一种芍药苷单体的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物的提取分离领域，尤其涉及一种芍药苷单体的提取方法。
【背景技术】
[0002]赤苟为毛茛科植物苟药，Paeonialactiflora Pal1.或川赤苟，aeonia veitchiiLynch.的干燥根。味苦；性微寒。具有清热凉血；活血祛瘀的药效。主温毒发斑；吐血衄血；肠风下血；目赤肿痛；痈肿疮疡；闭经；痛经；崩带淋浊；瘀滞胁痛；疝瘕积聚；跌扑损伤。现代药理实验证明具有扩张冠状动脉，增加血流量的作用；可用于冠心病的胸闷，心绞痛，高月旨血症。
[0003]芍药苷为赤芍的主要活性成分，具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿的作用，要用于头痛眩晕、肋痛、四肢挛痛、血虚萎黄、月经不调、自汗、盗汗等。
[0004]目前关于芍药苷的提取主要有水提法、稀醇渗漉法、乙醇回流提取法、微波提取法、超声波提取法、CO2超临界萃取法等，而纯化手段则采用柱层析或大孔吸附树脂分离。这些提取方法和纯化手段总体缺陷为芍药苷的杂质多，溶剂消耗量大、残留大、流程长，后期纯化困难，少部分的芍药苷在大孔吸附树脂纯化时流失，使产品的收率下降，后期的纯化方法很难达到含量98%以上的纯品。
【发明内容】
[0005]发明目的:为了克服现有技术中传统芍药苷提取方法存在的缺陷，本发明提出了一种工艺简单、易操作、快速、高效、产品纯度高的芍药苷单体的提取方法。
[0006]技术方案:为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为:一种芍药苷单体的提取方法，包括以下步骤:
[0007](I)取赤芍药药材进行粉碎，过筛后置于酸性水溶液中进行浸泡l_2h，药材与酸性水溶液体积比为1:10，浸泡完成后，取出药材采用超声波微波组合设备进行萃取，调节超声波功率为600-800W，微波功率为600-1000W ;萃取时间为40min，压滤后得到一次提取液；向滤渣中加入体积为5倍的酸性水溶液继续萃取40min，过滤后得二次提取液；
[0008](2)将一次提取液和二次提取液混合均匀，用1-3倍注体积的有机溶剂进行萃取，萃取次数为两次，取两次得到的下层萃取液进行合并混合，减压浓缩后得到芍药总苷提取物；
[0009](3)将上述得到的芍药总苷提取物用水溶解，提取物与水的体积比为1:10，调节PH至5-6，采用C18反相硅胶色谱柱，有机溶剂和水作为流动相，梯度洗脱，最后经过半制备型液相色谱仪进行分离纯化后，收集到芍药苷单体。
[0010]更为优选的，所述步骤⑴中过筛的目数为60目，以得到更优的芍药苷提取原料。
[0011]更为优选的，所述步骤⑴中酸性水溶液的pH为3-6。
[0012]更为优选的，所述步骤(I)中酸性水溶液中的酸具体为硫酸、盐酸或醋酸中的一种。
[0013]更为优选的，所述步骤(2)中萃取的有机溶剂为乙酸乙酯和石油醚中的一种。
[0014]更为优选的，所述步骤(3)中作为流动相的有机溶剂为甲醇或乙醇中的一种。
[0015]更为优选的，所述步骤(3)中梯度洗脱的条件为:0-45min，甲醇30% ;45_90min，甲醇60 %，90-100min，甲醇100 %，流速4mL/min，柱温为20°C，紫外检测波长为254nm，收集保留时间在60-80min的馏分。
[0016]更为优选的，所述步骤(3)中梯度洗脱的条件为:0-30min，甲醇30% ;30_90min，甲醇60 %，90-1 1min,甲醇100 %，流速4mL/min，柱温为20°C，紫外检测波长为254nm，收集保留时间在45-70min的馏分。
[0017]更为优选的，所述步骤(3)中梯度洗脱的条件为:0-40min，甲醇30% ;40_90min，甲醇60%，90-120min，甲醇100%，流速4mL/min，柱温为20°C，紫外检测波长为254nm，收集保留时间在55-75min的馏分。
[0018]有益效果:本发明提供的一种芍药苷单体的提取方法，以酸性水溶液为溶剂、结合超声-微波相结合的组合萃取技术对芍药苷单体进行提取，与传统的柱层析或大孔树脂吸附法相比具有如下明显优点:a)具有快速、彻底、效率高的优点，在生产过程中可缩短生产周期和提高芍药苷的提取率山)减少了分离过程中的损失，易于操作及工业化生产c)使用制备色谱进行纯化，具有损失低，产品纯度高的特点；该半制备的色谱条件可同比放大，适用于工业级生物医药用液相制备色谱装置，以实现高纯度芍药苷的工业化生产。
【具体实施方式】
[0019]下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明:
[0020]实施例1:
[0021]I)试验步骤:
[0022](I)取赤芍药药材10g进行粉碎，过60目筛后置于pH为3-6的溶质为硫酸的酸性水溶液中进行浸泡lh，药材与酸性水溶液的体积比为1:10，浸泡完成后，取出药材采用超声波微波组合设备进行萃取，调节超声波功率为600-800W，微波功率为600-1000W ;萃取时间为40min，压滤后得到一次提取液；向滤渣中加入体积为5倍的pH为3_6的酸性水溶液继续萃取40min，过滤后得二次提取液；
[0023](2)将一次提取液和二次提取液混合均匀，用I倍注体积的有机溶剂乙酸乙酯进行萃取，萃取次数为两次，取两次得到的下层萃取液进行合并混合，减压浓缩后得到芍药总苷提取物；
[0024](3)将上述得到的芍药总苷提取物用水溶解，提取物与水的体积比为1:10，调节pH至5，采用C18反相娃胶色谱柱，色谱柱尺寸为Φ 10 X 250mm，C18反相娃胶填料，粒径为10 μ m，流动相为纯甲醇-水溶液，梯度洗脱，洗脱条件为:0-45min，甲醇30% ;45_90min，甲醇60 %，90-100min,甲醇100 %，流速4mL/min，柱温为20°C，紫外检测波长为254nm，最后经过半制备型液相色谱仪进行分离纯化后，收集保留时间在60-80min的馏分，得到芍药苷单体。
[0025]2)试验结果:
[0026]经HPLC分析，纯度彡98.6%。
[0027]实施例2:
[0028]I)试验步骤:
[0029](I)取赤芍药药材10g进行粉碎，过60目筛后置于pH为3-6的溶质为盐酸的酸性水溶液中进行浸泡2h，药材与酸性水溶液体积比为1:10，浸泡完成后，取出药材采用超声波微波组合设备进行萃取，调节超声波功率为600-800W，微波功率为600-1000W ;萃取时间为40min，压滤后得到一次提取液；向滤渣中加入体积为5倍的pH为3_6的酸性水溶液继续萃取40min，过滤后得二次提