用于诱导肥大细胞-特异性凋亡的肽及其用图
【技术领域】
[0001] 本专利申请于2013年05月13日提交韩国特许厅申请号为10-2013-0053779的 韩国专利申请的优先权，上述专利申请的全部内容在此引入本申请作为参照。
[0002] 本发明涉及用于诱导肥大细胞特-异性凋亡的肽及其用途。
【背景技术】
[0003] -般情况下，被称过敏的过敏反应对抗原诱发非正常的免疫反应。根据格-库二 氏（Gell&Coombs)分类法，上述过敏反应被分为以下四种，由免疫球蛋白E(IgE)介导的过 敏反应为I型、由抗体介导的过敏反应为II型、由免疫复合体介导的过敏反应为III型、由 抗原呈递细胞和T细胞间的相互作用介导的过敏反应为IV型。周围常见的过敏疾病大致 是由I型过敏反应诱发的疾病，由上述I型过敏反应诱发的疾病包括过敏性鼻炎、哮喘、过 敏性皮肤炎等。众所周知的过敏原（allergen;抗原）包括如坚果类、卵类的食品及花粉、房 尘螨或一部分医药品等。当流入这种过敏原时，过敏原与免疫球蛋白E相结合后附着于作 为肥大细胞的免疫球蛋白E受体的FceRI的α-亚基，并与β-亚基和γ-亚基形成复合 体，来实现受体的信号传输。通过上述过程诱导肥大细胞的脱颗粒来使作为诱发瘙痒症或 炎症反应的介导因子的组胺（histamine)、β-氨基己糖苷酶（beta-hexosaminidase)、前 列腺素（prostaglandin)、白细胞三稀（leukotriene)、白细胞介素（interleukin)_4、白细 胞介素-5、白细胞介素_6、肿瘤坏死因子（TNF)-a等的分泌活化。这种因子的作用也使B 细胞的免疫球蛋白E的生产活化来成为使过敏反应恶化的因素。实际上，在过敏患者的情 况下，具有血液免疫球蛋白E的数值较高的特征，从而对过敏原的流入容易引起过敏反应 (AllergyAsthmaImmunolRes. ,5(3):170-174(2013))〇
[0004] 根据观察到I型过敏反应的区域来分类疾病，在鼻腔的粘膜发生过敏的情况下， 呈现为过敏性鼻炎，在呼吸道粘膜或支气管发生过敏的情况下，呈现为哮喘，而在皮肤发生 的过敏反应为过敏性皮炎。
[0005] 根据2010年报告的韩国国民健康营养调查结果（韩国国民健康营养调查，韩国保 健福祉部），韩国国内一岁以上过敏性皮炎的发病率为6. 1 %，在2011年青少年健康状况网 上调查（青少年健康状况网上调查，韩国保健福祉部）中，13-18岁青少年的过敏性皮炎发 病率为23. 1%。通过通常的过敏原、免疫球蛋白E刺激开始发生病变，且因肥大细胞的脱颗 粒而分泌的组胺的刺激所诱发的瘙痒症的患者因挠患处而导致作为皮肤常在菌的金黄色 酿脓葡萄球菌（Staphylococcusaureus)、表皮葡萄球菌（S.epidermidis)等的形成2次 流入。这种外部抗原的流入导致在患处追加诱发炎症反应来使病情恶化（AllergyAsthma Proc. ,May-Jun；33(2012)) 〇
[0006] 作为过敏性皮炎的治疗剂，包括类固醇制剂、抗组胺剂及抗生剂等，上述类固醇制 剂通过免疫抑制效果来呈现消炎作用，上述抗组胺剂用于从肥大细胞防止组胺的游离。然 而，类固醇制剂存在如下缺点：在长时间使用类固醇制剂时，在涂抹类固醇制剂的部位长出 毛或皮肤变薄，并且也产生细菌感染的副作用，而在停止使用时，症状急剧恶化。抗组胺剂 的情况也是，在长时间使用抗组胺剂时，产生失眠、不安、食欲减退等副作用，而在长时间使 用抗生剂时，也产生抗生剂耐性等副作用。因此，处于需要开发可以更加有效且使副作用最 小化的治疗剂的趋势。
[0007] 体内蛋白因高的生物体亲和性而具有可使副作用最小化的优点。但是，在将蛋白 本身用于治疗剂的情况下，存在低稳定性和高生产成本的缺点。仅利用这种体内蛋白内的 特定有效部位的肽制剂存在与体内蛋白的功效相同并可改善稳定性和生产成本问题的优 点。因此，本研究人员进行了使用源于可抑制肥大细胞的活化的体内蛋白的肽的抗过敏效 果的研究。
[0008] 脑信号素3A(Semaphorin3A)为具有被称为信号素结构域（Semadomain)的富含 半胱氨酸结构域（cysteine-richdomain)的脑信号系列的蛋白。脑信号蛋白最先在神经系 统发育过程中公开为反抗性轴突诱导因子。属于分类3的脑信号作为分泌蛋白（secreted protein)，存在脑信号素3A至脑信号3F的六个种类，且形成神经丛蛋白A(PlexinA)受体 及神经纤毛（Neurophilin)受体和形成受体复合体来传输信号。如早期公开，脑信号素3A 诱导神经生长因子（NGF，nervegrowthfactor)-敏感性神经元（neuron)的收缩，或者从 活化的T细胞及树状细胞中表达来调节T细胞伸张或细胞因子的分泌。
[0009] 在本说明书全文中，参照了多篇论文及专利文献，并表示了其引用。引用的论文及 专利文献的所有公开内容作为参照插入于本说明书中，从而更加明确地说明本发明所属技 术领域的水平及本发明的内容。
【发明内容】
[0010] 要解决的问题
[0011] 本发明人员努力开发维持与脑信号素3A(Semaphorin3A)相同功能或类似功能， 且与天然的脑信号素3A蛋白相比，活性及稳定性优秀的物质。结果，在许多肽候选物质中 筛查生理活性（例如，肥大细胞-特异性凋亡诱导、肥大细胞活性抑制、FcεRI蛋白的信号 抑制效果等）优秀的源于脑信号素3Α-的肽，由此完成了本发明。
[0012] 因此，本发明的目的在于，提供由序列表中序列1组成的肽。
[0013] 本发明的再一目的在于，提供Th2_介导的免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合 物。
[0014] 本发明的另一目的在于，提供自身免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合物。
[0015] 本发明的还有一目的在于，提供肥大细胞-诱发的炎症性疾病的预防或治疗用药 剂学组合物。
[0016] 本发明的又一目的在于，提供肥大细胞-诱发的炎症性疾病治疗剂的筛查方法。
[0017] 本发明的又一目的在于，提供Th2_介导的免疫疾病额预防或治疗方法。
[0018] 本发明的又一目的在于，提供自身免疫疾病的预防或治疗方法。
[0019] 本发明的又一目的在于，提供肥大细胞-诱发的炎症性疾病的预防或治疗方法。
[0020] 通过详细的
【发明内容】
、发明要求保护范围及附图，本发明的其他目的及优点将变 得更加明确。
[0021] 解决问题的手段
[0022] 根据本发明的一实施方式，本发明提供由序列表中序列1的氨基酸序列组成的 肽。
[0023] 本发明人员努力开发维持与脑信号素3A相同功能或类似功能，且与天然的脑信 号素3A蛋白相比，活性及稳定性优秀的物质。结果，在许多肽候选物质中筛查生理活性（例 如，肥大细胞-特异性凋亡诱导、肥大细胞活性抑制、FcεRI蛋白的信号抑制效果等）优秀 的源于脑信号素3Α-的肽。
[0024] 脑信号（semaphorins)为包含分泌及膜-结合蛋白的巨大蛋白家族，上述分泌 及膜-结合蛋白的特征在于，由500个氨基酸残基组成。其中，脑信号素3A作为属于分 类3脑信号家族的分泌蛋白，不仅被誉为起到神经的轴突引导作用，而且还被誉为起到通 过神经纤毛（neuropilins)及神经丛蛋白（blexins，PLXNs)受体经由细胞-排斥指示 (cell-repellingcues)介导来调节包括细胞移动、形态发生（morphogenesis)及组织重 构（remodeling)的产生过程等多种细胞内功能。结构上，存在于脑信号内的脑信号结构域 (Semadomain)作为蛋白相互作用模块，对轴突诱导（axonguidance)过程期间行使着很重 要的功能，并且上述脑信号结构域也存在于干细胞成长因子受体、性蛋白及病毒蛋白。上述 脑信号结构域由保存性高的一系列的半胱氨酸残基实现特征化，并且通过上述半胱氨酸残 基之间（四个）的双硫键来使蛋白质在结构上得到稳定。
[0025] 另一方面，脑信号素3A基因的敲除（knockout)诱导非正常骨头及软骨的发达，且 在内软骨性骨化中报告出与脑信号素3A-相关的信号分子（signalingmolecules)(脑信 号素3A、神经纤毛-1及神经丛蛋白PLXNA1及PLXNA2)的表达，这意味着在骨骼的发达及神 经分布中的潜在性作用。
[0026] 本发明人员基于与人类脑信号素3A的功能相关的部位来合成呈现出上述特性的 多个源于脑信号素3A-的肽。更仔细地观察如下，随机部分合成脑信号素3A蛋白的多个部 位来第一次探索可以与受体蛋白相结合的部位之后，使预测部位的氨基酸序列最优化来选 择性地制备本发明的肽，并且在这些候选肽中筛查活性最为优秀的肽，由此制备本发明的 序列表中序列1的肽。
[0027] 根据本发明的一实例，本发明的序列表中序列1的肽源于人类脑信号素 3A(GenBankAccessionNumber，NP_006071 ;序列表中序列2)，并在表1中进行例不。
[0028] 本发明的肽不仅具有天然人类脑信号素3A的功能（例如，抗过敏活性），而且还 有效地表现出肥大细胞-特异性凋亡诱导及肥大细胞活性抑制（参照：图2a~图2c及图 3a~图3b)。并且，本发明的肽用于抑制形成FcεRI受体的复合体（参照：图4a至图4c)。
[0029] 根据本发明的一实例，本发明的肽诱导肥大细胞（mastcells)-特异性凋亡 (apoptosis)〇
[0030] 根据本发明的一实例，本发明的肽减少通过肥大细胞来分泌的组胺的量，并且抑 制细胞内氨基己糖苷酶（beta-hexosaminidase)的活性。
[0031] 根据本发明的一实例，本发明的肽抑制FcεRI信号传导。可通过抑制形成FcεRI 受体的复合体来实现上述FeeRI信号传导的抑制，可通过阻碍细胞外信号调节激酶 1/2