干酪乳杆菌Lactobacillus casei strain Qian工作发酵剂制品及其肠道调节食疗用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种可调节肠道运动、预防便秘的干酪乳 杆菌 Lactobacillus casei strain Qian 及其用途。
【背景技术】
[0002] 乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB)是一类能利用可发酵碳水化合物产生大 量乳酸的细菌的通称。这类细菌在自然界分布极为广泛，具有丰富的物种多样性。乳酸菌 不仅可以提高食品的营养价值，改善食品风味，提高食品保藏性和附加值。除极少数外，其 中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道 中。大量研宄表明，乳酸菌能够调节机体胃肠道正常菌群、保持微生态平衡，提高食物消化 率。乳酸菌也是益生菌株的主要来源，目前发现了如干酪乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌属 等益生菌菌株具有多种保健功能。如降低血清胆固醇，控制内毒素，抑制肠道内腐败菌生长 繁殖和腐败产物的产生，制造营养物质，刺激组织发育等。
[0003] 便秘是非常普遍的一种疾病，在人群中的患病率高达27%，它可以影响各年龄段 的人。习惯性便秘因用力增加腹压，屏气使劲排便，是诱发中老年男性高血脂、心脑血管疾 病、动脉硬化、肿瘤等疾病及其并发症的罪魁祸首，从而导致老人心脑血管病变死亡率急剧 增加，出现痔疮、肛裂等问题，令人痛苦不堪。因便秘发病率高、病因复杂，患者常有许多苦 恼，便秘严重时会影响生活质量。因此，寻找一种能够代替药物来预防便秘的生物制品有很 大的现实意义，微生态疗法恰是以一个崭新的手段解决了传统疗法存在的多种问题。
[0004] 国内外对乳酸菌的生理功能有大量的研宄报道，但对乳酸菌预防便秘的功能性研 宄报道很少。关于乳酸菌预防便秘的研宄对食品科学、预防医学和微生态学等许多学科都 有很大价值。发酵乳制品是人们摄入乳酸菌的一条重要渠道，筛选优良的具有预防便秘和 安全的乳酸菌菌株，对于开发功能性乳制品、丰富现有乳制品种类、提高乳品的附加值将具 有重要意义。因此，具有预防便秘的乳酸菌具很大的研宄和应用价值。
[0005] 在目前已经公开的文献与专利或专利申请中，例如CN1796540A公开了具有抗肠 道致病菌和抗氧化特性的双歧杆菌及其用途，用于制备食品组合物或药物组合物，杀死或 抑制幽门螺旋杆菌或大肠杆菌，治疗由其引起的各种疾病。CN101144064A公开了一种具有 抗致突变活性、产胞外多糖的短乳杆菌及其用途，用于发酵食品中以改善食品品质，增加其 营养学功能。CN101144065A公开了一种耐过氧化氢、清除自由基的抗氧化干酪乳杆菌及其 用途，用于发酵食品及乳品胶囊制品中以开发功能性乳制品、丰富现有乳制品种类、提高 乳品的附加值。CN102174450A公开了一种抗幽门螺杆菌感染的植物乳杆菌及其用途，用于 制备药物组合物、发酵剂、动物饲料添加剂和保健品中来预防或减轻幽门螺杆菌的感染。但 是，这些专利或专利申请没有完全涉及具有调节肠道运动、预防便秘等性能的微生物。因 此，目前还需要有一种具有调节肠道运动、预防便秘的微生物及其含有它们的食品。
【发明内容】
[0006] 为了解决上述问题，本发明提供了一种可调节肠道运动、预防便秘的干酪乳杆菌 及其用途，主要提供一种可调节肠道运动、预防便秘的干酪乳杆菌菌株和提供一种所述干 酪乳杆菌在发酵食品中的用途。
[0007] 从自然发酵牦牛酸乳中筛选出一株干酪乳杆菌（Lactobacillus casei strain Qian)，利用形态特征、培养性状和生理生化特征等微生物学特性对该乳酸杆菌 (Lactobacillus casei strain Qian)鉴定为干酷乳杆菌，该菌株已于2013年10月25日 保藏于中国典型培养物保藏中心（中国.武汉.武汉大学），保藏编号CCTCC N0:M2013514。
[0008] 所述干酪乳杆菌的形态学特征具体为：
[0009] 菌体特征：呈革兰氏染色阳性，细胞杆状，菌体约0. 5-1. 0 y m宽，2. 5-4 y m长，成 单、成对或者成链，不形成芽孢，两端圆形。
[0010] 菌落特征：在MRS培养基上形成明显的菌落，直径在0. 5-2. 0mm之间，圆形，边缘整 齐，乳白色，透明，表面湿润光滑，不产生色素。
[0011] 所述干酪乳杆菌体内耐受特征为：
[0012] 干酪乳杆菌的菌株耐酸性较强，在PH3. 0的人工胃液下处理3h后存活率 达到了 62. 51±7. 35%，在1.0 %浓度胆盐下可以缓慢生长，生长效率达到无胆盐培 养的 7. 86±0. 45 %，Lactobacillus casei strain Qian 细胞的疏水性也达到了 51. 30±4. 28%，在人的肠道内正常生长。
[0013] 所述干酪乳杆菌来源于传统发酵食品，属公认安全（Generally Recognized As Safe, GRAS)菌种。
[0014] 本发明目的的实现手段为：
[0015] 一种干酪乳杆菌Lactobacillus casei strain Qian工作发酵剂制品，中国典型 培养物保藏中心保藏编号CCTCC N0:M2013514,采用如下的步骤制得目标物：1)将上述干 酪乳杆菌（Lactobacillus casei strain Qian)原始菌种接种于MRS液体培养基中，在 37°C条件下培养12-16h进行活化，连续活化两代，然后将活化培养物按2-4% (体积）接种 于MRS培养基中，培养16-18h，在4°C条件下4000r/min离心15min，去除上清夜，得到细胞 沉淀，将沉淀用一定量的无菌脱脂乳制成悬浮液，得到工作发酵剂；2)由1)所得目标工作 发酵剂直接添加到食品中或者与可共生的制备发酵乳的商业发酵剂一起使用制备发酵乳。
[0016] 所述商业发酵剂为保加利亚乳杆菌或嗜热链球菌。
[0017] 本发明的另一目的是提供一种干酪乳杆菌工作发酵剂制品肠道调节预防便秘食 疗用途。采用的具体手段为：
[0018] -种干酪乳杆菌工作发酵剂制品肠道调节预防便秘食疗用途，作为发酵剂添加到 食品中添加或者与可共生的制备发酵乳的商业发酵剂一起使用制备发酵乳，以获得调节肠 道运动预防便秘保健作用，最佳使用剂量1. 〇X 109CFU每公斤体重。
[0019] 所述干酪乳杆菌工作发酵剂制品肠道调节预防便秘食疗用途，所述食品包括人类 食品、动物饲料或保健品。
[0020] 所述食用对象包括人类和养殖动物，方法添加在日常食品中使食用对象获得调节 肠道运动预防便秘的保健作用。
[0021] 所述发酵食品为含有干酪乳杆菌的乳酸菌奶饮料、乳粉、胶囊制品或发酵乳中的 一种或多种。
[0022] 所述含有干酪乳杆菌的乳酸菌奶饮料是按照下述步骤制备得到的：
[0023] 所述干酪乳杆菌的原始菌种在温度_75°C下以30% (重量）甘油悬液形式保存， 或者在温度4°C下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；
[0024] 利用所述干酪乳杆菌的原始菌种制备干酪乳杆菌工作发酵剂；
[0025] 原料乳在95°C下加热杀菌20min或在140°C下高温热杀菌2s，冷却到4°C，加入所 述干酪乳杆菌工作发酵剂，使其浓度达到10 6cfu/mL以上，在4°C冷藏保存。
[0026] 所述含有干酪乳杆菌的乳粉是按照下述步骤制备得到的：
[0027] 所述干酪乳杆菌的原始菌种在温度_75°C下以30% (重量）甘油悬液形式保存， 或者在温度4°C下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；
[0028] 利用所述干酪乳杆菌的原始菌种制备干酪乳杆菌工作发酵剂，原料乳在95°C下加 热杀菌20min或在140°C下高温热杀菌2s，然后冷却到37°C，再以原料乳体积的4%接菌量 接种所述的干酪乳杆菌工作发酵剂，37°C下发酵16h，得到干酪乳杆菌发酵乳；所述干酪乳 杆菌发酵乳和灭菌后的原料乳按照1:3(V:V)配比加入，进行均质，真空浓缩、喷雾干燥得 到含干酪乳杆菌的乳粉。
[0029] 所述含有干酪乳杆菌的胶囊制品是按照下述步骤制备得到的：
[0030] 所述干酪乳杆菌的原始菌种在温度_75°C下以30% (重量）甘油悬液形式保存， 或者在温度4°C下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；
[0031] 利用所述干酪乳杆菌的原始菌种制备干酪乳杆菌工作发酵剂；
[0032] 将原料乳在140°C高温热杀菌2s，然后冷却至37°C，以原料乳体积的4%接菌量接 种所述干酪乳杆菌工作发酵剂，在37°C下发酵16h，得到干酪乳杆菌发酵乳；将所述干酪乳 杆菌发酵乳和灭菌后的原料乳按照以1:3(V:V))配比加入，均质，真空浓缩、喷雾干燥处理 后得到乳粉，将得到含有干酪乳杆菌的胶囊制品。
[0033] 所述含有干酪乳杆菌的发酵乳是按照下述步骤制备得到的：
[0034] 所述干酪乳杆菌的原始菌种在温度_75°C下以30% (重量）甘油悬液形式保存， 或者在温度4°C下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；
[0035] 利用所述干酪乳杆菌的原始菌种制备干酪乳杆菌工作发酵剂；原料乳在95°C下 加热杀菌20min或在140°C下高温热杀菌2s，然后冷却到37°C，再按照3-5% (体积）加入 干酪乳杆菌工作发酵剂，再加入3-5% (体积）可共生的用于制备发酵乳制品的发酵剂，混 匀后在37°C下混菌发酵至滴定酸度以乳酸计0. 6-0. 7%，然后冷却至4°C，再进行冷藏保存 得到含有干酪乳杆菌的发酵乳。
[0036] 所述的商品发酵剂优选的是保加利亚乳杆菌或嗜热链球菌。
[0037] 在本发明的意义上，所述的原料乳是一种或多种选自脱脂奶、鲜奶、复原奶的原料 乳。
[0038] 本发明实施例的技术方案带来的有益效果如下：
[0039]本发明为一种分离自西藏自治区墨竹工卡县牧民家自然发酵牦牛酸乳中的可调 节肠道运动、预防便秘的干酪乳杆菌和以该菌株为发酵剂或添加的发酵乳、健康食品以及 动物保健制品中的应用，干酪乳杆菌（Lactobacillus casei strain Qian)菌株的耐酸性 较强，在pH3. 0的人工胃液下处理3h后存活率达到了 62. 51 ±7. 35%，在1. 0%浓度胆盐下 可以缓慢生长，生长效率达到无胆盐培养的7. 86±0. 45%，Lactobacillus casei strain Qia