一种防治甘蔗黑穗病的生防菌株zhr0及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物保护技术领域，具体涉及一种防治甘蔗黑穗病的生防菌株ZHR0 及其应用。
【背景技术】
[0002] 甘鹿黑穗病（sugarcanesmut)是由甘鹿鞭黑粉菌（Ustiliagoscitaminea Sydow)引起的一种真菌性病害，1877年在南非纳塔尔首先报道，该病现已成为重要的世界 流行病害。染病的种蔗导致萌芽早，分蘖增多，叶片狭窄，淡绿色，蔗茎细小。甘蔗黑穗病典 型的症状是在病蔗梢部产生一个长而不分枝的黑色鞭状物（称为黑穗鞭），长短不一，短的 直或稍弯曲，长的向下卷曲。黑穗鞭中心为一条由薄壁组织或维管束组织构成的心柱，心 柱外面附着一层黑色的冬孢子，冬孢子成熟后，薄膜破裂，大量黑色粉状的冬孢子随气流飘 散。
[0003] 黑穗病直接降低蔗茎产量，同时降低蔗糖分，严重影响品质，因此甘蔗黑穗病被称 为甘蔗的"癌症"。目前，中国甘蔗主栽品种普遍感染黑穗病，田间发病率超过10%，有的田 块甚至超过50%，经济损失严重，严重制约了甘蔗产业的发展。
[0004] 甘蔗黑穗病菌属真菌中的担子菌亚门黑粉菌属甘蔗鞭黑粉菌，Ustiliago scitamineaSydow病菌从甘蔗的芽或幼芽的幼嫩分生组织侵入，是一种典型的茎寄生病 害，属于系统性寄生病害。虽然对甘蔗黑穗病的认识较早，但对病害的防治一直没有稳定而 有效的措施。传统的防治方法如改善栽培措施、蔗种消毒、化学防治、选用抗病品种等。传 统育种法很难筛选到高抗基因，而且难以克服抗病性和产量质量性状之矛盾；系统性病害 用化学药物难以控制，而且化学防治中病菌易产生抗药性，造成环境污染。因此许多病害尤 其是一些土传病害、系统性病害的生物防治和拮抗菌的利用引起了国内外的高度重视。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种防治甘蔗黑穗病的生防菌株ZHR0,对甘蔗产业危害较大 的黑穗病进行生物防治。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
[0007] -种菌株，所述菌株为Bacillusamyloliquefaciens(解淀粉芽孢杆菌ZHR0) ZHR0菌株，并且所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解淀粉芽孢杆菌ZHR0)菌株保藏 于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2014577。
[0008] 保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2014年11月24日。
[0009] 所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解淀粉芽抱杆菌ZHR0)菌株在防治甘 蔗黑穗病的应用。
[0010] 所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解淀粉芽抱杆菌ZHR0)菌株的筛选方 法，包括以下步骤：
[0011] (1)取数株甘蔗叶片放入灭菌塑料袋中迅速带回实验室，取5?20g甘蔗叶片经过 消毒灭菌处理后剪碎放入灭菌的三角瓶中，加50?200ml无菌水，灭菌玻璃珠5?20g，于 摇床上150_180rpm振荡20?45min后，静置5?15min;
[0012] (2)吸取上清液稀释至lO'lO'KT6三个梯度，从三个梯度稀释液中各吸取 0. 05?0. 2mL液体分别接种在LB固体培养基上，28?32 °C恒温培养三天，每个梯度重复三 次，根据培养基上菌落大小和形态分离纯化并保存菌种。
[0013] 一种ZHR0生防菌剂的制备方法，将所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解 淀粉芽孢杆菌ZHR0)菌株接种在LB液体培养基上，100?300rpm振荡培养12-16h，用灭菌 水稀释至活菌总浓度为1X109-1X101(lCFU/ml，得到ZHR0生防菌剂。
[0014] 与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：
[0015] 本发明得到一种Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解淀粉芽抱杆菌ZHR0)菌 株，并通过对峙培养试验和温室桶栽实验证明所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解 淀粉芽孢杆菌ZHR0)菌株具有较好的防治甘蔗黑穗病的效果，防效可达50%以上。
【具体实施方式】
[0016] 实施例1
[0017]所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解淀粉芽抱杆菌ZHR0)菌株是2013年 9月份在甘蔗叶片中分离得到的一株解淀粉芽孢杆菌。
[0018] 一种菌株的筛选方法，所述菌株为Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解淀粉芽 孢杆菌ZHR0)菌株，该方法包括以下步骤：
[0019] (1)取数株甘蔗叶片放入灭菌塑料袋中迅速带回实验室，取5g甘蔗叶片经过 消毒灭菌处理后剪碎放入灭菌的三角瓶中，加50ml无菌水，灭菌玻璃珠5g，于摇床上 150_180rpm振荡 30min后，静置 10min;
[0020] (2)吸取上清液稀释至lO'lO'KT6三个梯度，从三个梯度稀释液中各吸取 0.lmL液体分别接种在LB固体培养基上，30°C恒温培养三天，每个梯度重复三次，根据培养 基上菌落大小和形态分离纯化并保存菌种。
[0021] 所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解淀粉芽抱杆菌ZHR0)菌株的基本生 物学特性为：革兰氏染色阳性，菌体杆状，芽孢卵圆形，最适生长温度28-32°C，最适生长 PH6. 0-7. 0。
[0022] 通过 16SrDNA测序及NCBI比对，所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0 (解淀 粉芽孢杆菌ZHR0)菌株的16SrDNA序列与解淀粉芽孢杆菌的同源性达到99%。
[0023] 将所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0 (解淀粉芽抱杆菌ZHR0)菌株保藏于 中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2014577。
[0024] 实施例2
[0025] 所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解淀粉芽孢杆菌ZHR0)与甘鹿黑穗病 菌的第一组对峙培养试验，具体方法如下：
[0026] 先在含PDA培养基的平板底部中央处画两条相互垂直的直线，用灭菌枪头吸取 5ul在LB液体培养基上过夜培养的所述BacillusamyloliquefaciensZHR0 (解淀粉芽孢 杆菌ZHR0)菌株接种在平板中心；再吸取5ul甘蔗黑穗病菌液（lX106CFU/ml，正负担孢子 1:1)沿两条垂直线滴于距中心2cm处，置于28°C培养箱中培养3天。平板中心的菌落为所 述Bacillus amyloliquefaciens ZHRO(解淀粉芽孢杆菌ZHRO)菌株，四周为甘蔗黑穗病菌 的四个菌落。
[0027] 由甘蔗黑穗病菌的菌落形状能够看出黑穗病菌在接近ZHR0-侧生长受到明显抑 制，这表明所述Bacillus amyloliquefaciens ZHR0(解淀粉芽孢杆菌ZHR0)菌