早期盆腔脱垂诊治标志物及其应用

文档序号:8937866阅读:333来源:国知局
早期盆腔脱垂诊治标志物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物医药领域,具体设及早期盆腔脱垂诊治标志物及其应用,更具体 的设及ZCCHC12基因和/或KCNGl基因在早期盆腔脱垂诊治中的应用。
【背景技术】
[0002] 盆腔器官脱垂(pelvicorganprolapse,POP)是由于盆底支持结构的缺陷、损伤 或功能障碍造成的,是影响中老年女性生活质量的常见疾病,主要是由盆底支持结构缺陷 或者退化、损伤及功能障碍所导致。临床表现为子宫、阴道、膀脫、尿道、结直肠、小肠等器官 的脱垂,常伴发尿失禁、排尿排便障碍、性功能障碍等症状。流行病学研究显示高达50%的 成年妇女受该疾病困扰,无论是原发性POP还是复发性POP的发病率都在逐年升高,己成为 非常值得关注的公共卫生问题。POP严重影响了成年女性的生活与社会活动,有研究指出, POP患者出现抑郁症状的可能性是普通人群的5倍。然而,由于其发病机制尚不明确,目前 的治疗大多数只是对其症状进行治疗,而无法从病因上根治疾病。无论是手术治疗还是保 守治疗,都存在并发症W及复发等问题,因此,要及早诊断POP,选择合适的治疗方式并防止 复发,就需要从发病机制上对POP进行研究。虽然很多研究掲示了与POP发生的相关因素, 但其具体的发病机制仍不明确。目前认为POP的病理生理复杂且是多因素影响的,具有特 定遗传倾向的个体在单个或多个后天获得性因素的作用下,最终导致脱垂的发生。对遗传 因素的日趋关注也有助于从分子水平更深入的探讨POP的发病机理。
[0003] 发明人对9例盆腔脱垂病例样本及3例对照进行高通量测序,结合生物信息学方 法进行基因筛选,挑选出候选的ZCCHC12基因和KCNGl基因。进一步,本发明进行了分子 细胞生物学方法证实了候选基因与盆腔脱垂的关系:候选基因与盆腔脱垂具有很好的相关 性,结合临床分期发现,候选基因在盆腔脱垂早期中明显高表达,可用于制备早期盆腔脱垂 辅助诊疗制剂,具有重要的临床应用价值。

【发明内容】

[0004] 本发明的目的在于提供一种分子标志物在制备早期盆腔脱垂诊断制剂中的应用, 所述分子标志物为ZCCHC12基因和/或KCNGl基因和/或ZCCHC12基因的表达产物和/或 KCNGl基因的表达产物。
[0005] 为实现上述目的,本发明首先通过高通量测序结合生物信息学方法筛选到候选基 因ZCCHCl2基因和KCNGl基因,进而通过分子细胞生物学方法验证了ZCCHCl2基因和KCNGl 基因与盆腔脱垂的关系:ZCCHC12基因和KCNGl基因与早期盆腔脱垂具有很好的相关性,可 用于制备早期盆腔脱垂辅助诊断制剂和监测临床分期,具有重要的临床应用价值。
[0006] 进一步的,所述的分子标志物在早期盆腔脱垂组织中高表达。ZCCHC12基因在盆腔 脱垂组织中的表达水平高于对照组织6倍多,KCNGl在盆腔脱垂组织中的表达水平高于对 照组织近3倍。进一步分组分析发现,ZCCHC12和KCNGl在II度盆腔脱垂患者中表达量最 高,III度盆腔脱垂患者中表达量较低,IV度盆腔脱垂患者中表达量较HI度盆腔脱垂患者 高但仍低于II度盆腔脱垂患者,n度、III度、IV度盆腔脱垂患者中基因表达量差异均较 为显著,提示ZCCHC12和KCNGl可作为祀标用于早期盆腔脱垂诊治或临床分期监测。
[0007] 进一步,所述的盆腔脱垂的诊断制剂采用巧光定量PCR试剂盒、基因忍片检测盆 腔脱垂组织中ZCCHC12基因和/或KCNGl基因的表达,优选的,所述的巧光定量PCR试剂 盒中含有一对特异性扩增ZCCHC12基因和/或KCNGl基因的引物;所述的基因忍片中包 括与ZCCHC12基因和/或KCNGl基因的核酸序列杂交的探针。更优选的,所述特异性扩增 ZCCHC12基因的引物为SEQIDNO. 15和SEQIDNO. 16,所述特异性扩增KCNGl基因的引物 为沈QIDNO. 17 和沈QIDNO. 18。
[0008] 进一步,所述的盆腔脱垂的诊断制剂采用免疫方法检测盆腔脱垂组织中ZCCHC12 基因的表达产物和/或KCNGl基因的表达产物,优选的,所述免疫方法为化ISA检测和/胶 体金检测。
[0009] 进一步,所述检测ZCCHC12蛋白和/或KCNGl蛋白的化ISA法为使用ELISA检测 试剂盒。所述试剂盒中的抗体可采用市售的ZCCHC12和/或KCNGl单克隆抗体。进一步, 所述的试剂盒包括:包被ZCCHC12和/或KCNGl单克隆抗体的固相载体,酶标抗体,酶的底 物,蛋白标准品,阴性对照品,稀释液,洗涂液,酶反应终止液等。
[0010] 进一步,所述检测ZCCHC12和/或KCNGl蛋白的胶体金法为使用检测试剂盒,所述 的抗体可采用市售的ZCCHC12和/或KCNGl单克隆抗体。进一步,所述的胶体金检测试剂 盒采用胶体金免疫层析技术或胶体金渗滤法。进一步,所述的胶体金检测试剂盒硝酸纤维 素膜上的检测区(T)喷点有抗ZCCHC12和/或KCNGl单克隆抗体、质控区(C)喷点有免疫 球蛋白IgG。
[0011] 优选的抗ZCCHC12单克隆抗体选自下列抗体:NovusBiologicals公司提供的货 号为NBP1-83675 或NBP2-33943 的ZCCHC12 抗体,Abcam公司提供的Anti-ZCCHC12 抗体 (货号为油101563)。优选的抗KCNGl单克隆抗体选自下列抗体:NovusBiologicals公 司提供的货号为NBP1-81572的KCNGl抗体,Abcam公司提供的Anti-KCNGl抗体(货号为 油49063)。
[0012] 本发明的目的还在于提供一种分子标志物在制备早期盆腔脱垂治疗制剂中的应 用,所述分子标志物为ZCCHC12基因和/或KCNGl基因和/或ZCCHC12基因的表达产物和 /或KCNGl基因的表达产物。
[0013] 进一步,所述早期盆腔脱垂治疗制剂抑制分子标志物的转录和/或表达。
[0014] 本领域人员熟知抑制基因及其表达产物的表达通常可W采用下述方法中的一种 和/或几种:通过激活目的基因的抑制基因、激活目的基因的抑制基因表达的蛋白、采用 RNA干扰技术抑制目的基因表达、激活促进目的基因mRNA降解的microRNA、导入促进目 的基因编码蛋白降解的分子、抑制促进目的基因表达的因子及蛋白的表达。即通过激活 ZCCHC12基因和/或KCNGl基因的抑制基因、激活抑制ZCCHC12基因和/或KCNGl基因表达 的蛋白、导入抑制ZCCHC12基因和/或KCNGl基因表达的siRNA、激活促进ZCCHC12基因和 /或KCNGl基因mRNA降解的microRNA、导入促进ZCCHC12基因和/或KCNGl基因表达的蛋 白降解的分子、抑制促进ZCCHC12基因和/或KCNGl基因表达的因子及蛋白的表达。
[0015] 进一步,所述抑制ZCCHC12基因和/或KCNGl基因转录或表达的SiRNA序列选自 下列序列中的一种和/或几种:SEQIDNO. 1、沈QIDNO. 2、沈QIDNO. 3、沈QIDNO. 4、 沈Q ID NO. 5、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7、SEQ ID NO. 8、SEQ ID NO. 9、SEQ ID NO. 10、沈Q ID NO. 11、沈Q ID NO. 12。
[0016]RNA干扰(RNAi)是指外源性和内源性双链RNA在生物体内诱导同源祀基因的 mRNA特异性降解,导致转录后基因沉默的现象,是一种使用小的双链RNA高效、特异地阻断 体内某种特定基因的表达,促使HiRNA降解,使细胞表现出特定基因缺失表型的技术。SiRNA 设计完成后可W采用直接合成法或者构建SiRNA表达载体,制备好的SiRNA可W通过憐酸 巧共沉淀法、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和POlybrene法、显微注射或基因枪等机械法、阳离子 脂质体试剂法等途径转染细胞。
[0017] 进一步,所述抑制ZCCHC12基因转录或表达的SiRNA序列选自下列序列中的一种 和 / 或几种:SEQ ID NO. USEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 4、SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO.6。优选SiRNA序列为SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4。所述抑制KCNGl基因转录或表达的 SiRNA序列选自下列序列中的一种和/或几种:SEQ ID NO. 7、沈Q ID NO. 8、沈Q ID NO. 9、 沈Q ID NO. 10、沈Q ID NO. 11、沈Q ID NO. 12。优选SiRNA序列为沈Q ID NO. 7和沈Q ID NO. 8。
[0018] 本发明的目的在于提供一种盆腔脱垂抑制剂,所述盆腔脱垂抑制剂抑制ZCCHC12 基因和KCNGl基因的转录或表达,优选的,盆腔脱垂抑制剂中含有抑制ZCCHC12基因和 KCNGl基因的转录或表达的siRNA。
[0019] 本发明的目的在于提供一种盆腔脱垂诊断制剂,所述盆腔脱垂诊断制剂检测 ZCCHC12基因和KCNGl基因的转录或表达,优选的,盆腔脱垂诊断制剂采用巧光定量PCR试 剂盒、基因忍片、免疫方法检测。
[0020] 巧光定量PCR法是通过巧光染料或巧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标 记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可W对产物进行分析,计算待测样品模板 的初始浓度。巧光定量PCR的出现,极大地简化了定量检测的过程,而且真正实现了绝对定 量。多种检测系统的出现,使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率,反应快速、 重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。
[0021] 基因忍片又称为DNA微阵列值NAmicroarray),可分为S种主要类型:1)固定在 聚合物基片(尼龙膜,硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或CDNA片段,通常用同位素标记 的祀基因与其杂交,通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻
当前第1页1 2 3 4 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1