Egfr基因扩增检测探针、试剂盒以及方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及EGFR基因扩增 检测探针、试剂盒以及方法。
【背景技术】
[0002] EGFR(Epidermal Growth Factor Receptor)是上皮生长因子（EGF)细胞增殖和信 号传导的受体，属于ErbB受体家族的一种。分子量170KDa，位于细胞膜表面，属于酪氨酸激 酶型受体。EGFR被配体激活后启动胞内信号传导，经过细胞质中衔接蛋白、酶的级联反应， 调节转录因子激活基因的转录，指导细胞迀移、黏附、增殖、分化和凋亡。研宄表明，在许多 实体肿瘤中存在EGFR的高表达或异常表达，为以EGFR为靶向的肿瘤治疗和针对EGFR信号 转导通路的信号转导干预治疗提供了理论基础和实验依据。
[0003] 目前，针对EGFR所开发的分子靶向药物主要分两类：1)人工合成的单克隆抗体 (Mb)，与EGFR胞外区结合，阻断依赖于配体的EGFR活化；2)小分子酪氨酸激酶抑制剂 (TKI)，抑制EGFR胞内区酪氨酸激酶活性。上述药物通过不同途径阻断EGFR介导的细胞内 信号通路，从而抑制肿瘤生长、转移和血管生成，并促进肿瘤细胞凋亡，提高放化疗敏感 性。
[0004] 大量临床研宄指出，有EGFR扩增的非小细胞型肺癌患者对EGFR酪氨酸激酶抑制 剂（erlotinib和gefitinib)的治疗反应性明显提高，患者的疾病进展时间和生存期也明 显延长。因此，EGFR基因扩增的检测成为非小细胞型肺癌患者选用EGFR酪氨酸激酶抑制剂 进行革G标治疗的关键。此外，存在非小细胞肺癌患者EGFR基因异常的患者对革El向治疗药物 Iressa/Tarceva的敏感性更强。检测非小细胞肺癌患者EGFR基因，有助于筛选出Iressa/ Tarceva的敏感人群，指导临床用药。
[0005] 焚光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH)是在原有的放射性 原位杂交技术基础上发展起来分子细胞遗传学技术。其基本原理是通过荧光标记的DNA探 针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对 染色体和基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断。FISH技术操作简便，检测快速，结果 直观易于观察；具有有效的灵敏度和特异性，能检测到一些常规遗传学分析不能发现基因 的变异，而且重复性好。因此，FISH基因已广泛应用于基因组结构研宄、染色体精细结构变 异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学研宄等。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的之一是EGFR基因扩增检测试剂盒，该检测试剂盒可用于高特异性 和高准确性检测EGFR基因扩增的情况。
[0007] 实现上述目的的技术方案如下。
[0008] EGFR基因扩增检测试剂盒，包括有标记荧光染料的、针对EGFR基因的第一组探针 和针对人类7号染色体着丝粒区域的第二组探针，所述第一组探针为选自SEQ ID NO. 41- SEQ ID NO. 50中的至少一条探针，所述第二组探针为选自SEQ ID NO. 51-SEQ ID NO. 60中 的至少一条探针；上述两组探针所标记的荧光染料颜色不一样。
[0009] 在其中一个实施例中，所述第一组探针为选自SEQ ID NO. 41-SEQ ID NO. 50中的 至少五条探针，所述第二组探针为选自SEQ ID NO. 51-SEQ ID NO. 60中的至少五条探针。
[0010] 在其中一个实施例中，所述第一组探针为选自SEQ ID NO. 41-SEQ ID NO. 50中的 至少八条探针，所述第二组探针为选自SEQ ID NO. 51-SEQ ID NO. 60中的至少八条探针。
[0011] 在其中一个实施例中，所述第一组探针为SEQ ID NO. 41-SEQ ID NO. 50,所述第 二组探针为 SEQ ID NO. 51 - SEQ ID NO. 60。
[0012] 在其中一个实施例中，所述SEQ ID NO. 41-SEQ ID NO. 50依次分别由以下引物扩 增制备得到：SEQ ID NO. 1 和 SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3 和 SEQ ID NO. 4、SEQ ID NO. 5 和 SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7 和 SEQ ID NO. 8、SEQ ID NO. 9 和 SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 11 和 SEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 13 和 SEQ ID NO. 14、SEQ ID NO. 15 和 SEQ ID NO. 16、SEQ ID NO. 17 和 SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19 和 SEQ ID NO. 20。
[0013] 在其中一个实施例中，所述SEQ ID NO. 51-SEQ ID NO. 60依次分别由以下引物扩 增制备得到：SEQ ID NO. 21 和 SEQ ID NO. 22、SEQ ID NO. 23和 SEQ ID NO. 24、SEQ ID NO. 25 和 SEQ ID NO. 26、SEQ ID NO. 27 和 SEQ ID NO. 28、SEQ ID NO. 29 和 SEQ ID NO. 30、SEQ ID NO. 31 和 SEQ ID NO. 32、SEQ ID NO. 33 和 SEQ ID NO. 34、SEQ ID NO. 35 和 SEQ ID NO. 36、 SEQ ID NO. 37 和 SEQ ID NO. 38、SEQ ID NO. 39 和 SEQ ID NO. 40。
[0014] 本发明的另一目的是提供一种EGFR基因扩增检测探针。
[0015] 实现上述目的技术方案如下：
[0016] EGFR基因扩增检测探针，包括有针对EGFR基因的第一组探针和针对人类7号染色 体着丝粒区域的第二组探针，所述第一组探针为选自SEQ ID NO. 41-SEQ ID NO. 50中的至 少一条探针，所述第二组探针为选自SEQ ID NO. 51-SEQ ID NO. 60中的至少一条探针。
[0017] 在其中一个实施例中，所述第一组探针为选自SEQ ID NO. 41-SEQ ID NO. 50中的 至少五条探针，所述第二组探针为选自SEQ ID NO. 51-SEQ ID NO. 60中的至少五条探针。
[0018] 本发明的另一目的是提供一种EGFREGFR基因扩增检测方法。
[0019] 实现上述目的的技术方案如下。
[0020] 一种EGFR基因扩增检测方法，包括
[0021] 待检测样品切片预处理；
[0022] 利用上述EGFR基因扩增检测试剂盒进行杂交检测；
[0023] 复染后在显微镜下观察焚光信号。
[0024] 本发明的主要优点在于：
[0025] 1.本发明所提供的EGFR基因扩增检测试剂盒的检测结果与Cytocell公