一株索氏平脐蠕孢及其用图
【技术领域】：
[0001] 本发明属于生物医药技术领域，具体设及一株药用植物广蕾香内生真菌索氏平厮 蠕抱度ipolarisso;rokiniana)A606及从该菌株的发酵液中制备的提取物在制备抗细菌药 物中的应用。
【背景技术】：
[0002] 目前在临床治疗中发现病原微生物越来越强，尤其是耐药性菌株，造成的感染越 来越严重，很多传统抗生素已基本丧失治疗功效，因此，寻找新型的抗菌药物是世界上新药 开发的重点领域。微生物资源丰富，种类繁多，各种微生物发酵产物一直是医药上的重要资 源。利用各种微生物的活性天然产物研制开发新药或保健品等具有十分重要的意义和发展 前景。
[0003] 植物内生真菌具有丰富的物种多样性和遗传多样性，迄今已从植物内生真菌中发 现了不少新的或稀有的真菌物种，已成为国内外的研究热点。研究发现，植内生真菌产生的 活性化合物远远超出其植物代谢产物的范围，能产生各种结构类型独特、具有潜在应用前 景的活性物质，已成为发现新的天然活性物质的重要资源。
【发明内容】
： W04] 本发明的第一个目的是提供一株内生真菌索氏平厮蠕抱度ipolaris sorokiniana)A606,其于2015年7月8日保藏于中国典型培养物保藏中屯、（CCTCC)，地址： 中国武汉市武汉大学，保藏编号为：CCTCCNO:M2015436。 阳0化]本发明的第二个目的是提供一种具有抗细菌作用的索氏平厮蠕抱度ipolaris so;rokiniana)A606提取物，其特征在于，W索氏平厮蠕抱度ipolarisso;rokiniana)A606 作为发酵菌株，液体发酵获得发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，取发酵液用乙酸乙醋萃 取，萃取液经浓缩后即得索氏平厮蠕抱度ipolarissorokiniana)A606发酵提取物。
[0006] 所述的液体发酵是将索氏平厮蠕抱度ipolarisso;rokiniana)A606接种到发酵 培养基中，于28°C、120r/min液体发酵培养，得到发酵培养物，所述的发酵培养基每升是 通过W下方法制备：用500mL蒸馈水煮200g马铃馨20min，过滤得汁，再加入葡萄糖20邑、 KH2P〇43g、MgS〇4〇. 75g、维生素BilOmg，用水补足至1L，抑自然，得到发酵培养基。
[0007] 利用本发明的索氏平厮蠕抱度ipolarisso;rokiniana)A606提取物进行抗菌实 验，通过实验发现，该提取物在250yg/disk含量下对金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌的抑 菌圈直径均为18mm。选择5、2. 5、1. 25、0. 625、0. 312、0. 156、0. 078mg/mL7个浓度下进行抗 菌最低浓度（MIC值）试验，确定索氏平厮蠕抱A606提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆 菌的MIC值分别为 0. 321mg/mL、0. 625mg/mL。
[000引 因此，本发明的第S个目的是索氏平厮蠕抱度ipolarisso;rokiniana)A606提取 物在制备抗细菌药物中的应用。
[0009] 一种抗细菌药物，包含上述索氏平厮蠕抱度ipolarissorokiniana)A606提取物 作为活性成分。
[0010] 本发明的第四个目的是提供索氏平厮蠕抱度ipolarisso;rokiniana)A606在制备 抗细菌药物中的应用。
[0011] 所述的抗细菌药物为抗金黄色葡萄球菌（Staphylococ州Saureus)或枯草芽抱杆 菌度acillussubtilis)的药物。
[0012] 本发明的索氏平厮蠕抱度ipolarisso;rokiniana)A606提取物具有明显的抗细菌 活性，表明该提取物具有很好的应用开发前景，因此本发明为研究与开发新的抗菌药物提 供了基础，为开发利用植物内生真菌来源的天然活性物质提供了科学依据。 阳〇1；3] 索氏平厮蠕抱度ipolarisso;rokiniana)A606于2015年7月8日保藏于中国典型 培养物保藏中屯、（CCTCC)，地址：中国武汉市武汉大学，保藏编号为：CCTCCNO:M2015436。
【附图说明】：
[0014] 图1为本发明的索氏平厮蠕抱度ipolarisso;rokiniana)A606菌株与相关菌株的 系统发育树，其中A606代表索氏平厮蠕抱度ipolarissorokiniana)A606。
【具体实施方式】：
[0015] W下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0016] 实施例1 :索氏平厮蠕抱度ipolarisso;rokiniana)A606的分离、纯化及鉴定
[0017] (1)菌株的分离、纯化：
[0018] 将采自广东省阳春市的药用植物广蕾香茎用自来水冲洗干净，置于滤纸上自然风 干。放入质量分数0. 1 %的升隶溶液中浸泡5~7min后用无菌水漂洗4次，再放入体积分 数75%的乙醇水溶液中浸泡3~5min后用无菌水漂洗3次。用剪刀剪掉接触药液的头尾 部分，将中间部位剪成约1cm长的小段。置于分离培养基（含20yg/mL硫酸卡那霉素和 20yg/mL氨节青霉素）中，28 °C恒溫箱培养3~7d后挑取边缘菌丝转接到新鲜分离培养基 上，继续纯化直至获得纯菌株，即得本发明的菌株A606。
[0019] 所述的分离培养基是通过W下方法获得：用500mL蒸馈水煮200g马铃馨20min， 过滤得汁，再加入葡萄糖20g、KH2P〇43g、M拆〇4〇. 75g、维生素BilOmg，琼脂20g，用水补足至 1L，pH自然，灭菌备用。
[0020] 似菌株的鉴定：
[0021] 将所述的菌株A606采用真菌基因组DNA提取试剂盒提取菌株的基因组DNA， 作为PCR扩增的模板。PCR扩增采用真菌rDNA内转录间隔区（rDNA口巧通用引物 口SU5' -TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'，正向）和口S4(5' -TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'，反向） 扩增分离菌株的rDNAITS区。PCR采用20yL反应体系，通过ExTaq灯aKa-Ra)进行。反 应条件：93°C预变性3min;93°C变性45s，55°C复性45s，72°C延伸1. 5min，共30个循环；最 后72°C延伸lOmin。PCR产物由深功I华大基因科技服务有限公司进行测序。获得的序列通过 BLAST程序在GenBank上进行相似性序列检索，下载相关序列，运用MEGA5软件通过邻接法 (Nei曲bor-化ining)，Bootstrap设置为1000次重复，构建系统发育树（图1)。菌株A606 ITS区的碱基序列如SEQIDNO. 1所示。将测序获得的序列信息进行BLAST,BLAST结果显 不，菌株A606与Bipolarisso;rokiniana(KF725816)的相似度为99. 6%。从构建的系统发 育树看，菌株A606与2条Bipolarissorokiniana序列聚为高度自展支持的一支，彼此间 遗传距离极小（图1)。因此，通过分子系统学分析确定该菌株为索氏平厮蠕抱度ipolaris sorokiniana),命名为索氏平厮蠕抱度ipolarissorokiniana)A606。
[0022] 该索氏平厮蠕抱度ipolarissorokiniana)A606于2015年7月8日保藏于中 国典型培养物保藏中屯、（CCTCC)，地址：中国武汉市武汉大学，保藏编号为：CCTCCN0:M 2015436。