一种野生巴楚蘑菇多糖的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食品领域，设计一种野生巴楚蘑菇多糖的提取方法。
【背景技术】
[0002]巴楚蘑菇是主要分布于新疆塔里木盆地北缘的一种珍稀美味子囊菌，因产地主要在巴楚县而得名，是当地著名的土特产。在系统分类学上，巴楚蘑菇属于子囊菌纲(Ascomycetes)盘菌目(Pezizales)马鞍菌科(Helvella)。暂定名，白柄马鞍菌(Helvellaalbella)o该菌子实体香气浓郁、味道鲜美、质地细腻、其营养价值高于常见的平菇、香菇及黑木耳等担子菌，与粗柄羊肚菌相当。据测定，巴楚蘑菇蛋白质含量，氨基酸含量及氨基酸组成中必需氨基酸所占比率均高于平菇、香菇及黑木耳，与粗柄羊肚菌相似。巴楚蘑菇中粗脂肪含量及不饱和脂肪酸在脂肪中所占比率均高于平菇、香菇、黑木耳、双孢蘑菇及粗柄羊肚菌。巴楚蘑菇不但具有较高的食用价值，长期食用，还有提高人体免疫力，促进大脑发育、防止脑动脉硬化、促进副肾皮质激素分泌，增强人体应激能力、溶血栓、降低胆固醇等多种保健作用。由于南疆地区昼夜温差大促进了巴楚蘑菇多糖的积累，据测定，其多糖含量高于一般食用菌，且产地不同，多糖含量有较大不同差异。当地干旱的自然条件不利于其他野生食用菌生长，但巴楚蘑菇在长期的野外生长过程中已适应了当地的土壤、气候条件，每年有较大的生长量。
[0003]目前该菌的人工驯化引种还未成功，致使其市场价格较高，每公斤干品达100~180元。因此，巴楚蘑菇人工引种及其产品的开发具有巨大的市场前景和经济效益。
【发明内容】
[0004]本发明提供了一种野生巴楚蘑菇多糖的提取工艺，同时本发明研究了提取工艺过程中提取温度、提取时间、料液比、PH值、乙醇浓度对多糖提取率的影响。
[0005]本发明采用的技术方案是:
一种野生巴楚蘑菇多糖的提取方法，包括以下步骤:粉碎，索氏抽提及热水浸提，醇析制粗品，除杂二次醇析，离心干燥，检测，其特征在于:所述步骤包括:
1.粉碎:将新鲜野生巴楚蘑菇经自然风干，取干燥的巴楚蘑菇，用粉碎机粉碎，过60目筛，制得巴楚蘑菇干燥粉末；
2.索氏抽提及热水浸提:将巴楚蘑菇干燥粉末用乙醚抽提8h，然后将抽提后的样品渣连同滤纸一起烘干，加料水比为1:10至1:30之间的水及果胶酶制剂，调节PH值在5-9，在水温60-100°C下进行第一次热水浸提30-150min，滤出；然后在滤出后的滤渣中，第二次加适量热水浸提并滤出；再第三次加适量水浸提并滤出，合并三次滤液；将滤液用旋转蒸发仪进行减压浓缩至原体积的1/4，制得浓缩液；
3.醇析制粗品:将浓缩液置于小锥形瓶中，加入浓度为65-95%的乙醇进行醇析24小时，使提取出的巴楚蘑菇多糖完全沉淀；将混合物以3500r/min的转速离心得巴楚蘑菇多糖的粗品； 4.除杂二次醇析:用糖化酶去除粗多糖样品中的淀粉，并用碘液检测淀粉是否除净；用Sevag法去除蛋白质；使用透析袋去除粗多糖样品中的小分子物质；去除粗多糖样品中的其他物质后，再进行醇析24小时；
5.离心干燥:将二次醇析后的粗多糖样品在3500r/min的转速离心并于40°C下真空干燥并称重，即得高纯度的巴楚蘑菇多糖样品；
6.检测:得到的巴楚蘑菇多糖提取物用硫酸蒽酮法检测多糖含量。
[0006]所述步骤4中，具体操作步骤为:将多糖粗品置于小烧杯中并加蒸馏水使其溶解，在85-95°C下水浴30min将多糖糊化，降温至55-65°C，用糖化酶处理lOmin，用碘液检测至碘液不变色；
在检测后的溶液中加入氯仿:正丁醇为5:1的Sevag试剂，然后充分混合、震荡、离心，去除粗多糖样品中的蛋白质，制得处理液；
再把透析袋放入大烧杯中煮沸1min待其完全分离后捞出待用，将处理液装入已用线绑好一端的透析袋，然后在离液面2_3cm处绑好另一端并进行流动透析；透析24小时，直至透析袋中的溶液从淡黄色变为无色；
在透析后的多糖溶液中加入65%-100%的乙醇放置24小时沉淀。
[0007]所述步骤5中，将二次醇析后的粗多糖样品沉淀后的混合物离心，混合物置于小烧杯中，在40°C下真空干燥，完全干燥后再次称重，前后的质量差即为提取的高纯度的巴楚蘑菇多糖样品的质量。
[0008]本发明的提取方法，操作简单，装置方便，增加了提取效率，原材料易提取，并更加明朗的研究量变数据值产生的影响。本发明研究了提取工艺过程中提取温度、提取时间、料液比、PH值、乙醇浓度对多糖提取率的影响，便于记录科学实验数据。本发明实现了更加精确提取巴楚蘑菇多糖，并且增加了巴楚蘑菇多糖的提取纯度。
【具体实施方式】
[0009]以下通过【具体实施方式】再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。
[0010]以下结合具体实施例对本发明进行详细说明。
[0011]实施例1
1.粉碎:取干燥的巴楚蘑菇(由新鲜野生巴楚蘑菇经自然风干得到)，用粉碎机粉碎，过60目筛，得巴楚蘑菇干燥粉末；
2.索氏抽提及热水浸提:将巴楚蘑菇干燥粉末20g在索氏提取器中用乙醚抽提8h，样品渣连同滤纸一起烘干，加料水比为1:10的水及果胶酶制剂10mg，调节pH值为5.0，在60°C下热水浸提30min;第二次加水浸提并滤出；第三次加水浸提并滤出，合并三次滤液。将滤液用旋转蒸发仪进行减压浓缩至原体积的1/4左右。
[0012]醇析制粗品:浓缩液转入小锥形瓶中，加入浓度为65%的乙醇进行醇析24小时，使提取出的巴楚蘑菇多糖完全沉淀。将混合物以3500r/min的转速离心得巴楚蘑菇多糖的粗品O
[0013]除杂二次醇析:多糖粗品转入小烧杯中并加蒸馏水20mL使其溶解，在90°C下水浴30min将多糖糊化，降温至60°C，用糖化酶(酶活力:10万U/g) 0.005g处理lOmin，用碘液检测至碘液不变色。
[0014]在溶液中加入氯仿:正丁醇=5:1的Sevag试剂，混合、震荡、离心，去除粗多糖样品中的蛋白质。
[0015]把透析袋放入大烧杯中煮沸1min待其完全分离后捞出待用，将处理液装入已用线绑好一端的透析袋，然后在离液面2~3cm处绑好另一端并进行流动透析。透析24小时，直至透析袋中的溶液从淡黄色变为无色。
[0016]在透析后的多糖溶液中加入65%的乙醇放置24小时沉淀。
[0017]离心干燥:将沉淀后的混合物离心，沉淀转入小烧杯中(记录烧杯的重量)，在40°C下真空干燥，完全干燥后再次称重，前后的质量差即为提取的高纯度的巴楚蘑菇多糖样品的质量。
[0018]检测:得到的巴楚蘑菇多糖提取物用硫酸蒽酮法检测多糖含量。
[0019]实施例2
1.粉碎:同实施例1.2.索氏抽提及热水浸提:将巴楚蘑菇干燥粉末20g