctaaaaaaaaa，或其替代物，其中一个或多个胸腺嘧啶是尿嘧啶，反之亦然。

104、为了清楚和简明描述的目的，特征在此被描述为相同或单独实施例的一部分，然而，应该理解，本发明的范围可以包括具有所有或一些所描述特征的组合的实施例。