核酸提取用设备的制造方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及核酸提取用设备。
【背景技术】
[0002] 近年来，由于基因利用技术的发展，基因诊断、基因治疗等利用了基因的医疗备受 注目。另外，在农业和畜牧业领域也开发了很多使用基因来鉴别品种、改良品种的方法。作 为用于利用基因的技术，PCR (Polymerase Chain Reaction:聚合酶链式反应）等技术广泛 普及。如今，PCR在生物体的信息解析中成为必不可少的技术。PCR是通过对含有作为扩增 对象的核酸（靶核酸）和试剂的溶液（反应液）实施热循环而使靶核酸扩增的方法。作为 PCR的热循环，普遍的是以2个梯度或3个梯度的温度实施热循环的方法。
[0003] 另一方面，医疗领域中以流行性感冒为代表的感染症的诊断目前主要使用免疫层 析等的简易检查试剂盒。但是，对于这样的简易检查而言，有时精度不够，希望将能够期待 更高的检查精度的PCR应用于感染症的诊断。另外，医疗机构的普通门诊患者等由于诊察 的时间受限的关系，所以检查所花费的时间被限制在短时间内。因此，例如流行性感冒的检 查的现状是牺牲检查的精度，利用简易的免疫层析等的检查而短时间地进行。
[0004] 鉴于上述情况，医疗领域中，为了实现利用能够期待更高精度的PCR进行的检查， 必须缩短反应所需的时间。作为用于短时间内进行PCR的反应的装置，例如专利文献1中， 公开了一种生物体试样反应装置，其通过使填充有反应液和不与反应液混合且比重比反应 液小的液体的生物体试样反应用芯片在水平方向的旋转轴的周围旋转，从而使反应液移动 而实施热循环（专利文献1)。另外，作为PCR的一个方法，已公开利用了磁性珠的方法（专 利文献2)、使用磁性珠作为液滴的移动机构，通过使基板上的在温度变化区域的液滴移动 而进行PCR热循环的方法（专利文献3)等。
[0005] 专利文献
[0006] 专利文献1 :日本特开2009 - 136250号公报
[0007] 专利文献2 :日本特开2009 - 207459号公报
[0008] 专利文献3 :日本特开2008 - 012490号公报
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于提供能够缩短用于核酸扩增的核酸的分离所需的时间且保存 性好的核酸提取用设备。
[0010] 本发明的一个实施方式是一种核酸提取用设备，具有管部，该管部具有长边方向， 在内部依次配置有由蜡或油构成的第1塞子、由第1清洗液构成的第2塞子、由蜡构成的第 3塞子、由溶出液构成的第4塞子以及由蜡或油构成的第5塞子。在第3塞子与第4塞子 之间，从第3塞子侧可以进一步具有由第2清洗液构成的第6塞子、由蜡或油构成的第7塞 子。上述蜡可以为固体石蜡，上述蜡的熔点可以为41°C以上。在此，优选第7塞子为蜡。另 外，优选第1塞子和第5塞子为蜡。上述管部的第5塞子侧的端部可以开放，这种情况下， 可以进一步具有密封上述管部的第5塞子侧的端部的可自由拆卸的栓。
[0011] 在一个实施方式中，在上述管部的第1塞子侧的端部可以进一步具有可自由拆卸 的容器，上述容器的内部可以与上述管部的内部连通。上述容器可以具有挠性，通过使上述 容器在与上述管部连接的状态下变形，能够对上述管部的内部加压。
[0012] 另外，在一个实施方式中，在上述管部的第1塞子侧的端部可以具有储液部，可以 进一步具有密封上述储液部侧的端部的可自由拆卸的栓。上述储液部可以具有挠性，通过 使上述储液部在用上述栓密封上述储液部的状态下变形，能够对上述管部的内部加压。
[0013] 上述任一核酸提取用设备中，上述溶出液可以含有选自逆转录酶、dNTP和逆转录 用引物中的至少1个。而且，优选上述溶出液的体积为0. 5 y L~3. 0 y L，优选上述管部的 内径为〇? 5謹~3. Ctam〇
【附图说明】
[0014] 图1是示意性地表示实施方式涉及的核酸提取用设备的主要部位的图。
[0015] 图2是示意性地表示实施方式涉及的核酸提取用设备的主要部位的图。
[0016] 图3是示意性地表示实施方式涉及的核酸提取用设备的主要部位的图。
[0017] 图4是示意性地表示实施方式涉及的核酸提取用设备的图。
[0018] 图5是示意性地表示实施方式涉及的核酸提取用设备的图。
[0019] 图6是示意性地表示实施方式涉及的核酸提取用设备的主要部位的图。
[0020] 图7是示意性地表示实施方式的核酸提取用试剂盒的一个例子的图。
[0021] 图8是示意性地表示实施方式的核酸提取用试剂盒的一个例子的图。
[0022] 图9是用于说明实施方式的核酸提取方法的变型例的示意图。
[0023] 图10是示意性地表示实施方式的管的变型例的图。
[0024] 图11是表示实施方式涉及的核酸提取用装置的一个例子的立体图。
[0025] 图12是表示实施方式涉及的核酸提取用装置的一个例子的立体图。
[0026] 图13是表不在实施例1中硅油和固体石赌的保存1周后的结果的图表。
[0027] 图14是表示在实施例1中矿物油的保存1周后的结果的图表。
[0028] 图15是表不在实施例1中固体石赌的保存2周后的结果的图表。
[0029] 图16是表不在实施例1中固体石赌的保存6周后的结果的图表。
[0030] 图17A是示意性地表示实施例2中使用的（A)核酸提取用设备的一个例子的图。
[0031] 图17B是示意性地表示实施例2中使用的（B)核酸提取用装置的一个例子的图。
[0032] 图18是表示在实施例2中使用本发明涉及的核酸提取用设备进行RT - PCR的结 果的图表。
【具体实施方式】
[0033] 以下对本发明的几个实施方式进行说明。以下说明的实施方式说明本发明的例 子。本发明完全不限于以下的实施方式，还包括在不变更本发明主旨的范围内实施的各种 变型方式。应予说明，以下说明的构成不一定全部是本发明的必要构成要素。
[0034]1.核酸提取用设备
[0035] 本实施方式的核酸提取用设备1000具有管部100、第1塞子10、第2塞子20、第3 塞子30、第4塞子40以及第5塞子50。
[0036] 图1是示意性地表示本实施方式的核酸提取用设备1000的主要部位的图。
[0037] L L 管部
[0038] 管部100构成核酸提取用设备1000的主要部位。核酸提取用设备1000除包括管 部100之外，还包括各种构成。虽未图示，但核酸提取用设备1000例如可以包括与管部100 连接的配管、容器、栓、接头、泵、控制装置等。
[0039] 管部100是在内部具有空洞且能够使液体在该空洞内沿长边方向流通的筒状的 部分。管部100具有长边方向，但是可以弯曲。管部100的内部的空洞只要液体能够在管部 100内维持塞子形状，其大小、形状均没有特别限定。另外，管部100的内部的空洞的大小、 与长边方向垂直的截面的形状可以沿管部100的长边方向变化。关于液体是否能够在管部 100内维持塞子形状，取决于管部100的材质、液体的种类等条件，因此管部100的与长边 方向垂直的截面的形状可在液体能够在管部100内维持塞子形状的范围内适当地设计。
[0040] 管部100的外形的与长边方向垂直的截面的形状也没有限定。此外，管部100的 壁厚（从内部的空洞的侧面到外部的表面的长度）也没有特别限定。管部100的内部的空 洞的与长边方向垂直的截面为圆形时，管部100的内径（内部的空洞的与长边方向垂直的 截面中的圆的直径）例如可以为0.5mm~3_。如果管部100的内径为该范围，则容易在对 于管部100的材质、液体的种类而言广泛的范围容易形成液体的塞子，所以优选。
[0041] 管部100的材质没有特别限定，例如，可以是玻璃、高分子、金属等。但是，如果对 于管部100的材质选择玻璃、高分子等在可见光中具有透明性的材质，则能够从管部100的 外部观察内部（空洞内），所以更优选。另外，如果对于管部100的材质选择透过磁力的物 质、非磁性体，则使磁性粒子通过管部100时等，容易通过从管部100的外部施与磁力来进 行该动作，所以优选。
[0042] 在管部100的内部依次配置由蜡或油构成的第1塞子10、由第1清洗液构成的第 2塞子20、由蜡构成的第3塞子30、由溶出液构成的第4塞子40以及由蜡或油构成的第5 塞子50。在此，所谓蜡是室温下为固体而加热时成为液体的有机物，本发明中可使用的蜡具 有31°C以上、优选具有36°C以上、更优选具有41°C以上、进一步优选具有46°C以上，且具有 100°C以下、优选具有90°C以下、更优选具有80°C以下、进一步优选具有70°C以下的熔点， 优选由中性脂肪、高级脂肪酸、烃等构成。
[0043] 作为蜡，没有特别限定，例如，可以使用石蜡、微晶蜡等来自石油的蜡，蜜蜡、羊毛 蜡、鲸蜡等来自动物的蜡，巴西棕榈蜡、松香蜡、小烛树蜡、木蜡等来自植物的蜡，除此之外， 还可使用ELchrista(注册商标，出光兴产）、Nissan Elector (注册商标，日油株式会社）、 POEM(注册商标，Riken Vitamin)、RIKEMAL(注册商标，Riken Vitamin)、Neowax(注册商 标，Yasuhara Chemical株式会社）、HI_WAX(注册商标，三井化学）、Silicone Wax (注册商 标，Dow Corning Toray)等。另外，作为油，例如，可举出选自二甲基硅油等娃系油、石赌系 油和矿物油以及它们的混合物中的一种。
[0044] 1. 2.第1塞子、第3塞子和第5塞子
[0045] 第1塞子10、第3塞子30和第5塞子50由蜡或油构成。第1塞子10、第3塞子 30和第5塞子50的蜡可以是相同种类的蜡，也可以是相互不同种类的蜡。另外，第1塞子 10和第5塞子50使用油时，可以是相同种类的油，也可以是不同种类的油。
[0046] 在第1塞子10与第3塞子30之间配置第2塞子20。在第1塞子10的与第2塞 子20相反侧的区域可以配置其它液体的塞子。优选第1塞子10中没有气泡、其它液体，但 只要吸附有核酸的粒子等能够通过第1塞子10,也可以存在气泡、其它液体。另外，优选在 第1塞子10与第2塞子20之间没有气泡、其它液体，但只要吸附有核酸的粒子等能够从第 1塞子10向第2塞子20通过，也可以存在气泡、其它液体。同样，优选在第2塞子20与第 3塞子30之间没有气泡、其它液体，但只要吸附有核酸的粒子等能够从第2塞子20向第3 塞子30通过，也可以存在气泡、其它液体。
[0047] 在第3塞子30与第5塞子50之间配置第4塞子40。在第