木棉花粉活力的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及杂交制种技术领域，特别是涉及木棉花粉活力的检测方法。
【背景技术】
[0002] 木棉（BombaxceibaL.)，又名红棉、英雄树、攀枝花，木棉科木棉属落叶大乔木，高 可达25m，树皮灰白色，树干通常有圆锥状的粗刺；分枝平展。掌状复叶，叶柄长10~20cm， 小叶5~7片，长圆形至长圆状披针形，长10~16cm，宽3. 5~5. 5cm，顶端渐尖，基部阔 或渐狭，全缘，两面均无毛，小叶柄长1. 5~4cm;托叶小。花单生枝顶叶腋，通常红色，有时 橙红色、橙黄色和黄色，直径约10~13cm;花萼杯状，长2~3cm，宽2~3cm;花瓣肉质，倒 卵状长圆形，长8~10cm，宽3~4cm;雄蕊管短，基部粗，向上渐细，内轮部分花丝上部分2 叉，外轮雄蕊多数，集成5束，每束花丝10枚以上，较长；子房5室，花柱长于雄蕊，棒状，突 出，柱头5裂。蒴果长圆形，长10~15cm，宽4. 5~8cm，密被灰白色长柔毛；种子多数，倒 卵形，光滑。花期3~4月，果夏季成熟。
[0003] 木棉产于广东、广西、海南、香港、四川、云南、贵州、中国台湾、福建等省区，南亚、 东南亚和澳大利亚北部。喜光，深根性，耐干旱，喜暖热气候；生于海拔1400~1700m以下 的干热河谷及稀树草原，也可生长在沟谷季雨林内。我国南方地区道路、单位绿化和风景林 的骨干树种之一，常作行道树、庭荫树和风景树栽培。
[0004] 木棉树高大雄伟，高耸挺拔，树冠整齐壮丽。春季3~4月，先花后叶，花期长达2 个月，盛花时期，满树红色、有时橙红色、橙黄色和黄色等花朵开放，蔚为壮观，加上鸟类或 蜜蜂等采蜜，更增添了情趣；单花从始花至凋谢4~5天，花瓣5片，倒卵状长圆形。夏季绿 荫如盖，秋冬落叶前叶色变黄。木棉历来被人们视为英雄的象征，是广东广州市和四川攀枝 花市等市的市花，我国南方地区优良的行道树、庭荫树和风景树。
[0005] 木棉是我国南方地区群众喜爱的道路、单位绿化和景观林树种之一，适应范围 广，是具有广泛开发应用前景的观赏花卉。但是木棉自然结实既受天气和土壤等生态学特 性，又受树龄和长势等生物学特性的影响，自然结实率通常不高。木棉花期长达60天，优良 的木棉单株普遍存在花期不遇，靠自然授粉较难以培育出优良新品种。开展人工杂交控制 授粉，对基因资源进行重组，是培育木棉优良新品种的主要途径，因此通过花粉活力测定， 了解各批次木棉花粉质量，对开展杂交控制授粉配对组合，预测杂交控制授粉的工作量和 成功率，节约花粉保存和杂交控制授粉的成本，培育木棉优良新品种具有重要现实意义，可 取得良好的社会效益、生态效益和经济效益。
【发明内容】
[0006] 基于此，本发明的目的是提供一种木棉花粉活力的检测方法。
[0007] 实现上述发明目的具体技术方案如下：
[0008] -种木棉花粉活力的检测方法，包括以下步骤：
[0009] (1)花粉收集：采集花蕾，将花粉囊中的花粉于离心管中脱粒，干燥；
[0010] (2)培养基的配制：用蒸馏水配制琼脂培养基，其中含硼酸25~50mg/L、蔗糖 90~110g/L、琼脂7~9g/L，将培养基装入培养皿待用；
[0011] (3)花粉萌发培养：将步骤（1)所得花粉溶于培养液中，形成花粉液，再将花粉 液喷到步骤（2)制备的培养基的表面，均匀铺开，恒温、恒光照培养；所述培养液为25~ 50mg/L的硼酸与90~110g/mL的鹿糖溶液；
[0012] (4)花粉活力检测：将培养皿置于倒置显微镜下观察，花粉管长度大于花粉粒直 径的花粉视为萌发的花粉，每个培养皿随机选取3-6个不重叠的视野，统计每个培养皿的 花粉的数量、萌发的花粉的数量，计算花粉的活力。
[0013] 在其中一个实施例中，所述花粉收集包括以下步骤：
[0014] (1)花蕾采集：3~4月，剪取蕾体饱满、无缺损、大蕾期的木棉花蕾，用封口袋装 好，备用；
[0015] (2)花粉脱粒：将花瓣先端撕开，从花粉囊下方约0. 18~0. 22cm处剪断，将花粉 囊置于培养皿中，放入硅胶干燥器中干燥，使花粉囊裂开，将裂开的花粉囊装入离心管，于 漩涡混合器中振荡，使花粉粒脱离花粉囊而粘在离心管内壁，停止转动，倒掉空花粉囊；
[0016] (3)花粉干燥：将粘有花粉的离心管放回硅胶干燥器里干燥。
[0017] 在其中一些实施例中，所述琼脂培养基含硼酸50mg/L、蔗糖100g/L、琼脂8g/L。
[0018] 在其中一些实施例中，所述琼脂培养基含硼酸25mg/L、蔗糖100g/L、琼脂8g/L。
[0019] 在其中一个实施例中，花粉萌发培养步骤中所述培养的时间为2~3h。
[0020] 在其中一个实施例中，花粉萌发培养步骤中所述培养的温度为23~27 °C。
[0021] 在其中一个实施例中，花粉脱粒步骤中所述干燥的时间为9~10h。
[0022] 在其中一个实施例中，花粉脱粒步骤中所述漩涡混合器的转速为2700~2900转 /分钟。
[0023] 在其中一个实施例中，花粉脱粒步骤中所述漩涡混合器振荡的时间为2~3分钟。
[0024] 在其中一个实施例中，花粉干燥步骤中所述干燥为干燥至花粉的相对含水量为 20 ~25%。
[0025] 在做花粉活力检测时，也可以用染色法，有活力的木棉花粉在0? 5%和1%的TTC 试剂中均可全部或局部被染成红色或暗红色，没有生命力的花粉呈褐色。但是，在统计花粉 活力时，染成暗红色或局部染色的花粉受人为因素影响较大，没有固定培养基法的结果直 观，估算控制授粉工作量和成功率存在一定的误差。因此，本发明所述的木棉花粉活力的检 测方法与TTC染色法相比结果直观，数据可靠，本发明的方法可在15h内检测出新鲜木棉花 粉的活力，对开展杂交控制授粉组合，预测杂交控制授粉的工作量和成功率，节约花粉保存 和杂交控制授粉的成本，培育木棉优良新品种具有重要现实意义。
【附图说明】
[0026] 图1为木棉花粉活力检测显微镜拍摄图。
【具体实施方式】
[0027] 以下结合具体实施例对本发明做进一步的描述。
[0028] 本实施例中按以下方法测定木棉花粉的活力：
[0029] 1花粉收集
[0030] 1. 1花蕾采集
[0031] 3~4月，当天气晴朗，在优良的木棉单株上剪取蕾体饱满、无缺损、大蕾期的花 蕾，用封口袋装好，贴上采集号和采集时间带回实验室备用。
[0032] 1. 2花粉脱粒
[0033] 用手将花瓣先端撕开，用干净的小剪从花粉囊下方约0. 2cm处剪断，花粉囊置于 垫有称量纸的培养皿中，放入硅胶干燥器中干燥9~10h，当花粉囊大部分裂开，将花粉囊 装进2ml的离心管，盖好离心管的盖子，编号，放在转速为2800转/min的漩涡混合器（海 门其贝尔V0RTEX-5漩涡混合器）中振荡2~3min，待多数花粉粘在离心管内壁时，停止转 动，打开离心管的盖子，倒掉空花粉囊。
[0034] 1. 3花粉干燥
[0035] 将粘有花粉的离心管放回硅胶干燥器里干燥，并在干燥器内放1个温湿度计，当 干燥器中温湿度计的相对含水量约20%时，打开干燥器的盖子，重新盖上离心管的盖子，留 3个离心管进行活力测定，其余的用信封装好放入密封袋中，信封上标明采集号、采集时间、 采集人员、相对湿度等内容，置于-20度冰箱内保存。
[0036] 2花粉活力检测
[0037] 2. 1培养基的配制
[0038] 以配制50mg/L硼酸+100g/L蔗糖+8g/L琼脂的培养基为例，培养基的配制包括以 下步骤：
[0039] (1)用蒸馏水配制好50mg/L的硼酸溶液，待用；
[0040] ⑵将l〇g鹿糖放入l〇〇ml烧杯内，加入步骤⑴配制的20~30ml硼酸溶液，待