肽对HER2阳性肿瘤细胞是选择性特异性 结合的，可以作为特异靶向J1ER2的多肽使用。
[0091] 实验例5表面等离子共振（SPR)方法检测SEQIDNO. 1、SEQIDNO. 2、SEQID NO. 3、SEQIDNO. 4分别对人HER2蛋白的亲和力
[0092] -、实验方法
[0093]将lmg/mL的SEQIDNO. 1、SEQIDNO. 2、SEQIDNO. 3、SEQIDNO. 4 肽及 0?OlmM PBS点到芯片上，在4°C湿润条件下孵育过夜，然后用0.ImMPBS清洗十分钟，0.OlmMPBS 清洗十分钟，最后用去离子水清洗十分钟，并重复一次，浸入含5 %牛奶的0.OlmMPBS中， 4°C条件下孵育过夜，然后用0.ImMPBS清洗十分钟，0.OlmMPBS清洗十分钟，最后用去离子 水清洗十分钟，并重复一次，用氮气吹干，上机。流动相依次通过1. 25yg/mL、2. 5yg/mL、 5yg/mL、10yg/mL和20yg/mL的人HER2蛋白，记录分析SPR信号。
[0094] 二、实验结果
[0095] 由图 5 可以看出，SEQIDNO. 1、SEQIDNO. 2、SEQIDNO. 3、SEQIDNO. 4肽的SPR 信号随着人J1ER2蛋白浓度的增加逐渐增强，根据SPR结果计算得出SEQIDNO. 1、SEQID NO. 2、SEQIDNO. 3和SEQIDNO. 4多肽对HER2蛋白的解离常数Kd值分别为：1. 86X10 8M/ L、8. 12X10SM/L、9. 06X10SM/L、2. 67X10 7M/L，说明本发明的多肽对HER2有强结合作用， 可以作为靶向HER2的多肽使用。
[0096] 实验例1-5的结果表明，在细胞水平上，流式细胞学和免疫荧光技术两种实验测 试均显示SEQIDNO. 1、SEQIDNO. 2、SEQIDNO. 3和SEQIDNO. 4 多肽是特异与HER2 阳性 的乳腺癌细胞结合，且结合于有HER2蛋白表达的细胞膜表面，而与HER2阴性的胚肾正常细 胞没有明显结合；在分子水平上，表面等离子共振（SPR)实验也同样证实了SEQIDNO. 1、 SEQIDNO. 2、SEQIDNO. 3、SEQIDNO. 4多肽均与HER2蛋白有强的结合作用，且随着HER2 蛋白浓度的提高，结合信号越强。
[0097] 从实验例1-5可以得出，本发明的多肽具有靶向HER2阳性肿瘤细胞的特性，因而 在实际应用中，可以将本发明的肽作为靶向多肽，与能杀伤癌细胞的制剂相缀合或混合，用 于肿瘤的靶向治疗，或可与显影剂相缀合或混合，用于靶向肿瘤的分子成像与诊断。
[0098] 申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局 限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的 技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的 添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
【主权项】
1. 一种特异靶向ffiR2蛋白的肽，其特征在于，所述多肽的通式为： X1X2X3X4X 5LX6X7X8NPX9X 10X11X12X13 其中，L为亮氨酸，N为天冬酰胺，P为脯氨酸，X1 13为可变的氨基酸残基； 优选地，X1是带电荷氨基酸残基，优选为赖氨酸或天冬氨酸；X2是极性氨基酸残基，优 选为赖氨酸、苏氨酸或酪氨酸；13是芳香族或脂肪族氨基酸残基，优选为苯丙氨酸或异亮氨 酸；X4是芳香性或杂环氨基酸残基，优选为酪氨酸或脯氨酸；X 5是芳香性或杂环氨基酸残 基，优选为酪氨酸或脯氨酸；X6是脂肪族氨基酸残基，优选为甘氨酸或丙氨酸；X 7是脂肪族 或芳香族氨基酸残基，优选为亮氨酸、酪氨酸或色氨酸是芳香族氨基酸残基，优选为酪 氨酸或色氨酸；X 9是极性氨基酸残基，优选为苏氨酸或天冬酰胺A1。是极性氨基酸残基，优 选为苏氨酸或谷氨酸；X 11是芳香族氨基酸残基，优选为酪氨酸或色氨酸；X12是芳香性或极 性氨基酸残基，优选为苯丙氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；X 13芳香性或极性氨基酸残基，优选为 酪氨酸、赖氨酸或谷氨酰胺。2. 根据权利要求1所述的肽，其特征在于，所述肽的氨基酸序列选自SEQID NO. I-SEQ ID NO. 59之一所示的氨基酸序列。3. -种DNA片段，其特征在于，其包含编码权利要求1-2任一项所述肽的核苷酸序列。4. 一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有至少一个拷贝的如权利要求3所述 的DNA片段。5. -种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求4所述的表达载体。6. 根据权利要求1-2任一项所述的肽形成的二价体或多价体，其特征在于，所述的二 价体或多价体具有靶向J1ER2阳性肿瘤细胞的特性并对对肿瘤细胞具有杀伤力； 优选地，所述的二价体或多价体是通过连接分子和/或聚合物共价连接形成的； 优选地，所述的二价体或多价体是通过与连接分子和/或聚合物混合，非共价连接形 成的； 优选地，所述多聚体为聚乙二醇（PEG)、聚乙烯醇（PVA)、环糊精、聚酰胺-胺型树枝状 高分子（PAMM)、聚乳酸（PLA)或聚乳酸-乙醇胺（PLGA)中的任意一种或至少两种的混合。7. -种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1-2中任一项所述的 妝和能杀伤癌细胞的制剂； 优选地，所述药物组合物包括权利要求6所述的二价体或多价体和能杀伤癌细胞的制 剂； 优选地，所述肽、二价体或多价体作为靶向多肽，与能杀伤癌细胞的制剂相缀合或混 合； 优选地，所述的制剂为能杀伤癌细胞的化学药物、生物药物、纳米药物、放射性药物、光 热治疗或光动力治疗药物或包裹这些药物的载体中的任意一种； 进一步优选地，所述的制剂为烷化剂、抗代谢药物、抗肿瘤天然药物、抗肿瘤抗生素、激 素、金属络合物或肿瘤放射靶向标记物中的任意一种； 进一步优选地，所述载体为纳米材料，脂质体或油性化合物中的任意一种，或由多种油 性化合物所组成的混合物。8. -种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1-2任一项所述的肽 和显像制剂； 优选地，所述药物组合物包括权利要求6所述的二价体或多价体和显像制剂； 优选地，所述肽、二价体或多价体与显像制剂相缀合或混合； 优选地，所述的显像制剂为放射性核素、放射性核素标记物或分子影像制剂中的任意 一种。9. 权利要求1-2中任一项或权利要求6所述的肽、二价体或多价体在制备用于治疗、预 防或诊断癌症的药物或显像制剂中的用途。10. 根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述癌症为HER2过表达的癌症； 优选地，所述癌症为乳腺癌、肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、直肠癌、食管癌、白血病、膀胱癌 或子宫颈癌或鼻咽癌中的任意一种。
【专利摘要】本发明涉及一种特异靶向HER2(人表皮生长因子受体2)蛋白的多肽及其应用，所述多肽如以下通式所示：X1X2X3X4X5LX6X7X8NPX9X10X11X12X13；本发明还涉及一种编码多肽的核苷酸序列，以及表达该多肽的表达载体及宿主细胞；本发明还涉及了该多肽、其形成的二价体或多价体及其作为靶向多肽与能杀伤癌细胞的制剂和显像制剂形成的药物组合物及其用途，本发明所述多肽能对HER2阳性肿瘤细胞起靶向作用，选择性强，且本发明涉及的肽可以采用化学合成的方法制备得到，其纯度高、分子量小、特异性强、无免疫原性及安全可靠。
【IPC分类】C12N15/11, C07K7/08, A61K51/08, C12N15/63, A61P35/00, A61K47/42, A61K49/00
【公开号】CN105085631
【申请号】CN201510583724
【发明人】耿令令, 方巧君
【申请人】国家纳米科学中心
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年9月14日