一种具有低致敏性的全营养牡蛎活性肽制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种肽的制备方法，尤其涉及一种具有低致敏性的全营养牡蛎活性肽 制备方法，可应用于功能食品和营养保健制品，属生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 自1975年Hughes等报道从动物组织中发现了具有类吗啡活性的小肽以来，人们 已经从动、植物和微生物中分离出多种多样的生物活性肽，并且已经有研宄证明，经酶解天 然来源蛋白原料后得到的各种生物活性肽类制品不仅更易于人体吸收，而且其特有的结构 和性质通常能表现出抗氧化、抗疲劳、降血脂、降血压、增强免疫力等一系列生理功能，对 天然来源的蛋白实施酶解制备生物活性肽，还具有原料来源广泛、无毒副作用、可规模化生 产、价格便宜等优点。
[0003] 牡蛎是我国四大经济水产之一，蕴含丰富的蛋白质、多肽、多糖和功能氨基酸等生 理活性物质，以及多种人体必需的维生素、矿物质，具有很高的营养价值。近年诸多以牡蛎 为原材料进行的活性肽研宄屡见报道，然而这些报道中多中存在活性肽产率低，制备过程 复杂，以及在制备过程丢失大量牡蛎除了蛋白质以外的其他营养成分等问题。并且同时由 于鱼类、甲壳类、贝类、头足类等水产动物普遍存在致敏问题，如何在制备牡蛎活性肽的过 程中降低其致敏性，同时能最大程度保留活性肽的生理活性、提高牡蛎活性肽的产率，以及 最大程度保留牡蛎自身所含的各类营养物质成为有待解决的问题。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种具有低致敏性的全营养牡蛎活性肽制备方法，以拓宽牡 蛎蛋白的加工和利用途径，同时得到具有保健功效的牡蛎活性肽，并可应用于工业化方法。
[0005] 本发明还提供了一种具有低致敏性的全营养牡蛎活性肽，所述牡蛎活性肽通过以 上方法制得，该牡蛎活性肽的抗原性较牡蛎蛋白降低70 %以上，最大程度保留了牡蛎自身 所含的各类营养物质，并且该牡蛎活性肽中分子量小于1000 Da的组分占80%以上。
[0006] 本发明提供的一种具有低致敏性的全营养牡蛎活性肽制备方法，包括
[0007] 1)将牡蛎去壳清洗后，加水碾磨成牡蛎浆，去壳牡蛎与水的重量比为1:1-5 ;
[0008] 2)在所述牡蛎浆中加入柠檬酸调整pH至5-7,然后进行以下4步酶解：
[0009] (1)将该牡蛎浆加热至60°C -90°C，按每克牡蛎加入10-100U的α -淀粉酶酶解 2-6小时，将得到的酶解液1加热灭酶；
[0010] (2)将酶解液1温度调节至40°C -70°c，按每克牡蛎加入20-80U的糖化酶酶解2-6 小时，将得到的酶解液2加热灭酶；
[0011] (3)将酶解液2加入NaOH调整pH至6-8,在30°C -60°c条件下，按每克牡蛎加入 10-100U的木瓜蛋白酶酶解2-4小时，得到酶解液3 ;
[0012] (4)将酶解液3按每克牡蛎加入10-50U的风味蛋白酶酶解2-4小时，将得到的酶 解液4进行加热灭酶，收取酶解液4,经后处理成为所述活性肽。
[0013] 本发明采用了磨浆处理与酶解相结合的工艺，对牡蛎蛋白进行酶解，最终得到具 有生物活性的牡蛎肽，本发明称为"牡蛎活性肽"。可以根据需要对酶解产物实施适当的加 工纯化，得到相关形态的牡蛎活性肽产品，例如液态或粉体等。
[0014] 根据本发明的一个实施方案，还包括以下制备牡蛎活性肽粉的步骤：
[0015] 1)对所得到的酶解液4进行离心，转速10000-16000r/min，留用离心清液，即牡蛎 肽上清液；
[0016] 2)将上述牡蛎肽上清液进行蒸发浓缩，直到浓缩液的固含量为20-50%，条件为 蒸汽压 0. 1±0. 02MPa，温度 40-80°C ;
[0017] 3)用板框过滤设备对浓缩后的牡蛎肽上清液进行过滤，条件为压力0. 2-0. 4MPa， 温度30-80°C，制得牡蛎肽透过液；在牡蛎肽透过液中按照固体重量加入0. 1 % -0. 5%的硬 脂酰乳酸钠，然后进行均质得到牡蛎肽均质液，并对该均质液实施灭菌；
[0018] 4)用离心喷雾干燥器将上述牡蛎肽均质液进行干燥处理，条件为进口温度 140-160°C，出口温度80-90°C，制成牡蛎活性肽粉。
[0019] 根据本发明的方法，首先要求对作为原料的牡蛎肉实施磨浆目的是把牡蛎肉的组 织充分细化、均匀化，从而提供作为用于酶解制取牡蛎活性肽的原料（酶解底物）。在本申 请的方案中，对牡蛎浆不进行分离而直接进行酶解处理，最大程度保留牡蛎的自身所含的 各类营养物质。
[0020] 本发明采用的酶解过程包括了对磨浆处理的料液进行α -淀粉酶、糖化酶、木瓜 蛋白酶和风味蛋白酶的酶解，而所使用的酶制剂均可来自市售产品，并按照其要求的酶解 条件实施即可，例如，在所使用酶制剂的适宜的PH环境及酶解温度下控制适当的酶解时间 完成所需酶解。在一个具体方案中，可按照每克牡蛎加入l〇_l〇〇U(酶活力单位，U)的α-淀 粉酶酶，每克牡蛎加入20-80U的糖化酶，每克牡蛎加入10-100U的木瓜蛋白酶，以及每克牡 蛎加入10-50U的风味蛋白酶进行酶解。对所购得的酶制剂的酶活力通过简单换算即可确 定具体用量。
[0021] 对于经过酶解的酶解物料需要实施灭酶，可以通过维持对该物料加热一定时间， 实现灭酶。例如，灭酶条件可以为：将酶解物料加热到100-130°C，维持10s-15min。也可以 根据所使用的酶制剂以及酶解程度而自行确定适当的灭酶操作，例如，也可以采用高温瞬 时灭酶。
[0022] 在本发明的一个【具体实施方式】中，所述酶解液加热灭酶的条件是，加热到100°c， 灭酶15min。对均质液实施灭菌的条件为超高温瞬时灭菌135°C，10s。
[0023] 酶解液经灭酶和必要分离浓缩处理，即可成为本发明所需要的牡蛎活性肽产物， 可以根据最终产品的要求，经调配成液体产品，或者经干燥成为粉状产品。
[0024] 本发明提供的是一种工业化生产工艺，所使用的设备均可商购得到，具体规格和 型号均按照需要选择配套即可。例如，
[0025] 对灭酶后的酶解液实施离心分离时，可使用管式离心机或其它可行的设备。然后 对离心后的上清液进行蒸发浓缩，制取固含量为20-50%的浓缩液，可使用三效降膜蒸发 器，控制蒸汽压〇. I ±0. 〇2MPa，浓缩温度不高于80°C，例如40-80°C，当然，也可使用其它常 用的蒸发设备。
[0026] 对浓缩后的牡蛎肽上清液可通过膜过滤实现纯化，得到澄清的牡蛎活性肽透过 液，可以选择采用的板框过滤设备进行过滤，得到牡蛎肽透过液。
[0027] 本发明还提供了按照上述方法制备的一种具有低致敏性的全营养牡蛎活性肽。
[0028] 本发明还提供了所述的具有低致敏性的全营养牡蛎活性肽作为产品或原料在保 健功能性食品或药剂中的应用。
[0029] 按照本发明方法得到牡蛎活性肽，通过间接竞争ELISA方法检测的抗原性较牡蛎 蛋白降低70%以上，并能最大程度保留牡蛎自身所含的各类营养物质例如糖组分，锌、硒等 微量元素的含量，以及牛磺酸的含量也得到很好的保留。采用凯氏定氮法方法检测牡蛎活 性肽的蛋白含量达到了 50%以上，并且该牡蛎活性肽中分子量小于1000 Da的组分占80% 以上。本发明的方案最大程度保留了牡蛎自身所含的各类营养物质，获得的牡蛎活性肽可 以作为新的功能性营养成分应用于食品、保健食品和药品的开发与生产。
【附图说明】
[0030] 图1为4种已知相对分子质量的标准品配成标准溶液的凝胶渗透色谱图。
[0031] 图2为牡蛎活性肽样品1的凝胶渗透色谱图。
[0032] 图3为牡蛎活性肽样品2的凝胶渗透色谱图。
[0033] 图4为牡蛎活性肽样品3的凝胶渗透色谱图。<