一种新的木脂素类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从厚朴的干燥树皮中分离得到的一种具有血 管保护作用的木脂素类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 厚朴，来源于木兰科木兰属植物厚朴MagnoliaofficinalisRehdetWils?和凹 叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etWils.var.bilobaRehd.etWils?的干燥干皮、枝皮 和根皮，主产于四川、湖北、浙江、福建和安徽等地。始载于《神农本草经》，列为中品。厚朴 为常用中药，具有芳香化湿、行气消积、燥湿除满、降逆平喘的功效，主治食积气滞、腹胀便 秘、湿阻中焦、院痞吐湾、痰壅气逆、胸满喘咳等病症。许多常用处方和中成药制剂中都有厚 朴入药。现代研宄表明，厚朴中主要含有木脂素、生物碱和挥发油等成分，对消化系统具有 很好的活性，并有抗菌、中枢抑制、肌肉松驰和抗肿瘤等作用。
[0003] 历代主要本草中所载正品厚朴其药用部位均为树皮，《名医别录》和《本草纲目》中 有厚朴果实（厚实）的记载，《饮片新参》中有其花蕾（厚朴花）的记载，《中国药典》2010 版一部中收载有厚朴和厚朴花标准。但古今药学专著中均未见厚朴叶的药用记载，仅在民 间有一定应用。
[0004] 从心血管生理学、药理学、细胞和分子生物学等多领域都证明，血管对血压发挥着 重要的自身调节作用。血管张力是决定血压的重要因素，高血压主要是因为血管总外周阻 力增加所致。血管张力受众多内源性血管活性物质的调节，厚朴叶不同提取部位表现出对 血管张力的调节作用，提示厚朴叶可以作为血管调节药物进行进一步的研宄开发，尤其值 得注意的是其大极性部位的舒张血管的作用，表明厚朴叶具有潜在的降血压活性，因此，可 在进一步研宄厚朴叶提取物是否具有体内降血压作用的基础上，明确厚朴叶能否作为治疗 高血压的血管扩张药进行发利用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从厚朴的干燥树皮中分离得到的一种具有血管保护作 用的木脂素类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将厚朴的干燥树皮粉 碎，用80~90 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用75%乙醇洗 脱10个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b)中 75 %乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、50:1、30:1、15:1和1:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用 体积比为25:1、15:1和8:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分 2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱， 收集10~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0010] 所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] 所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为85 %。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的 载体。
[0013] 所述的化合物（I)在制备血管保护的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备血管保护的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0018] 说明书附图
[0019] 图1为化合物（I)结构式；
[0020] 图2为化合物（I)理论E⑶值与实验E⑶值比较。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0022] 实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证
[0023] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0024] 制备方法：（a)将厚朴的干燥树皮（8kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取（25LX3 次），合并提取液，浓缩至无醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水 饱和的正丁醇（6LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（355g)和正丁醇 萃取物；(b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用15 %乙醇洗脱6个柱 体积，再用75 %乙醇洗脱10个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物 浸膏（136g) ;(c)步骤（b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1(8 个柱体积）、50:1 (8个柱体积）、30:1 (6个柱体积）、15:1 (8个柱体积）和1:1 (5个柱体积） 的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4 (31g)用正相硅胶进一步 分离，依次用体积比为25:1 (8个柱体积）、15:1 (10个柱体积）和8:1 (6个柱体积）的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (llg)用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集10-12个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I) (28mg)。
[0025] 结构确证：HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z431. 1716，结合核磁特征可得分子式 为（：21氏808,不饱和度为8。核磁共振氢谱数据SH(ppm，DMS0-d6,500MHz) :H-2(6.10,d，J =2. 0)，H-5 (6. 50,d，J= 8. 0)，H-6 (6. 25,dd，J= 8. 0, 2. 0)，H-7 (2. 33,dd，J= 13. 5， 4. 5)，H-7 (1. 94,dd，J= 13. 5,4. 5)，H-8 (1. 85,dt，J= 8. 0, 3. 5)，H-9 (4. 57,d，J= 1. 0)，H-2'（6. 62,d，J= 1. 5)，H-5'（6. 62,d，J= 8. 0)，H-6'（6. 57,d，J= 8. 0,1. 5)， H-7'（4. 34,d，J= 10. 0)，H-8'（2. 15,m)，H-9'（4. 09,t，J= 8. 5)，H-9'（3. 89,dd，J =8. 5,6. 5)，3-0CH3 (3. 74,s)，3' -0CH3 (3. 73,s)，9-0CH3 (3. 09,s);核磁共振碳谱数据 Sc (ppm,DMS0-d6,125Hz) : 130. 1 (C，1-C)，110. 5 (CH，2-C)，146. 8 (C，3-C)，143. 5 (C，4-C)， 113. 7 (CH，5-C)，120. 1 (CH，6-C)，37. 8 (CH2, 7-C)，49. 2 (CH，8-C)，108. 5 (CH，9-C)，134. 7 (C， 1' -C)，109. 1 (CH，2' -C)，146. 7(C，3' -C)，145. 2(C，4' -C)，113. 7(CH，5' -C)，118. 5(CH， 6' -C)，75. 8(CH，7' -C)，49. 9(CH，8' -C)，69. 4(CH2,9' -C)，53. 8(CH3,3-0CH3)，53. 7(CH3， 3'-0CH3)，52.4(CH3,9-0CH3);碳原子标记参见图1。4NMR谱显示该化合物存在两个 1，3, 4-三取代芳香环[SH6. 10 (1H，d，J= 2. 0Hz，H-2)，6. 50 (1H，d，J= 8. 0Hz，H-5)和 6. 25(1H，dd，J= 8. 0,2. 0Hz，H-6)以及 6. 62(1H，d，J= 1. 5Hz，H-2'），6. 62(1H，d，J= 8.0Hz，H-5'），和 6.57(1H，dd，J= 8.0，1.5Hz，H-6'）]，两个含氧次甲基[SH4.57(1H， d，J= 1.0Hz，H-9)和 4.34(1H，d，J= 10.0Hz，H-7'）]，三个甲氧基[SH3.74(3H，s， 3-0CH3)，3.73(3H，s，3' -0CH3)，和 3.09(3H，s，9-0CH3)]，一个含氧亚甲基[SH4.09(1H，t， J= 8. 5Hz，H-9'a)和 3. 89(1H，dd，J= 8. 5,6. 5,H-9'b)〕，一个亚甲基[SH2. 33(1H，dd， J= 13. 5,4. 5,H-7a)和 1. 94(1H，dd，J= 13. 5,4. 5,H-7b)]，和两个次甲基[SHI. 85(1H， dt，J= 8. 0,3. 5，H-8)和 2. 15(lH，m，H-8'）]。13CNMR谱显示有 21 个碳信号，其中包括两 个芳环的12个芳香碳，两个含氧次甲基[SC108. 5 (C-9)和75. 8 (C-7'）]，一个含氧亚甲基 [SC69. 4 (C-9 '）]，三个甲氧基[SC53. 8 (3-0CH3)，53. 7 (3 ' -0CH3)和 52. 4 (9-0CH3)]，二个 次甲基[SC49.9(C-8'）和 49.2(C-8)]，以及一个亚甲基[SC37.8(C-7)]。H-8 和H-9 之间 较小的耦合常数（1.OHz)以及NOESY谱中H-7与H-9和H-7'以及H-8与H-8'和H-9'-0CH3 的相关性表明C-8和C-8'的绝对构分别为S和R。此外C-7'的构型为R。综合氢谱、碳谱、 HMBC谱和N0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立 体构型进一步通过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致（图2)。
[0026] 实施例2:化合物（I)药理作用试验
[0027] -、材料和仪器
[0028] 血管内皮细胞（ECV-304)由山东大学医学院免疫教研室馈赠。化合物（I)自制， 制备方法见实施例1，HPLC归一化纯度大于98%。RPMI-1640干粉培养基、胰蛋白酶购于美 国Gibeo公司。胎牛血清购于天津TBD公司。MTT、琼脂糖、AnnexinV-FITC购于美国Sigma 公司。LDH、MDA、SOD、GSH-Px测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。DMS0购于中国医药 (集团）上海化学试剂有限公司。苏木素购于福州迈新生物技术有限公司。Rhodaminel23 购于美国Solarbic公司。阳性药川考嗪购自上海源叶生物科技有限公司。
[0029] 倒置光学显微镜（日本OlymPus公司），二氧化碳培养箱（美国FormaScientific 公司），电子分析天平（ER-182A型）（日本A&D公司），超净工作台（ZHJH-1209型）（上海 智城分析仪器制造有限公司），流式细胞仪（FACSVantage型）（美国BeetonDiehnson公 司），恒温振荡器（江苏太仓市实验设备厂），1420Vietor3多标记分析仪（美国PerkinElmer Lifescience公司），721型可见紫外光栅分光光度计（上海精密科学有限公司），电热 恒温水浴箱（上海医疗仪器三厂生产），酶联免疫检测仪（MK3Multiskan)(上海Thermo Labsystem分析仪器公司）。
[0030] 二、试验方