一种黑豆多肽的制备工艺的制作方法
【专利说明】一种黑豆多肽的制备工艺
[0001]
技术领域
[0002]本发明属于多肽制备技术领域，具体涉及一种黑豆多肽的制备工艺。
【背景技术】
[0003]黑豆多肽是经过酶水解法或发酵方法所得的产物，与大豆多肽的获得方法相同。是由黑豆蛋白水解成低分子肽的混合物组成，分子量小于10000D的混合肽，由不同氨基酸排列而成。多肽溶液的溶质是肽链的长短不同，级别不同的小肽组成的。目前对于多肽的研究表明，具有降低血液粘稠度和缓解心血管疾病等多种保健作用。黑豆多肽溶液中游离氨基酸种类和植物蛋白水解液共同点类似，人体不可缺少的氨基酸不仅全部含有，而且含量很大。对于一些活性物质的研究报道，人们食入的蛋白质经蛋白酶酶解后，并不是完全以单个氨基酸为单位进入血液，多数是以低分子量的肽的方式进入血液循环。经科学分析，氨基酸的消化利用率低于小分子量的肽，它是氨基酸消化率的几倍，所以小分子的肽是各类体质虚弱者的最佳营养因子的补充品。
[0004]目前在中国黑豆产量大，黑豆中的蛋白质含量丰富，但是由于黑豆蛋白不易被人体消化和吸收。所以黑豆蛋白的利用率低，那么把黑豆蛋白酶解成黑豆多肽是很有实际意义的。如何使黑豆蛋白变成黑豆多肽，如何提高多肽的转化率，使黑豆多肽更易吸收，是黑豆蛋白转化为黑豆多肽面临的重要问题。
【发明内容】
[0005]为了解决上述问题，本发明提供一种黑豆多肽的制备工艺，首先采用水浸提法提取出黑豆蛋白，然后采用复合酶酶解法制备，将中性蛋白酶和碱性蛋白酶分次重复酶解，多肽转化率高。
[0006]为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下:
一种黑豆多肽的制备工艺，包括如下步骤:
1)黑豆蛋白的提取:将黑豆粉碎，按黑豆lg添加5~10mL的水的比例将黑豆粉末溶于水，揽摔，调节pH至8.5-9.5，加热至70~90°C，浸提30~60min，6000rpm~8000rpm条件下离心8~15min，收集上清液；
2)将步骤1)离心后的沉淀再次加水提取，调节pH至8.5-9.5，加热至70~90°C，浸提10~20min, 6000rpm~8000rpm 条件下离心 8~15min，收集上清液；
3)合并步骤1)和步骤2)的上清液，置于蒸发皿中，蒸发浓缩至上清液体积的1/5，得到黑?蛋白洛液；
4)碱性蛋白酶一次酶解:在步骤3)得到的黑豆蛋白溶液中加入碱性蛋白酶，调节pH至9.0，酶解温度为40~50°C，酶解时间为l~2h，碱性蛋白酶的加入量为lmL黑豆蛋白溶液加入100-300U ； 5)中性蛋白酶酶解:步骤4)碱性蛋白酶酶解结束后，调节pH至7.0，加入中性蛋白酶，酶解温度为55~65°C，酶解时间为30~50min，中性蛋白酶的加入量为lmL黑豆蛋白溶液加入500-800U ；
6)碱性蛋白酶二次酶解:步骤4)中性蛋白酶酶解结束后，调节pH至9.0，加入碱性蛋白酶，酶解温度为40~50°C，酶解时间为l~2h，碱性蛋白酶的加入量为lmL黑豆蛋白溶液加人 300~500U ；
7 )将步骤6 )碱性蛋白酶酶解结束后的溶液调节pH至4.3，静置5~8h，6000rpm~8000rpm条件下离心8~15min，收集上清液，调节pH至7.0，真空浓缩，冷冻干燥后得到黑豆多肽。
[0007]步骤1)中黑豆粉碎至200~400目。进一步优选为250~350目，更进一步优选为300目，在实验过程中发现，黑豆粉碎的越细，黑豆蛋白的提取率越高。
[0008]步骤1)中lg黑豆添加6~8mL的水。
[0009]步骤1)或步骤2)中溶液pH调节至9.0，加热至80°C。
[0010]步骤4)中碱性蛋白酶的加入量为lmL黑豆蛋白溶液加入200U。
[0011]步骤5 )中酶解温度为60 °C，酶解时间为40min。
[0012]步骤5)中中性蛋白酶的加入量为lmL黑豆蛋白溶液加入600U。
[0013]步骤6 )，酶解温度为45 °C，酶解时间为1.5h。
[0014]步骤6)中碱性蛋白酶的加入量为lmL黑豆蛋白溶液加入400U。
[0015]本发明所用的原料黑豆可以来源于不同产地。目前报道的酶解法通常是单一酶解，多肽转化率低，有文献中采用碱性蛋白酶和中性蛋白酶双酶分步酶解法制备黑豆多肽，其考察了两种酶水解的添加顺序，本发明的发明人在酶解制备过程中发现，采用在碱性蛋白酶两次酶解，中间增加一次中性蛋白酶的酶解，不仅酶用量少，酶解时间短，而且大大提高了黑豆多肽的转化率。
[0016]有益效果:本发明提供一种黑豆多肽的制备工艺，首先采用水浸提法提取出黑豆蛋白，与常规方法中直接对黑豆蛋白进行酶解相比，去除了黑豆中其他成分对酶活性的影响，并且提高了酶解处理液的蛋白含量，酶用量大幅减少，并且，采用在碱性蛋白酶两次酶解，中间增加一次中性蛋白酶的酶解，酶解时间短，而且大大提高了黑豆多肽的转化率。
【具体实施方式】
[0017]本实施例中黑豆多肽的测定及转化率的计算方法方法参见文献《黑豆多肽的制备方法研究》，王玉，2013。碱性蛋白酶购自于上海中信生物有限公司，中性蛋白酶购自于上海蓝季科技发展有限公司。
[0018]实施例1
一种黑豆多肽的制备工艺，包括如下步骤:
1)黑豆蛋白的提取:将黑豆粉碎至300目，按黑豆lg添加8mL的水的比例将黑豆粉末溶于水，搅拌，调节pH至9.0，加热至80°C，浸提45min，7000rpm条件下离心lOmin，收集上清液；
2)将步骤1)离心后的沉淀再次加水提取，调节pH至9.0，加热至80°C，浸提15min，7000rpm条件下离心lOmin，收集上清液；
3)合并步骤1)和步骤2)的上清液，置于蒸发皿中，蒸发浓缩至上清液体积的1/5，得到黑?蛋白洛液；
4)碱性蛋白酶一次酶解:在步骤3)得到的黑豆蛋白溶液中加入碱性蛋白酶，调节pH至9.0，酶解温度为45°C，酶解时间为1.5h，碱性蛋白酶的加入量为lmL黑豆蛋白溶液加入200U ；
5)中性蛋白酶酶解:步骤4)碱性蛋白酶酶解结束后，调节pH至7.0，加入中性蛋白酶，酶解温度为60°C，酶解时间为40min，中性蛋白酶的加入量为lmL黑豆蛋白溶液加入600U ;
6)碱性蛋白酶二次酶解:步骤4)中性蛋白酶酶解结束后，调节pH至9.0，加入碱性蛋白酶，酶解温度为45°C，酶解时间为1.5h，碱性蛋白酶的加入量为lmL黑豆蛋白溶液加入400U ；
7)将步骤6)碱性蛋白酶酶解结束后的溶液调节pH至4.3，静置6h，7000rpm条件下离心lOmin，收集上清液，调节pH至7.0，真空浓缩，冷冻干燥后得到黑豆多肽，多肽转化率为65.43%ο
[0019]实施例2
一种黑豆多肽的制备工艺，包括如下步骤:
1)黑豆蛋白的提取:将黑豆粉碎，按黑豆lg添加6mL的水的比例将黑豆粉末溶于水，搅拌，调节pH至9，加热至70°C，浸提60min，6000rpm条件下离心15min，收集上清液；
2)将步骤1)离心后的沉淀再次加水提取，调节pH至9，加热至70°C，浸提20min，6000rpm条件下离心15min，收集上清液；
3)合并步骤1)和步骤2)的上清液，置于蒸发皿中，蒸发浓缩至上清液体积的1/5，得到黑?蛋白洛液