一种从芸香科植物的籽或果实中提取吴茱萸内酯的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物中有效成分利用领域，主要是涉及从芸香科植物的籽或果实中大量制备吴茱萸内酯(柠檬苦素)的方法。
技术背景
[0002]吴茱萸内酯又被称为梓檬苦素(Limonoids)，主要存在于芸香科(Rutaceae)植物的籽或果实中。如在吴茱萸的果实、石虎的果实、疏毛吴茱萸的果实、柠檬的籽、桔子的籽、柑橘的籽、橙子的籽或柚子的籽等中都有较高含量的吴茱萸内酯(柠檬苦素)。吴茱萸内酯(柠檬苦素)具有较强的生理活性，例如:抗氧化、抗炎、抗真菌、镇痛、抗肿瘤、抗病毒等活性，所以吴茱萸内酯(柠檬苦素)是一类具有非常高的开发价值的活性成分。
[0003]本发明提出了一种新的高效分离纯化吴茱萸内酯(柠檬苦素)的方法，该方法所用原料来源广泛、易得，制备方法简便易行，非常易于吴茱萸内酯(柠檬苦素)的大规模工业化生产。
[0004]在文献或专利中已经多种制备吴茱萸内酯(柠檬苦素)的方法报道，如中国专利“申请号 200910115318.3、201110081655.2、200810046164.2、200810037312.4、201210153841.7^201110004630.2^200910104500.9^201010300601.6 和 200810204440.3”都有采用柱层析或大孔树脂分离的手段来制备吴茱萸内酯(柠檬苦素)；中国专利“申请号201210033504.4”采用多次超临界0)2提取和结晶的方法来制备吴茱萸内酯(柠檬苦素)；中国专利“申请号201410555943.0”采用反复洗涤、结晶和活性炭脱色的方法来制备吴茱萸内酯(柠檬苦素)；中国专利“申请号00106285.9”采用反复脱脂和结晶的方法来制备吴茱萸内酯(柠檬苦素)；中国专利“申请号201410259115.2”采用榨汁法及盐析的方法提取和制备吴茱萸内酯(柠檬苦素)。本专利以常规溶剂为提取溶剂，利用碱溶酸沉的原理来分离纯化吴茱萸内酯(柠檬苦素)，简单有效更易工业化。
【发明内容】
[0005]本发明主要是以芸香科植物的籽或果实为原料，提供一种吴茱萸内酯(柠檬苦素)的制备方法。它主要是先通过溶剂对原料进行提取，回收溶剂得到的浸膏；浸膏用石油醚进行脱脂；脱脂后的浸膏用稀酸溶液洗涤；洗涤后浸膏用碱溶液充分溶解，然后用酸调节pH至酸性，析出固体；取固体，干燥后用氯仿溶解，取氯仿溶液，回收氯仿得固体；所得固体用少量乙醇等溶剂洗涤；洗涤后的固体进行结晶和重结晶，就可得到高纯度的吴茱萸内酯(梓檬苦素)晶体。
[0006]芸香科植物的籽或果实中含有大量的吴茱萸内酯(柠檬苦素)可以作为提取原料，如柠檬籽、柑橘籽、桔子籽、橙子籽或柚子籽、吴茱萸果实、或石虎果实等；优选为桔子籽、柠檬籽。
[0007]本发明从芸香科植物的籽或果实中提取吴茱萸内酯的方法方法，具体步骤主要如下:
[0008]将芸香科植物的籽或果实作为原料；
[0009]取经干燥、粉碎的原料粉末，按液固比mL/g 1/1-50/1加入溶剂，提取1_5次，每次l-4h，合并提取液并回收溶剂得到浸膏；所述溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯的一种或几种混合物、或甲醇、乙醇、丙酮的50%?95%体积比浓度水溶液；
[0010]将上述浸膏按液固比mL/g 1/1-100/1用石油醚脱脂1_5次；然后再按液固比mL/g 1/1-100/1用浓度为1-10%的稀盐酸、硫酸、硝酸或磷酸溶液浸泡洗涤l_48h，反复进行1-6 次；
[0011]将上述经洗涤所得的固体按液固比mL/g 1/1-100/1加入到浓度为1_20%的氢氧化钠或氢氧化钾溶液中，充分溶解l_48h，过滤或离心得碱溶液；取碱溶液加盐酸、硫酸、硝酸或磷酸调节PH至1-7，析出固体，过滤或离心，所得固体干燥，得吴茱萸内酯粗产品；
[0012]将所得茱萸内酯粗产品按液固比mL/g 1/1-200/1用氯仿或二氯甲烷溶解，过滤或离心，取溶液，回收溶剂得到固体；所得固体按液固比mL/g 1/1-50/1用甲醇、乙醇、氯仿或丙酮洗涤1-6次，干燥；
[0013]将干燥所得固体，用二氯甲烷、氯仿或丙酮进行溶解并结晶，然后用二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙醇、异丙醇一种或几种的混合溶剂重结晶，即可到高纯度吴茱萸内酯晶体。
[0014]为达到更好的提取效果:
[0015]提取过程是在超声波或微波辅助下进行提取，或加热回流提取或常温浸取。
[0016]所用石油醚沸程为60-90°C。
[0017]本发明的有益效果:从原料中提取吴茱萸内酯(柠檬苦素)的提取率可达90%以上，且提取纯度可达99%，制作工艺简单易操作，且成本低，适用于工业化大规模生产。
[0018]具体实施方法:
[0019]实施例1:
[0020]①取干燥桔子籽的干燥粉末适量，按液固比mL/g 3/1加入乙醇，超声(400W，30°C )搅拌提取3次，每次2h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
[0021]②将上述浸膏按液固比mL/g 10/1用石油醚脱脂3次。然后按液固比mL/g 10/1用I %的盐酸溶液浸泡洗涤反应Ih，过滤，取用固体，重复3次。
[0022]③将上述固体按液固比mL/g 10/1浸泡入I %的氢氧化钠溶液，反应lh，过滤，取碱液加盐酸调节溶液PH至I，并搅拌，过滤，留用固体。
[0023]④将所述的固体按液固比mL/glO/1用氯仿溶解，过滤，氯仿液回收，固体按液固比mL/g 10/1用乙醇洗涤，重复洗涤5次。
[0024]⑤将上述洗涤后的固体干燥，用丙酮溶解结晶，然后用丙酮一乙醇(体积比1/1)重结晶，即可到吴茱萸内酯(柠檬苦素)晶体，纯度为99%。
[0025]实施例2:
[0026]①取干燥吴茱萸果实粉末适量，按液固比mL/g 4/1加入无水乙醇，搅拌，60°C回流提取5次，每次4h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
[0027]②将上述浸膏按液固比mL/g 1/1用石油醚脱脂5次。然后按液固比mL/g 100/1用2%的硫酸溶液浸泡洗涤反应lh，过滤，取用固体。
[0028]③将上述固体按液固比mL/g 20/1浸泡入I %的氢氧化钾溶液，反应lh，过滤，取碱液加盐酸调节溶液PH至5，并搅拌，过滤，留用固体。
[0029]④将所述的固体按液固比mL/g 10/1用二氯甲烷溶解，过滤，氯仿液回收，固体用5倍量乙醇洗涤，重复洗涤多次。
[0030]⑤将上述洗涤后的固体干燥，用丙酮溶解结晶，然后用异丙醇重结晶，即可到吴茱萸内酯(柠檬苦素)晶体，纯度为89%。
[0031]实施例3:
[0032]①取柠檬籽干燥粉末适量，按液固比mL/g 15/1加入75%甲醇水溶液，超声(300W，20°C )搅拌提取4次，每次lh，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
[0033]②将上述浸膏按液固比mL/g 100/1用石油醚脱脂I次。然后按液固比mL/g 30/1用10%的盐酸溶液浸泡洗涤反应10h，过滤，取用固体，重复3次。
[0034]③将上述固体按液固比mL/g 20/1浸泡入I %的氢氧化钠溶液，反应10h，过滤，取碱液加硫酸调节溶液PH至I，并搅拌，过滤，留用固体。
[0035]④将所述的固体按液固比mL/g 30/1用氯仿溶解，过滤，氯仿液回收，固体按液固比mL/g 10/1用甲醇洗涤，重复洗涤多次。
[0036]⑤将上述洗涤后的固体干燥，用丙酮溶解结晶，然后用乙醇重结晶，即可到吴茱萸内酯(柠檬苦素)晶体，纯度为98%。
[0037]实施例4:
[0038]①取柑橘籽的干燥粉末适量，按液固比mL/g 3/1加入，无水甲醇超声(300W，25°C )搅拌提取3次，每次2h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
[0039]②将上述浸膏按液固比mL/g 2/1用石油醚脱脂5次。然后按液固比mL/g 7/1用I %的磷酸溶液浸泡反应lh，过滤，这们重复6次。
[0040]③将上述固体按液固比mL/g 5/1浸泡入I %的氢氧化钾溶液，反应5h，过滤，取碱液加硝酸调节溶液PH至7，并搅拌，过滤，留用固体。
[0041]④将所述的固体按液固比mL/g 10/1用氯仿溶解，过滤，回收氯仿，得到固体按液固比mL/g 5/1用甲醇洗涤，重复洗涤2次。
[0042]⑤将上述洗涤后的固体干燥，用氯仿溶解结晶，然后用二氯甲烷溶剂重结晶，即可到较高纯度吴茱萸内酯(柠檬苦素)晶体，纯度为90%。
[0043]实施例5:
[0044]①取柚子籽的干燥粉末适量，按液固比mL/g 50/1加入乙醇水溶液(95% )，超声(400W，30°C )搅拌提取I次，提取lh，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
[0045]②将上述浸膏按液固比mL/g5/l用石油醚脱脂5次。然后按液固比mL/g 50/1用10%的盐酸溶液浸泡反应10h，过滤，这样重复5次。
[0046]③将上述固体按液固比mL/g 20/