一种高效提取蓝莓花青素的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及物质提取技术领域，具体涉及一种高效提取蓝莓花青素的方法，以实现蓝莓花青素的高效提取和纯化方法。
【背景技术】
[0002]蓝莓花青素是蓝莓的一种主要活性成分，具有很强的抗氧化性，并具有促进视红素再合成、抗炎症、提高免疫力、抗心血管疾病、抗衰老、抗癌等多种生理活性功能，受到国内外专家的高度关注，成为目前蓝莓研宄的热点之一。
[0003]蓝莓花青素的提取是蓝莓研宄发展的前提，也是花青素生产和投入使用的关键环节。在蓝莓花青素的提取研宄方面，现有技术主要有用溶剂浸提的，也有用酶法提取的，但这些提取方法均存在提取时间长、提取率低、有效成分损耗大，提取成本高等缺点。
[0004]中国专利文献申请号为CN201310312112.6的资料中公开了一种蓝莓花青素的提取方法，该方法对果汁采用组合有机溶剂法进行浸提，以提高色素的提取率。为保证色素的原有性质不变，在提取全过程中采用低温控酸法保持色素的稳定性，可解决蓝莓花青素提取物的浓度低、提取过程花青素损耗较大的问题。
[0005]中国专利文献申请号为CN201010246735.4的资料中公开了一种蓝莓花青素的提取方法，该方法使用有机酸酸化的乙醇作为提取剂，在保证高提取率的前提下避免强酸对设备的腐蚀，同时以蓝莓果为原料提取蓝莓花青素，解决蓝莓果采收季节性强不易储藏的冋题。
[0006]以上提取方法都各有优点，但为了更加高效提取蓝莓花青素，依然有必要对现有技术作进一步改进。
【发明内容】
[0007]本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提供一种工艺简单、成本低、效率高的蓝莓花青素提取和纯化方法。
[0008]本发明的蓝莓花青素提取和纯化方法是以蓝莓果或蓝莓叶为原料，采用先酶解，再醇提的方法，最大程度地将蓝莓花青素提取出来，经过萃取除脂、大孔树脂除杂，得到精制的蓝莓花青素。本发明所用的蓝莓果可以是新采摘的蓝莓鲜果，或低温贮藏并解冻的蓝莓果；所用的蓝莓叶为蓝莓叶干燥粉末。
[0009]本发明的技术方案如下:
本发明是这样一种高效提取蓝莓花青素的方法，它是以蓝莓果或蓝莓叶为原料提取蓝莓花青素，它包括提取蓝莓花青素粗提物和纯化的步骤；它米用先酶解，再醇提的方法获得蓝莓花青素粗提物，然后对蓝莓花青素粗提物进行纯化，通过萃取除脂、大孔树脂除杂后得到精制的蓝莓花青素。
[0010]优选的，本发明所采用的蓝莓果为新采摘的蓝莓鲜果或低温贮藏并解冻的蓝莓果；所采用的蓝莓叶为蓝莓叶干燥粉末。
[0011]进一步的，本发明的这种高效提取蓝莓花青素的方法中，前述的提取蓝莓花青素粗提物包括如下步骤:
1)原料预处理:取新采摘的蓝莓鲜果，或低温贮藏并解冻的蓝莓果，清洗除杂备用；或取清洗干燥后的蓝莓叶，用粉碎机粉碎备用；
2)酶解:向步骤I)处理过的蓝莓果或蓝莓叶中加入0.005%~0.5%的生物酶，在室温下避光静置1~5小时；
3)醇提:向步骤2)中加入酸性醇溶液，在室温下避光搅拌3~8小时；
4)浓缩:将步骤3)的浸提液用滤布过滤，滤液减压回收乙醇即得蓝莓花青素粗提物。
[0012]其中，步骤2)所述的生物酶为纤维素酶、果胶酶、果汁酶、复合果浆酶、葡聚糖酶等中的一种或二种以上的组合。
[0013]其中，步骤3)所述的酸性醇溶液中，酸包括盐酸、硫酸、三氟乙酸、柠檬酸、酒石酸、甲酸、乙酸或丙酸的一种，醇包括甲醇、乙醇、丙醇或丁醇等中的一种；酸性醇溶液的pH=2~4，醇含量为40%~95%，料液比为1:2~20。
[0014]进一步的，本发明的这种高效提取蓝莓花青素的方法中，前述的纯化包括如下步骤:
5)脱脂:将蓝莓花青素粗提物溶解于适量的酸性水溶液中，加入适量酯萃取3次，除去脂层；
6)大孔树脂除杂:将步骤5)中的非脂层加入到大孔树脂柱中，用乙醇水按梯度洗脱，收集合适洗脱液，减压回收乙醇；
7)干燥:将步骤6)得到的产物进行冷冻干燥，得到精制的蓝莓花青素。
[0015]其中，步骤5)所述的酯包括乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯等中的一种；所述酸性水溶液的PH=1~4，其中的酸包括盐酸、硫酸、三氟乙酸、柠檬酸、酒石酸、甲酸、乙酸或丙酸等中的一种。
[0016]其中，步骤5)所述的大孔树脂的型号包括D101、D3520、D4020、DA201、HPD-100,XAD-7、X-5、AB-8、H103、NKA-9、S-8 等中的一种。
[0017]其中，步骤6)所述的乙醇水中乙醇的梯度浓度范围为0%~80%。
[0018]其中，步骤6)所述的合适洗脱液是指乙醇含量为250/『75%的洗脱液。
[0019]本发明同时将溶剂提和酶提结合起来，先用酶解来提高蓝莓花青素的出汁率，再用溶剂将蓝莓花青素提取出来。该提取方法不仅可以大大缩短提取时间，最大程度地将有效成分提取出来，显著提高提取率，而且操作简单易行、生产工艺参数稳定、产品质量稳定，适合工业化生产；另外，本发明提取纯化的蓝莓花青素精品最高含量可达49.6%，具有极高的应用价值。
【附图说明】
[0020]图1为本发明的高效提取蓝莓花青素的工艺流程示意图。
【具体实施方式】
[0021]下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明。
[0022]以下提供本发明的【具体实施方式】，可以更好地理解本发明，但应该指出，本发明的实施不局限于以下的实施方式，对于技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应该视为本发明的保护范围。
[0023]实施例1:
将新采摘的蓝莓鲜果，先在室温下喷洒0.02%的纤维素酶，避光3.5小时后，按料液比1:10加入pH=3.0的柠檬酸-60%乙醇，继续搅拌5小时，抽滤，滤液在减压下旋转回收乙醇，得到蓝莓花青素粗提物，为红褐色浸膏。
[0024]将上述的蓝莓花青素粗提物溶解于适量的pH=3.0的柠檬酸溶液中，用乙酸乙酯萃取3次，除去脂层，非脂层加入到DA201大孔树脂柱中，先用4倍体积的超纯水洗脱，再依次用10%、30%的乙醇洗脱，收集30%的乙醇洗脱液，减压旋转回收乙醇，得到的产物进行冷冻干燥，得到紫褐色的蓝莓花青素粉末。采用2%HCl-Methanol降解法，利用紫外分光光度计进行花青素含量的测定，为48.5%。
[0025]实施例2:
将-40°C贮藏并在0°C下解冻过夜的蓝莓果，先在室温下喷洒0.04%果汁酶，避光4小时后，按料液比1: 15加入pH=3.5的柠檬酸-50%乙醇中，继续搅拌4小时，抽滤，滤液在减压下旋转回收乙醇，得到蓝莓花青素粗提物，为紫红色浸膏。
[0026]将上述的蓝莓花青素粗提物溶解于适量的pH=l.0的盐酸溶液中，用乙酸乙酯萃取3次，除去脂层，非脂层加入到AB-8大孔树脂柱中，先用3倍体积的超纯水洗脱，再依次用10%、25%、45%的乙醇洗脱，收集45%的乙醇洗脱液，减压旋转回收乙醇，得到的产物进行冷冻干燥，得到紫褐色的蓝莓花青素粉末。采用2%HCl-Methanol降解法，利用紫外分光光度计进行花青素含量的测定，为38.5%。
[0027]实施例3:
将新采摘的蓝莓鲜果，先在室温下喷洒0.02%的纤维素酶-果胶酶，避光3.5小时后，按料液比1:8加入pH=3.0的柠檬酸-70%乙醇，继续搅拌6小时，抽滤，滤液在减压下旋转回收乙醇，得到蓝莓花青素粗提物，为红褐色浸膏。
[0028]将上述的蓝莓花青素粗提物溶解于适量的pH=3.5的柠檬酸溶液中，用乙酸乙酯萃取3次，除去脂层，非脂层加入到DlOl大孔树脂柱中，先用4倍体积的超纯水洗脱，再依次用10%、25%、50%的乙醇洗脱，收集50%的乙醇洗脱液，减压旋转回收乙醇，得到的产物进行冷冻干燥，得到紫褐色的蓝莓花青素粉末。采用2