一种重组人自身抗原Scl-70的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种重组人自身抗原。
【背景技术】
[0002]自身免疫性疾病(Autoimmune Diseases，AID)是泛指机体免疫效应细胞或免疫效应分子，针对自身组织或细胞出现异常免疫应答反应，导致组织损坏或功能障碍的疾病，是一类发病率高，可侵袭全身系统，严重危害人类健康的、致残率、致死率高的疾病。
[0003]在AID疾病的各种检测项目中，由于抗核抗体(ANA)与AID密切相关，是自身免疫反应的重要靶位，因此抗核抗体检测在AID疾病中一直处于重要位置，是临床上一项极其重要的筛选试验。随着人们认识的不断加深，抗核抗体(Antinuclear antibody, ANA)的定义已由原来传统的针对细胞核扩展到现在的整个细胞，指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。目前已发现了具有不同临床意义的三十多种ANA，常见的如抗dsDNA抗体和抗Sm抗体是系统性红斑狼疮的标志性抗体，而抗SS-A (Ro)抗体和抗SS-B (La)抗体则多出现于干燥综合症患者等。
[0004]目前常用的检测方法主要有两种，间接免疫荧光法(IIF)和ELISA法。IIF法一直是临床常规的筛选试验，尽管该方法检测灵敏度高，但是需要手工操作和显微镜观察，影响因素较多，尤其是经验不丰富者容易判断错误，而且因为操作时间长，临床上常采用批量检测，因而也常出现一周或二周才出一次报告的情况，不利于疾病的早期诊断。EILSA法，因可进行半定量检测，临床经常根据其浓度的变化判定病人的好转与否，从而制定下一步的治疗方案，因此在临床也得到了广泛的使用。由于ELISA方法也是批量检测，因此也存在标本量少时不能极时出结果，开包装的试剂盒放置时间长易影响检测结果从而影响临床诊治的缺点。针对上述临床存在之问题，在当今检验医学发展提出的POCT (Point Of CareTesting)，即即时检验新领域背景下，致力于开发一种新的检测试剂即荧光免疫层析快速检测试剂盒，使用小型荧光免疫分析仪进行检测，花费时间在15分钟左右，因此简单、便捷，标本即到即检，既能解决病人等待时间长之问题，又能解决临床医生执行自身免疫性疾病临床诊断的路径问题，可以在临床推广使用，以提高自身免疫疾病的诊治水平。
[0005]人自身抗原是制备ANA检测试剂的关键所在。天然人自身抗原提取纯化困难，难以获得高纯度的样品，导致其使用成本高，这些问题限制了 ANA检测试剂的开发。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种具有良好抗原活性的重组人自身抗原。
[0007]本发明所采取的技术方案是:
一种重组人自身抗原，其核心氨基酸序列为:
kaqtearkqmskeeklkikeeneklIkeygfcimdnhkerianfkieppglfrgrgnhpkmgmlkrrimpediiincskdakvpspppghkwkevrhdnkvtwlvswteniqgsikyimlnpssrikgekdwqkyetarrIkkcvdkirnqyredwkskemkvrqravalyfidklalragnekeegetadtvgccslrvehinlhpeldgqeyvvefdflgkdsiryynkvpvekrvfknfeksmmnlqtkidakkeqladarrdlksakadakvmkdaktkkvveskkkavqrleeqlmklevqatdreenkqialgtsklnyldpritvawckkwgvpiekiynktqrekfawaidmadedyef (SEQ ID NO:1)，核心氨基酸序列的至少一端连接有保护肽。
[0008]作为上述重组人自身抗原的进一步改进，保护肽的长度为4?20个氨基酸。
[0009]作为上述重组人自身抗原的进一步改进，特别的，N端保护肽的序列为:cdftqmsqyf (SEQ ID NO:2)。
[0010]作为上述重组人自身抗原的进一步改进，特别的，抗原的序列为: cdftqmsqyfkaqtearkqmskeeklkikeeneklIkeygfcimdnhkerianfkieppglfrgrgnhpkm
gmlkrrimpediiincskdakvpspppghkwkevrhdnkvtwlvswteniqgsikyimlnpssrikgekdwqkyetarrlkkcvdkirnqyredwkskemkvrqravalyfidklalragnekeegetadtvgccslrvehinIhpeldgqeyvvefdflgkdsiryynkvpvekrvfknfeksmmnlqtkidakkeqladarrdlksakadakvmkdaktkkvveskkkavqrleeqlmklevqatdreenkqialgtsklnyldpritvawckkwgvpiekiynktqrekfawaidmadedyef(SEQ ID NO:3)o
[0011 ] 一种核酸序列，该核酸序列编码上述的重组人自身抗原。
[0012]为提高表达效率，核酸序列为进行了偏嗜性改造的核酸序列，进行了偏嗜性改造的核酉爱序列为:ggatcctgtgactttacccaaatgtcgcaatacttcaaagcgcaaaccgaagcccgcaaacagatgagcaaagaagaaaaactgaaaatcaaagaagaaaacgaaaaactgctgaaagaatacggcttttgcatcatggataaccataaagaacgtatcgccaacttcaaaatcgaaccgccgggtctgttccgtggtcgtggtaatcacccgaaaatgggtatgctgaaacgtcgcattatgccggaagatatcatcatcaactgtagtaaagatgcaaaagtcccgagcccgccgccgggtcataaatggaaagaagtgcgtcacgataacaaagtgacctggctggtttcatggacggaaaatatccagggctcgatcaaatacattatgctgaacccgagctctcgcattaaaggtgaaaaagactggcagaaatatgaaaccgctcgtcgcctgaaaaaatgcgtggataaaatccgtaatcagtaccgcgaagactggaaaagcaaagaaatgaaagtccgtcaacgcgcggtggccctgtatttcattgataaactggctctgcgtgcgggcaatgaaaaagaagaaggtgaaaccgccgacacggttggctgctgttctctgcgcgtcgaacatatcaacctgcacccggaactggatggccaggaatacgtggttgaatttgatttcctgggtaaagacagtatccgttactacaacaaagttccggtcgaaaaacgcgtgttcaaaaacttcgaaaaatccatgatgaatctgcagaccaaaattgatgcgaaaaaagaacaactggcagatgetcgtcgcgacctgaaaagcgcgaaagccgatgcaaaagttatgaaagacgctaaaaccaaaaaagtcgtggaaagcaagaaaaaagccgttcagcgtctggaagaacaactgatgaaactggaagtccaggccacggatcgcgaagaaaataaacaaatcgcactgggcaccagcaaactgaactatctggacccgcgcattacggtggcgtggtgtaaaaaatggggtgttccgatcgaaaaaatttacaacaaaacgcagcgtgaaaaatttgcctgggctattgatatggcggatgaagattacgaattctaactcgag (SEQ ID NO:4)(黑色加粗部分为引入的酶切位点)。
[0013]本发明的有益效果是:
本发明的重组人自身抗原，肽链长度短，易于表达和纯化。
[0014]本发明的重组人自身抗原，制备方法简单，能够一次性获得较大量且纯度较高的抗原，使用成本低，经济效益好。
[0015]本发明的重组人自身抗原，反应活性很强，有助于ANA检测试剂的开发。
【附图说明】
[0016]图1是重组人自身抗原不同IPTG浓度诱导表达结果； 图2是重组人自身抗原不同诱导时机表达结果；
图3是重组人自身抗原纯化产物电泳结果；
图4是重组人自身抗原荧光免疫检测结果。
【具体实施方式】
[0017]保护肽的作用在于保护所需要的抗原肽不被酶解，便于后续的分离纯化等操作，保护肽的长度一般为4?20个氨基酸，优选为4?15个氨基酸。
[0018]下面结合实验，进一步说明本发明的技术方案。
[0019]抗原表位的选择:
发明人根据现有公开的序列 Scl-7O (DNA topoisomerase I [Homo sapiens] NCBIReference Sequence: NP_003277.1)，通过自有方法筛选得到抗原表位，并将表位肽集中区域的氨基酸序列截取出来拼接在一起，得到的核心序列为-KAQTEARKQMSKEEKLKIKEENEKLLKEYGFCIMDNHKERIANFKIEPPGLFRGRGNHPKMGMLKRRIMPEDIIINCSKDAKVPSPPPGHKWKEVRHDNKVTWLVSWTENIQGSIKYIMLNPSSRIKGEKDWQKYETARRLKKCVDKIRNQYREDffKSKEMKVRQRAVALYFIDKLALRAGNEKEEGETADTVGCCSLRVEHINLHPELDGQEYVVEFDFLGKDSIRYYNKVPVEKRVFKNFEKSMMNLQTKIDAKKEQLADARRDLKSAKADAKVMKDAKTKKVVESKKKAVQRLEEQLMKLEVQATDREENKQIALGTSKLNYLDPRITVAWCKKffGVPIEKIYNKTQREKFAffAIDMADEDYEF (SEQ ID NO:1)，核心氨基酸序列的至少一端连接有保护肽。为了更好地表达核心氨基酸序列，在其两端连接辅助