一种注射用多烯磷脂酰胆碱的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于制药工程技术领域，具体地说，涉及一种注射用多烯磷脂酰胆碱的制 备方法。
【背景技术】
[0002] 多稀磷脂酰胆碱系从大豆中提取得到的以磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine简 称PC)为主要成分的混合物，临床主要用于肝胆疾病的辅助治疗，是疗效肯定的保肝药物， 适应症为各种类型的肝病，如肝炎、慢性肝炎、肝坏死、肝硬化、肝昏迷（包括前驱肝昏迷）； 脂肪肝（也见于糖尿病人）；胆汁阻塞、中毒、预防胆结石复发；手术前后的治疗，尤其是肝 胆手术；妊娠中毒，包括呕吐；银肩病；神经性皮炎、放射综合征。多烯磷脂酰胆碱制备技术 较为复杂，我国由于生产技术等原因，研宄及生产未能得到有力的发展。多烯磷脂酰胆碱作 为保肝药物的原料药，其质量标准包括产品的纯度、杂质限度、氧化指标等，另外甲氧基苯 胺值是过氧化物的再次氧化产物指标，在制剂中有严格控制。现有生产技术对起始原料大 豆磷脂的新鲜程度要求较高，放置时间较长的原料往往难以生产出氧化指标符合要求的产 品。同时多烯磷脂酰胆碱纯度及杂质控制也是我国现有技术难以克服的难题，制约了多烯 磷脂酰胆碱相关制剂开发，导致在国内制药领域发展缓慢。
[0003] 目前纯化磷脂酰胆碱的方法包括co2超临界萃取法、膜分离法、金属盐沉淀法、吸 附法、柱层析法、溶剂提取法等工艺方法。
[0004] 金属盐沉淀法存在络合物解析金属离子过程繁琐、容易造成污染等缺陷，导致实 际应用率低。co2超临界萃取法只适合制备混合磷脂，所得产品磷脂酰胆碱含量普遍偏低。 磷脂酰胆碱与其他磷脂的分子量较接近，膜分离法要得到单一磷脂酰胆碱仍存在困难，其 产品含量偏低不能满足注射用辅料要求。溶剂提取法是通过磷脂酰胆碱在两相溶剂中的溶 解度的差异达到富集纯化的目的，对理化性质非常相似的各类磷脂杂质的选择性较差。
[0005] 吸附法是一种较常用的纯化方法，通过选择不同理化特性的吸附剂对待吸附原料 液进行搅拌吸附，达到纯化的效果，常见的吸附剂有：三氧化二铝、硅胶等，该方法只对磷 脂酰乙醇胺（PE)、酸值等指标有一定的吸附效果，很难保证含量、溶血磷脂酰胆碱（LPC)等 关键指标符合注射用标准。
[0006] 硅胶柱层析法是另一种较常用的分离纯化方法，固定相与待分离物质的比例、洗 脱溶剂种类和比例对柱层析的分离效果与除杂能力有巨大的影响，柱层析方法的溶剂及比 例选择与产品本身的性质以及杂质性质有关，该方法虽常见，但能够使产品质量在满足注 射用质量标准要求的同时又能符合商业化大生产的方法未见报道。
[0007] 采用柱层析纯化磷脂酰胆碱的专利较多，其中日本专利JP52083912A、 JP52057212A公开以硅胶柱层析，以三氯甲烷-乙醇或三氯甲烷-甲醇为洗脱剂，得到磷脂 酰胆碱含量分别为80%、89%的产品，上述两篇专利产品的含量均低于98%，不能满足注 射用要求。
[0008] 中国专利CN103073572A公开了一种经过180°C高温热化，丙酮脱油，离心，硅胶吸 附过滤等步骤，得到过氧化值0. 84、酸值9. 06、磷脂酰胆碱含量为88. 6% -92. 1 %的产品， 该专利技术高温处理磷脂会导致醛酮类氧化物质（甲氧基苯胺值）的产生，且所得产品纯 度、酸值、脂肪酸等指标均不能符合注射用标准要求。
[0009] 中国专利CN100500676C公开了以大豆粉末磷脂为原料经过提取，一次氧化铝层 析一次硅胶层析，低碳醇-水洗脱，得到酸值8. 7、磷脂酰胆碱含量为93. 4%的产品，该方法 所得产品磷脂酰胆碱含量偏低，酸值偏高，甘油三酯、脂肪酸、甲氧基苯胺值等指标无法有 效控制。
[0010] 中国专利CN102633832A公开了一种以硅胶柱层析，以醇-水洗脱得到含有磷脂酰 胆碱含量分别为90% -97. 5%的产品方法，该专利方法均无法做到在纯化含量的同时控制 甘油三酯、游离脂肪酸以及氧化指标等符合注射用原料要求。
[0011] 以上报道磷脂酰胆碱柱层析法专利技术方法对产品杂质限度、甘油三酯、脂肪酸 以及过氧化值、甲氧基苯胺值等关键指标均没法控制，难以将上述技术方法应用于注射用 原料领域。目前开发注射用磷脂酰胆碱的技术领域里，没有专门针对控制过氧化值、甲氧基 苯胺值等理化指标的方法，磷脂酰胆碱本身具有高不稳定性，开发该类产品需要过度依赖 于起始原料的新鲜度，受技术约束，国内注射用多烯磷脂酰胆碱主要依赖进口，导致多烯磷 脂酰胆碱价格昂贵，供货周期长，不利用多烯磷脂酰胆碱制剂在市场上的开发与普及。
[0012] 因此，开发以大豆磷脂为原料，通过柱层析并对三元混合溶剂比例进行控制，经过 两次洗脱，即可以提高产品含量又可以降低甘油三酯、游离脂肪酸、酸值、过氧化值、甲氧基 苯胺值等关键指标，使多烯磷脂酰胆碱符合注射用辅料要求的方法，对提高我国注射用多 烯磷脂酰胆碱的制造水平有显著的影响。
【发明内容】
[0013] 本发明的目的在于提供一种注射用多烯磷脂酰胆碱的制备方法。通过柱层析以三 元混合溶剂为洗脱剂进行两次洗脱，一步提高磷脂酰胆碱含量并且有效控制产品中杂质限 度（溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、游离脂肪酸、甘油三酯）和氧化指标（酸 值、过氧化值、甲氧基苯胺值）。
[0014] 本发明的技术方案：
[0015] 以大豆磷脂为原料，加入第一次洗脱所用混合溶剂溶解，经过柱层析以多卤代烷 烃-低碳醇-水所组成的三元混合溶剂进行两次洗脱，干燥，得到注射用多烯磷脂酰胆碱。
[0016] 所用原料是磷脂酰胆碱含量符合中国药典2010版二部要求（PC> 72% )的大豆 憐脂。
[0017] 所用填料为硅胶或二醇基硅胶。
[0018] 所用填料与原料的重量比例为1:2?16:2。
[0019] 所用的多卤代烷烃为二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷。
[0020] 所用的低碳醇为无水乙醇、丙醇、异丙醇或正丁醇。
[0021] 第一次洗脱所用的三元混合溶剂包括多卤代烷烃，低碳醇和水。其中多卤代烷烃 占混合溶剂的比例为75. 7%?90. 7%，水占混合溶剂的比例为0. 2%?1. 6%，其余为低碳 醇。
[0022] 第二次洗脱所用的三元混合溶剂包括多卤代烷烃，低碳醇和水。其中多卤代烷烃 占混合溶剂的比例为48. 9 %?74. 8 %，水占混合溶剂的比例为1. 5 %?2. 8 %，其余为低碳 醇。
[0023]方法所述第一次洗脱体积用量（v)与原料重量（w)比为1:1?15:1 (L/Kg)。 [0024]方法所述第二次洗脱体积用量（v)与原料重量（w)比为5:1?40:1 (L/Kg)。本发 明的有益效果：
[0025] (1)本发明采用三元混合溶剂体系，结合两次洗脱，就可以保证多烯磷脂酰胆碱含 量符合要求的同时达到脱色、除杂（降低溶血磷脂酰胆碱、甘油三酯、游离脂肪酸含量等杂 质限度）、降值（降低酸值、过氧化值、甲氧基苯胺值）的效果。
[0026] (2)本发明解决了现有同类专利技术所存在的技术瓶颈，从技术层面解决了降低 过氧化值、甲氧基苯胺值等理化指标的难题，大大减少了多烯磷脂酰胆碱产品对起始原料 新鲜程度的过度依赖。
[0027] (3)本发明对原料的处理量大，生产操作简便，可商业化大生产得到符合注射用多 烯磷脂酰胆碱标准的合格产品，有利于国内新型靶向制剂在市场上的普及应用。
【具体实施方式】
[0028]以下实施例所得产品中磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酸、甘油 三酯、游离脂肪酸含量以及酸值、过氧化值、等关键指标均按照进口标准（YBH26152005)所 述方法进行测定，甲氧基苯胺值按照欧洲药典8. 0版2. 5. 36方法测定。
[0029] 实施例1:
[0030]取大豆磷脂1公斤，加入三氯甲烷-乙醇-水溶液，溶解配成原料液，填装8公斤 硅胶进行柱层析，第一次以洗脱剂（三氯甲烷79.8%、乙醇19.8%、水0.4% )洗脱15升， 第二次再以洗脱剂（二氯甲烷48.9%、乙醇48.3%、水2.8% )洗脱40升收集洗脱液，经 过真空浓缩，冷冻干燥得到多烯磷脂酰胆碱产品，PC转移率为75. 3%，磷脂酰胆碱纯度为 99. 5 %，溶血磷脂酰胆碱未检出，磷脂酰肌醇未检出，磷脂酸未检出，酸值为0. 3,过氧化值 未检出，甲氧基苯胺值为2. 1，甘油三酯、游离脂肪酸含量均符合规定。
[0031] 实施例2:
[0032]取大豆磷脂1公斤，加入二氯乙烷-异丙醇-水溶液，溶解配成原料液，填装7公 斤二醇基硅胶进行柱层析，第一次以洗脱剂（二氯乙烷90. 7%、异丙醇9. 1%、水0. 2%)洗 脱15升，第二次再以洗脱剂（三氯甲烷62. 3%、丙醇34. 7、水3. 0% )洗脱40升收集洗脱 液，经过真空浓缩，冷冻干燥得到多烯磷脂酰胆碱产品，PC转移率为81. 2%，磷脂酰胆碱纯 度为99. 0%，溶血磷脂酰胆碱未检出，磷脂酰肌醇未检出，磷脂酸未检出，酸值为0. 4,过氧 化值未检出，甲氧基苯胺值为3. 0,甘油三酯、游离脂肪酸含量均符合规定。
[0033] 实施例3:
[0034]取大豆磷脂5公斤，加入二氯甲烷-乙醇-水溶液，溶解配成原料液，填装25公斤 硅胶进行柱层析，第一次以洗脱剂（二氯甲烷89. 8%、乙醇10%、水0. 2% )洗脱75升，第 二次再以洗脱剂（三氯甲烷50. 8%、正丁醇46. 7%、水2. 5% )洗脱200升收集洗脱液，经 过真空浓缩，冷冻干燥得到多烯磷脂酰胆碱产品，PC转移率为85.0%，磷脂酰胆碱纯度为 98. 3 %，溶血磷脂酰胆碱含量为0. 2 %，磷脂酰肌醇未检出，磷脂酸未检出，酸值为0. 4,过 氧化值未检出，甲氧基苯胺值为4. 2,甘油三酯、游离脂肪酸含量均符合规定。
[0035] 实施例4:
[0036] 取大豆磷脂10公斤，加入二氯乙烷-乙醇-水溶液，溶解配成原料液，填装40公 斤硅胶进行柱层析，第一次以洗脱剂（二氯乙烷