一种猪苓硒化多糖的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中医药加工技术领域，涉及一种砸化多糖的制备方法，具体地涉及一 种猪冬砸化多糖的制备方法。
【背景技术】
[000引猪冬，俗称"猪冬花"，在我国分布很广。猪冬菌核是我国传统的重要中药之一，性 平，味甘、淡，利水渗湿，用于小便不利、水肿、泄泻、带下等。化学成分含有类似巧冬多糖的 猪冬多糖、麦角酱醇、生物素等。近年研究表明，猪冬多糖是一种非特异性细胞免疫刺激剂， 能显著加强网状内皮系统吞瞻细胞的功能，是癌细胞的生长受到抑制；美国科学家做作了 大量研究，认为猪冬是一种抗艾滋病病毒的中药。据有关预测，猪冬在未来几年将会成为热 点药材之一。
[0003] 猪冬多糖是猪冬的主要活性成分之一，具有很高的营养、医疗、保健价值，随着人 民生活水平的提高和保健意识的增强，猪冬多糖产品开发和应用越来越多地受到人们的青 睐。
[0004] 砸是人体必需的微量元素，而猪冬多糖又具有显著的生物活性，从天然猪冬中提 取出的多糖含砸量很低砸，不能满足人们的需求，通过人工将砸与猪冬多糖结合，更易于机 体吸收和利用，使砸和多糖的生理和药理功能得到优化。
[0005] CN200910162003. 4公开了一种有机法制备砸化多糖的方法，该方法是W藤麻多 糖或沙嵩多糖为原料，利用亚砸酸和氯化亚讽合成的一种砸化试剂，制备砸化多糖的一种 方法。CN102276753B公开了一种猪冬砸多糖的制备方法，该方法利用HzSeOs、醋酸制成砸 化反应液，加入氯化顿为催化剂，制备砸化猪冬多糖。上述专利制备砸多糖的砸化剂使用量 较大，砸化反应时间较长，含砸量不高，制备的砸化猪冬多糖稳定性不高、生物学效价低。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种猪冬砸化多糖的制 备方法，该方法砸化剂使用量较小、砸化反应时间较短、砸化多糖得率较高、稳定性高、生物 学效价高。
[0007] 为了实现上述目的，本发明采用W下技术方案予W实现：
[0008] -种猪冬砸化多糖的制备方法，包括W下步骤：
[0009] (1)猪冬粗多糖制备
[0010] ①水提：选无杂质的干净猪冬菌核，经微波干燥，粉碎机粉碎后，过40~60目筛， 加入20~40倍量的蒸傭水中，揽拌均匀，超声处理5~lOmin，功率为600~700W，于抑 为中性、温度为90~10(TC的条件下，浸提2. 5~3. 5h，过滤分离，得浸提滤液；
[0011] ②浓缩醇析；将①的浸提滤液投入真空浓缩机中，浓缩为原体积的1/10~1/4,浓 缩液中加入无水己醇，使混合液中己醇浓度为70%~80%，静置8~12h，离必分离，沉析物 干燥，制得猪冬粗多糖，备用；
[0012] 口)猪冬粗多糖纯化
[0013] ①除杂：将(1)-②所得猪冬粗多糖加入6~10倍量的蒸傭水中，离必10~20min， 除去少量不溶物；收集清液，边揽拌边向其中滴加料液量1. 5%~3%的2%躁酸溶液，煮沸 10~15min，除蛋白质；加入料液量1. 5%~3%的糖用脱色活性炭，揽匀，脱色10~15min， 趁热过滤，得脱色液；
[0014] ②酶解过柱；在45C~55C的条件下，向脱色液中加入脱色液量1. 5%~3%的 木瓜蛋白酶，酶解30~45min，迅速升温至98°C灭酶，保温10~15min，冷却至室温，离必 5~lOmin，除去变性酶，得清液；取清液加入2~4倍量的20 %~30 %己醇热溶液中，通过 中性氧化铅纯化柱，检测多糖洗脱峰，收集洗脱液，加入无水己醇，使混合液中己醇浓度为 70 %~80 %，静置8~12h，离必分离，沉析物蒸发干燥，制得猪冬多糖纯品，备用；
[0015] 樹猪冬纯多糖砸化
[0016] ①试剂合成；利用亚砸酸和氯化亚讽合成砸含量为2~4%的含砸试剂氧氯化 砸；
[0017] ②砸化反应；定量称取口)-②的猪冬纯多糖若干克，加入脱水化巧3. 5~5. 5ml/ g，揽拌均匀，然后滴入氧氯化砸0. 8~1. 5ml/g，氯化顿0. 1~0. 3g/g，充分揽拌后加入质 量浓度3~4. 5 %的硝酸钢溶液0. 5~0. 8ml/g，在常温下，砸化反应8~lOh，再加入质量 浓度1~1. 5%的醋酸3~4. 5ml/g，揽拌4. 5~5.化，加入无水己醇，使混合液中己醇浓度 为70 %~80 %，静置8~12h，离必分离，得沉析物；
[0018] ⑨透析干燥：用蒸傭水溶解沉析物后，透析6~化；至透析液中无顿离子检出，再 用无水己醇醇析透析液，沉淀离必，真空冷冻，用四氯化碳干燥，得粉末状猪冬砸化多糖。
[0019] 所述步骤(1)-①中，一种优选技术方案是：干净猪冬粉碎成60目，加入30倍量的 蒸傭水中，揽拌均匀，超声处理8min，功率为650W，于抑为中性、温度为95C的条件下，浸提 化。
[0020] 所述步骤(1)-②中，一种优选技术方案是；原液浓缩为原体积的1/5,加入无水己 醇，使混合液中己醇浓度为75%，静置lOh。
[0021] 所述步骤口)-①中，一种优选技术方案是：猪冬粗多糖加入8倍量的蒸傭水中，离 必15min ;收集清液，边揽拌边向其中滴加料液量2%的2%躁酸溶液，煮沸12min ;加入料 液量2%的糖用脱色活性炭，揽匀，脱色12min。
[0022] 所述步骤口)-②中，一种优选技术方案是：在50°C的条件下，向脱色液中加入 2. 5%的木瓜蛋白酶，酶解40min，迅速升温至98°C灭酶，保温12min，冷却至室温，离必 8min;取清液加入3倍量的25%己醇热溶液中，通过中性氧化铅纯化柱，检测多糖洗脱峰， 收集洗脱液，加入无水己醇，使混合液中己醇浓度为75%，静置lOh。
[0023] 所述步骤口)-①中，一种优选技术方案是；合成砸含量为3 %的含砸试剂氧氯化 砸。
[0024] 所述步骤口)-②中，一种优选技术方案是：定量称取口)-②的猪冬纯多糖若干克， 加入脱水化巧4. 5ml/g，揽拌均匀，然后滴入氧氯化砸Iml/g，氯化顿0. 2g/g，充分揽拌后加 入质量浓度4%的硝酸钢溶液0. 6ml/g，在常温下，砸化反应化，再加入质量浓度1. 2%的醋 酸4ml/g，揽拌化，加入无水己醇，使混合液中己醇浓度为75%，静置lOh。
[00巧]所述步骤口)-⑨中，一种优选技术方案是；用蒸傭水溶解沉析物后透析化。
[0026] 所述步骤口)-②中，脱水化巧为砸化反应的起始物，氯化顿为砸化反应的催化剂， 硝酸钢溶液为猪冬砸化多糖的化学稳定剂。
[0027] 本发明的有益效果是：与现有技术相比，本发明从猪冬粗多糖制备到砸化多糖的 制备，操作快捷高效，产品纯度高，砸化剂使用量较少、砸化反应时间较短、砸化多糖得率较 高、稳定性高、生物学效价高。
【具体实施方式】
[0028] 结合实施例及相应检测结果进一步对本发明作阐述，不构成对本发明的限制。
[0029] 实施例1
[0030] 猪冬粗多糖制备；选无杂质的干净猪冬菌核，称取化g，经微波干燥，粉碎机粉碎 后，过40目筛，加入20L的蒸傭水中，揽拌均匀，超声处理5min，功率为600W，于抑为中性、 温度为9(TC的条件下，浸提2.化，过滤分离，将浸提滤液投入真空浓缩机中，浓缩为化，浓 缩液中加入4.化无水己醇，静置化，离必分离，沉析物干燥，即得猪冬粗多糖312. 4邑。
[0031] 猪冬粗多糖纯化：将所得猪冬粗多糖加入1.化的蒸傭水中，离必lOmin，收集清 液，边揽拌边向其中滴加2%躁酸溶液28. 5ml，煮沸lOmin，加入28. 5g的糖用脱色活性炭， 揽匀，脱色lOmin，趁热过滤，在45C的条件下，向脱色液中加入28. 5g的木瓜蛋白酶，酶解 30min,迅速升温至98°C灭酶，保温lOmin,冷却至室温，离必5min,取清液加入3.化的20% 己醇热溶液中，通过中性氧化铅纯化柱，检测多糖洗脱峰，收集洗脱液，加入无水己醇，使混 合液中己醇浓度为70 %，静置化，离必分离，沉析物蒸发干燥，即得猪冬纯多糖203. 7g。
[0032] 猪冬纯多糖砸化：将203. 7g猪冬纯多糖加入713ml脱水化巧中，揽拌均匀，然后滴 入砸含量2 %的氧氯化砸163ml，氯化顿20. 4g，充分揽拌后加入质量浓度3 %的硝酸钢溶液 101. 9ml，在常温下，砸化反应化，再加入质量浓度1 %的醋酸611. 1ml，揽拌4.化，加入3.化 无水己醇，使混合液中己醇浓度为70%，静置化，离必分离，得沉析物；用蒸傭水溶解沉析 物后，透析化；至透析液中无顿离子检出，再用无水己醇醇析透析液，沉淀离必，真空冷冻， 用四氯化碳干燥，得粉末状猪冬砸化多糖237.Ig。
[003引 实施例2
[0034] 猪冬粗多糖制备；选无杂质的干净猪冬菌核，称取化g，经微波干燥，粉碎机粉碎 后，过60目筛，加入30L的蒸傭水中，揽拌均匀，超声处理8min，功率为650W，于抑为