多步骤的最终过滤的制作方法
【专利说明】多步骤的最终过滤
[0001] 本申请为分案申请，原申请的申请号为201080044481. 6,申请日为2010年9月29 日，优先权日为2009年10月1日，发明名称为"多步骤的最终过滤"。
[0002] 本文报道了包括两个直接相连的过滤步骤的组合的用于浓缩的多肽溶液的最终 过滤的方法，其中第一个过滤步骤包括使用孔径为3. 0ym的过滤器的预过滤和使用孔径 为0. 8ym过滤器的主过滤，且第二个过滤步骤包括使用孔径为0. 45ym的过滤器的预过滤 和使用孔径为〇. 22ym的过滤器的主过滤。
[0003] 发明背景
[0004] 浓度超过100g/l的蛋白质溶液在最终过滤步骤期间容易有困难，例如只具有低 跨膜通量或所使用的过滤器被在配制或浓缩过程期间形成的聚集物或颗粒聚集阻塞或由 于加入的赋形剂导致浓缩的溶液粘度增加。
[0005] 粘度高和颗粒或聚集物含量增加结合在一起经常导致所使用的0. 22 y m最终过 滤的过滤器的孔被阻塞。因此，或者在过滤步骤期间（即在一批被完全处理之前）必须替 换过滤器，或者必须增加过滤器面积。
[0006] 还已经观察到孔径为0. 45 y m的过滤器和孔径为0. 22 y m的过滤器的组合没有优 势，例如作为Sartobran P 0.45/0. 22 ym过滤器提供时如此。可能避开上述问题的增加孔 径的过滤器被用作深度过滤器或预-过滤器，但不被用作最终过滤器。
[0007] 在DE4 204 444中报道了从气流除去水滴的I. 2ym预过滤器和之后的0. 2ym 无菌过滤的组合。在US4, 488, 961中报道了包含两个不同孔径的过滤器过滤器单元，其中 孔径较小的过滤器是可弯曲的，通过使过滤器的流向变弯曲以降低过滤器单元的阻力。在 US5, 643, 566中使用孔径为0. 45ym的过滤器的预过滤和孔径为0. 22ym的过滤器的无菌 过滤的组合。在EP0 204 836中报道了两阶段过滤器，该过滤器使用内壁光滑的膜与在其 下面的由带有隆起的胀管器的硬质的过滤支撑物支撑的薄的、能弯曲的多孔膜构建而成。 在DE3 818 860中报道了至少两个具有不同的膜材料和不同的过滤器孔径和过滤器孔几 何形状的膜滤器单元的组合。
[0008]Aldington等人（J.Chrom.B848(2007)64-78)报道了按比例放大的单克隆抗体 纯化方法。在CS247484报道了制备针对人淋巴细胞的免疫球蛋白的方法。
[0009] 发明概沐
[0010] 已经发现两个各自包含预过滤器和主过滤器且各自具有特别选择的孔径的过滤 器的组合能用于在最后的封装步骤期间过滤高度浓缩的免疫球蛋白溶液，而在过滤过程期 间没有孔阻塞的风险和替换过滤器的需求。
[0011] 本文的一个方面报道了制备免疫球蛋白溶液的方法，所述方法包括以下步骤：
[0012] a)提供蛋白质的浓度至少为100g/l的免疫球蛋白溶液，
[0013] b)经第一个和第二个过滤器的组合过滤所述免疫球蛋白溶液，其中第一个过滤器 包含孔径为3. 0ym的预过滤器和孔径为0. 8ym的主过滤器，且第二个过滤器包含孔径为 0. 45 ym的预过滤器和孔径为0. 22 ym的主过滤器，并由此制备免疫球蛋白溶液。
[0014] 本文的另一个方面报道了第一个和第二个过滤器的组合的如本文报道的过滤器 组合在活性药物成分制备之前进行的免疫球蛋白溶液的最终过滤中的应用，其中第一个过 滤器包含孔径为3.Oym的预过滤器和孔径为0. 8ym的主过滤器，且第二个过滤器包含孔 径为0. 45 y m的预过滤器和孔径为0. 22 y m的主过滤器。
[0015] 本文的另一个方面报道了制备免疫球蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：
[0016] a)提供包含编码免疫球蛋白的核酸的细胞，
[0017] b)培养所述细胞，
[0018] c)从细胞或培养基中回收免疫球蛋白，
[0019] d)使用一个或多个色谱法步骤纯化所述免疫球蛋白并提供免疫球蛋白溶液，和
[0020] e)经第一个和第二个过滤器的组合过滤步骤d)的免疫球蛋白溶液，其中第一个 过滤器包含孔径为3. 0ym的预过滤器和孔径为0. 8ym的主过滤器，且第二个过滤器包含 孔径为0. 45 y m的预过滤器和孔径为0. 22 y m的主过滤器，并由此制备免疫球蛋白。
[0021] 本文的另一个方面报道了试剂盒，其包含第一个过滤器（包含孔径为3. 0ym的预 过滤器和孔径为0. 8 y m的主过滤器）和第二个过滤器（包含孔径为0. 45 y m的预过滤器 和孔径为0. 22ym的主过滤器）。
[0022] 在一个实施方案中，第一个过滤器面积最多是第二个过滤器面积的两倍。在另一 个实施方案中，第一个和第二个过滤器具有大致相同的总过滤器面积。在一个实施方案中， 免疫球蛋白溶液包含糖和/或氨基酸和/或表面活性剂和/或盐。在另一个实施方案中， 免疫球蛋白溶液的浓度为l〇〇g/l至300g/l。在又一个实施方案中，免疫球蛋白溶液的体积 为3升至100升。在另一个实施方案中，过滤施加的压力是0.1巴至4.0巴。在一个实施 方案中，免疫球蛋白溶液的浓度为160g/l或更高，且过滤施加的压力为1. 45巴或更高。在 另一个实施方案中压力为1. 50巴或更高。在另一个实施方案中，免疫球蛋白溶液包含糖和 表面活性剂，且免疫球蛋白溶液浓度为125mg/ml或更高，且过滤施加的压力为0. 75巴或更 低。在另一个实施方案中压力为0.7巴或更低。
[0023]在一个实施方案中，免疫球蛋白是抗-IL13受体a抗体或抗-HER2抗体。在另一 个实施方案中，纯化过程使用蛋白A亲合色谱步骤和至少一个选自以下的步骤：阳离子交 换色谱、阴离子交换色谱和疏水作用色谱。
[0024]发明详沐
[0025] 已经发现两个各自包含预过滤器和主过滤器和各自具有特别选择的孔径的过滤 器或过滤器单元的组合可以用于在最后封装步骤期间过滤高度浓缩的和粘稠的以及配制 的免疫球蛋白溶液（即包含糖和表面活性剂）。尤其是包含孔径分别为3. 0ym和0. 8ym 的预过滤器和主过滤器的第一个过滤器和包含孔径分别为0. 45 y m和0. 22 y m的预过滤器 和主过滤器的第二个过滤器的组合是非常有利的。就该组合中的单个过滤器单元而言，过 滤包含总计例如Ikg的抗-IL-13Ral抗体或6kg的抗-HER2抗体的高度浓缩的溶液已是可 能的，而且封装所述的量而仅有较少的材料损失已是可能的。在一个实施方案中过滤器表 面积与溶液体积的比率已被确定。
[0026] 在一个实施方案中，免疫球蛋白溶液包括免疫球蛋白和赋形剂。在另一个实施方 案中，赋形剂包含一种或更多种物质，其选自糖诸如葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖、海藻糖 和棉子糖，氨基酸诸如精氨酸、赖氨酸、组氨酸、鸟氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、谷氨酸、 天冬氨酸、甘氨酸和甲硫氨酸，盐诸如氯化钠、氯化钾、柠檬酸钠、柠檬酸钾、磷酸钠、磷酸钾 和表面活性剂诸如聚山梨醇酯类和聚（氧乙烯-聚氧丙烯）聚合物。
[0027] 本文所述的过滤在治疗性抗体的制备中用作最终过滤步骤。该步骤可以在将所需 的赋形剂、稳定剂和/或抗-氧化剂加入高度浓缩的抗体溶液之后进行。在一个实施方案 中，以kg计的抗体的量与过滤器的总面积的比率为lOOOg/m2至10, 000g/m2。在另一个实施 方案中，所述比率为IOOOgAi2至6000g/m2。在又一个实施方案中，所述比率为4000g/m2至 6000g/m2〇
[0028] "多肽"由通过肽键连接氨基酸（天然的或合成的）组成。具有少于约20个氨基 酸残基的多肽可被称为"肽"，而由两个或更多个多肽组成的分子或包含一个超过100个氨 基酸残基的多肽的分子可被称为"蛋白质"。多肽还可以