解淀粉芽孢杆菌hz179及其在制备微生物杀虫剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及微生物杀虫剂技术，设及一种解淀粉芽抱杆菌监179及其在制备微生 物杀虫剂中的应用。
【背景技术】
[0002] 晒虫是我国农业生产中最难防治且常见普发的几类主要害虫之一，在粮食作物和 经济作物中每年均大面积发生。特别是近年来，我国设施栽培发展迅速，已逐渐成为农业现 代化的重要载体。设施栽培中防虫网的应用有效减少了瓜絹惧、黄守瓜、斜纹夜蛾等害虫， 而晒虫等小型昆虫因设施的保护迅速成为了重要害虫，已严重影响了设施栽培瓜果蔬菜的 产量和商品性。目前对晒虫的控制主要靠化学农药。事实上，到目前为止，运类害虫几乎已 经对所有使用的化学药剂均产生了抗性，已成为抗药性严重和难W治理的害虫之一。调查 发现，我国河北等地的棉晒对抗晒威的抗性已达7887. 7倍；化虫嘟一直来是防治晒虫等刺 吸式害虫最有效的药剂之一，其抗性也已极为严重。另外，晒虫是各类病毒病害的主要传播 载体，鉴于至今国内外还几乎未有一种能真正解决问题的病毒病害防治药剂，目前病毒病 害的防治还是主要通过控制晒虫传播来进行间接预防。所W，当前的农业生产中不论是晒 虫本身的防治，还是病毒病害的预防，均迫切需要高效安全的生物杀虫剂上市。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供一种解淀粉芽抱杆菌 监179及其在制备微生物杀虫剂中的应用。
[0004] 为解决技术问题，本发明的解决方案是： 阳0化]提供一种解淀粉芽抱杆菌监179,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中屯、，保藏名称为解淀粉芽抱杆菌度acillusamyloliquefaciens)，保藏号为CGMCC No：11358〇
[0006] 本发明进一步提供了解淀粉芽抱杆菌监179在制备微生物杀虫剂中的应用。
[0007] 本发明还提供了一种微生物杀虫剂，该微生物杀虫剂的有效成分是：含有解淀粉 芽抱杆菌监179的水剂，其菌株浓度为108~10 "CFU/mL;或是含有解淀粉芽抱杆菌监179 的粉剂，其菌株浓度为1〇8~10i°CFU/g。
[0008] 本发明中，还包括下述载体中的至少一种：防腐剂、乳化剂或紫外保护剂。
[0009] 本发明进一步提供了所述微生物杀虫剂的制备方法，包括W下步骤：
[0010] (1)利用液体深层发酵方法在培养基中进行解淀粉芽抱杆菌监179的菌株发酵， 得到发酵液；发酵时控制溫度为36~39°C，抑值为7~8,发酵时间为25~40小时；
[0011] (2)将发酵液调制成水剂或粉剂，调制过程中添加防腐剂、乳化剂或紫外保护剂中 的至少一种作为载体；最终得到菌株浓度为1〇8~10i°CFU/mL的水剂产品，或是菌株浓度为 1〇8~10 "CFU/g的粉剂产品。
[0012] 本发明中，培养基中的营养源采用碳源和氮源；所述碳源是淀粉、糊精或葡萄糖； 所述氮源是蛋白腺、酵母膏、教皮、黄豆饼粉、牛肉膏或玉米浆。
[0013] 本发明中，在配置培养基时添加食盐、憐酸盐、钟盐或巧盐中的任意一种作为营养 成份。
[0014] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0015] 1.高效：本发明菌株对晒虫有明显的毒杀作用。田间药效实验表明，监179对瓜 晒具有良好的防治效果（90%W上）。
[0016] 2.安全：本发明杀虫剂的有效成分为解淀粉芽抱杆菌监179,对人畜无毒，与化学 农药相比具有安全的特点。
[0017] 3.价廉：本发明可利用微生物发酵技术制备而成。采用的发酵培养基主要成分均 为普通农副产品，发酵周期也比较短，因而生产成本比较低。
【附图说明】
[0018] 图1为本发明中液体深层发酵培养的具体工艺流程。
【具体实施方式】
[0019] 一、菌种来源：
[0020] 1、本发明所用的微生物菌种为解淀粉芽抱杆菌监179,保藏于中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中屯、，该中屯、的地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。保藏 名称为解淀粉芽抱杆菌度acillusamyloliquefaciens)，保藏号为CGMCCNo:11358，保藏 日期为2015年9月10日。
[0021] 2、菌种形态及生理生化特征：
[0022] 将解淀粉芽抱杆菌监179的菌株在普通琼脂培平板上于37°C培养24小时后，菌落 近圆形，干燥，中央凹陷，边缘不整齐有權皱，淡黄色，不透明。菌株活化后革兰氏染色、芽抱 染色，显微镜下观察，菌体呈杆状，中生芽抱，革兰氏染色阳性。本发明菌株的生理生化特征 与解淀粉芽抱杆菌标准菌株相比较见下表1。
[0023] 表1监179菌株的生理生化特征
[0024]
阳ο对注：阳性+、阴性-。
[0026] 3、16SrRNA基因序列分析：
[0027] 解淀粉芽抱杆菌监179的16SrRNA基因序列如沈QIDNO:1所示。 阳02引通过对本发明菌株监179的形态、生理生化及16SrRNA基因序列分析，发现监179 菌株与解淀粉芽抱杆菌度acillusamyloliquefaciens)的同源性为100%，两者处于系统 的同一分支。结合本发明菌株的形态及生理生化性状检测结果及其独特的毒杀晒虫特性， 可W判定本发明菌株监179为解淀粉芽抱杆菌度acillusamyloliquefaciens)新菌株。 阳029] 二、微生物杀虫剂的制备：
[0030] 1、培养基及培养工艺
[0031] 本发明中，微生物杀虫剂的制备方法包括W下步骤：
[0032] (1)利用液体深层发酵方法在培养基中进行解淀粉芽抱杆菌监179的菌株发酵， 得到发酵液；发酵时控制溫度为36~39°C，抑值为7~8,发酵时间为25~40小时；
[003引 似将发酵液调制成水剂或粉剂，调制过程中添加防腐剂、乳化剂或紫外保护剂中 的至少一种作为载体；最终得到菌株浓度为108~10i°CFU/mL水剂产品，或是菌株浓度为 108~10 "CFU/g的粉剂产品。
[0034] 液体深层发酵方法是本领域技术人员熟练掌握的技术，属于本领域公知技术，其 具体工艺流程见图1。培养基中的营养源采用碳源和氮源；碳源可选淀粉、糊精或葡萄糖； 氮源可选蛋白腺、酵母膏、教皮、黄豆饼粉、牛肉膏或玉米浆。在配置培养基时还可W添加食 盐、憐酸盐、钟盐或巧盐中的任意一种作为营养成份。
[0035] 本发明中，培养基配置、发酵液调制的方法属于本领域技术人员熟练掌握的技术 手段。培养基中碳源和氮源的比例、及食盐、憐酸盐、钟盐或巧盐添加量等数据，均可由使用 者根据实际情况进行调整，本发明对此并无特别要求。
[0036] 2、微生物杀虫剂的使用方法：
[0037] 取适量水剂或粉剂形式的监179微生物杀虫剂，用清水稀释100-200倍，在田间发 生晒虫的作物上喷洒，防治虫害。 阳03引实施例1冶抱量100亿/ml水剂产品的制备
[0039] 在7化发酵罐中，按教皮2. 5%、黄豆饼粉1. 5%、玉米淀粉1. 0%、酵母膏0. 4%、 化CIO. 5%、KH2PO4O. 3%、Μ拆〇4〇. 15%，配成 50L培养基，调节抑为 7. 0，12rc下 30min后 冷却至38°C，按5%比例接种生产菌，经38°C振荡培养36小时，即得含抱量55亿/mL的 发酵液。该发酵液经沉淀浓缩后稀释成含抱量为100亿/ml的悬液，再