一种肝功能生化复合质控品及其制备方法和应用与流程

本发明涉及生化检测试剂，特别涉及一种肝功能生化复合质控品及其制备方法和应用。

背景技术：

1、临床检验是将患者的血液、体液、分泌物、排泄物和脱落物等标本，通过目视观察，或运用物理学、化学和生物学等的实验方法进行定性或定量分析，以获得反映机体功能状态、病理变化或病因等的客观资料，并强调对检验全过程（分析前、分析中、分析后）采取严密质量管理措施以确保检验质量，从而为临床、为病人提供有价值的实验资料。

2、临床使用的质控品分为两大类，即单项质控品和复合质控品。单项质控品需根据检测项目单独使用，而检验科项目多，增加了质控工作量；复合质控品含有多个检测项目的靶标物质，单瓶质控多个项目，使物料采购、储存、使用过程更便捷，极大的提高了工作效率，比单项质控品更受欢迎。然而，目前有关复合质控品的制备存在以下缺陷：（1）复合质控品需要考虑多个分析物、保护剂之间的兼容性，对配方的要求较高：（2）不同分析物的稳定条件有差异，分析物多为酶和蛋白质，对生产环境和保存环境有较高要求，因此为了增加质控品的稳定性，提高产品效期，往往会添加防腐剂和稳定剂等成分，这些复杂成分会进一步增加酶的降解风险；（3）健康人血清中天然存在各种分析物，部分分析物的基础浓度高于正常水平质控品的预期浓度，无法用于正常水平质控品的制备。而不使用人源血清，虽然可以配制低浓度质控品，但是基质与实际临床样本存在较大差异，可能会有基质效应，从而导致分析结果的偏差。

3、此外，由于肝功能生化检测项目包含多种酶，保存条件较为严苛，因此在制备复合质控时，要使多个检测项目的分析物同时保存稳定，有较大难度。因此，临床使用的肝功能质控品多为单一质控品，或者生化复合质控品中带有部分肝功能项目。后者，一方面复合质控品所含肝功能项目种类少，无法满足临床对肝功能项目的质控需求，另一方面由于含有其他的检测项目，增加了质控品成本。因此，提供一种稳定的肝功能生化复合质控品配方及制备工艺可以避免上述缺陷，给临床的使用和管理带来便利。

技术实现思路

1、针对现有技术中的缺陷，本发明提出一种肝功能生化复合质控品及其制备方法和应用。

2、本发明使用人源血清为基质，模拟临床样本，同时使用经过验证的非分析物配方，将多种成分调和在一起，增加了复合质控品的稳定性，可以配制正常水平、异常水平的质控品。为了降低保存难度，使用冻干工艺，将质控品制备成粉末状，方便了运输和保存。

3、本发明提供了一种肝功能生化复合质控品，包括如下组分：

4、（1）基质液：20~80%质控品基质液和20~80%缓冲液；

5、（2）分析物原料：14~65 u/l丙氨酸氨基转移酶、14~65 u/l天门冬氨酸氨基转移酶、21~97.5 u/lγ-谷氨酰基转移酶、84~520 u/l碱性磷酸酶、2800~13000 u/l胆碱酯酶、7~39 mol/l直接胆红素、7~39 mol/l间接胆红素、21~91 g/l白蛋白、49~130 g/l总蛋白、21~104 u/l α-l-岩藻糖苷酶和17.5~78 u/l腺苷脱氨酶；

6、（3）非分析物原料：5~12 g/l氯化钠、0.5~2 g/l酪蛋白钠盐、5~20 g/l甘露醇、0.05~0.2 v/v %吐温20、1~20 mg/l 亮抑肽酶、10~60 g/l 海藻糖和0.05~0.2 v/v %pc300。

7、本发明的复合质控品中添加了一定量的氯化钠，有助于维持复合酶的稳定性和活性，改善液体的离子环境，从而防止蛋白质或酶发生聚集或沉淀。酪蛋白钠盐具有一定的稳定作用，能够与分析物中的酶结合，防止其发生变性或失活。

8、本发明的复合质控品中，甘露醇作为保护剂，能够通过维持分析物的水合状态，减少由于水分流失或结晶导致的分析物结构破坏。甘露醇也具有抗氧化性，能够减少氧化对酶类或蛋白质的损害。

9、肝功能分析物中的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰基转移酶等通常易受蛋白酶的攻击而发生降解，导致其失去活性或功能。本发明通过添加一定量的亮抑肽酶，抑制这些降解酶的活性，减少了分析物被降解的风险，从而提高了其在质控品中的稳定性。此外，亮抑肽酶的加入能够有效抑制质控品非特异性的降解反应，确保不同分析物在同一体系中的稳定性，减少因酶降解导致的分析物浓度变化。

10、肝功能生化检测项目包含十多种酶，分析物中含有不同类型的蛋白质和酶，在复合体系中容易相互作用从而影响彼此的稳定性。本发明的肝功能生化复合质控品是一个稳定的组合整体，其中的各个组成成分相辅相成，在特定范围的浓度下，使得上述肝功能生化复合质控品具有极好的开瓶稳定性、冻存稳定性、加速稳定性，以及具有较好的均一性。

11、进一步的，所述所述质控品基质液经过乙型肝炎表面抗原（hbsag）、丙型肝炎（hcv）抗体、人类免疫缺陷病毒（hiv 1/2）抗体和梅毒螺旋体（tp）四项检测均为阴性。

12、进一步的，所述质控品基质液为人源血清。人源血清中含有许多生物活性物质，使用人源血清作为基质液，可以为质控品提供一个接近真实生理环境的基础，使得质控品的稳定性和检测结果更加接近实际的体内情况。本发明的非分析物原料能够避免使用人源血清作为基质液与所述生化检测指标发生的非特异性结合，提供保护作用，减少酶的变性或聚集。

13、进一步的，所述肝功能生化复合质控品为冻干粉。本发明的质控品可以以冻干粉的形式保存，复溶后质控品中的生物活性成分能够恢复到接近冻干前的状态，保持其原有的活性。冻干后的质控品在需要时可以快速、方便地溶解，形成高浓度的溶液。

14、进一步的，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液或tris-盐酸缓冲液。

15、本发明还提供所述肝功能生化复合质控品的制备方法，包括如下步骤：

16、s1：按比例将质控品基质液与缓冲液进行混合，配制基质液；

17、s2：加入非分析物原料，调整ph至7.2~7.4，得到第一混合液；

18、s3：加入分析物原料，调整ph至7.2~7.4，得到第二混合液；

19、s4：将第二混合液过滤，分装至西林瓶，进行真空冷冻干燥，得到肝功能生化复合质控品。

20、本发明还提供一种试剂盒，所述试剂盒包含所述的肝功能生化复合质控品。

21、本发明还提供所述的肝功能生化复合质控品在制备用于肝功能检测的质控品中的应用。

22、综上，与现有技术相比，本发明达到了以下技术效果：

23、1、本发明的肝功能生化复合质控品具有高度的复合性，包含了11项重要的肝功能生化指标，在成分均一性和稳定性方面表现优异，确保了各项指标的精密度；使用人源血清为基质，能够模拟临床样本，同时使用经过验证的非分析物配方，将多种成分调和在一起，增加了复合质控品的稳定性，可以配制正常水平、异常水平的质控品。

24、2、本发明通过对非分析物原料的组分进行优化，避免因防腐剂、稳定剂等物质的添加而导致酶的降解，复合质控品的开瓶后稳定性表现良好，可在使用环境下维持有效的活性，从而减少了因频繁更换质控品而导致的成本和操作不便，满足了日常诊断与监测的需求。

25、3、本发明的肝功能生化复合质控品具有良好的冻融稳定性，可在经历冷冻或解冻过程后保持产品的稳定性和活性，确保在不同使用条件下仍然能满足高精度的质量控制要求。