一种与高血压易感性相关的基因变异位点及其检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地说，涉及人线粒体融合基因2(Mitofusin 2，Mfn2 gene) 5’端非编码区-2517与-2518位点之间的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism, SNP)及其与原发性高血压相关性的检测。本发明还涉及检测这个SNP位点的试剂盒。
【背景技术】
[0002]原发性高血压(Essential hypertens1n, EH)是一种常见而多发的、由环境与遗传因素共同致病的多因素、多基因疾，对人类健康造成了极大的影响。随着分子医学的发展，目前已经发现的高血压相关基因已经有150余种，但是的发病机制仍然不完全清楚，高血压的早期诊断和预防问题仍然未能完全解决。EH是遗传因子和环境共同作用的结果，血压的变化30%-60%归因于遗传。由于环境因素是可以控制和确认的，而对高血压遗传学因素却是固定不变的。因此，对可变因素的控制，如对高血压危险因素的预防，可以在一定程度上延缓和防止高血压的发病，但是对固定不变的遗传因素的认识不足却在一定程度上严重影响着对高血压发病、诊断和治疗。因此对高血压遗传学的研究十分必要(王佐广，温绍君，吴兆苏.高血压、易感基因与单核苷酸多态性[J].高血压杂志，2001，9:259-264)。
[0003]近二十余年来，有关高血压治疗的研究更多地集中在对血压的控制和对靶器官的保护，并已取得突飞猛进的发展。但是，这些手段并不能从根本上控制血压，目前对人类内源性抗高血压基因的研究还很少，因此，研究内源性抗高血压机制是今后高血压防治研究的主要方向之一，具有重要的研究价值和应用前景，如果通过调节内源性抗高血压机制治疗高血压病，将会促进我国生物医疗技术的发展，并为我国每年节省巨大的医疗费用。
[0004]目前所发现的高血压相关基因，归结起来可以概括为促高血压基因和抗高血压基因，Mfn2属于后者。Mfn2的前身是我国学者陈光慧等[Chen GH, Zhang CH, Zhu YQ, et al.Express1n of a novel gene related to hypertens1n[J].Natl Med J China, 1997,77: 823-828.]于1997年对培养的自发性高血压大鼠(SHR)和正常Wistar Kyoto (WKY)大鼠的血管平滑肌细胞进行差异显示，克隆出一个新基因一一增殖抑制基因(hyperplasiasuppressor gene，HSG)。它包含有4160bp的喊基对，共编码661个氨基酸(NM_014874,GeneBank Access U41803)。后经一系列体内、体外实验发现[Chen KH, Guo XM, DalongMa, et al.Dysregulat1n of HSG triggers vascular proliferative disorders[J].Nature Cell B1l, 2004, 6，872-883.]，HSG 可以明显地抑制 Ras-Raf 蛋白-丝裂素活化蛋白激酶基因表达，并且可以激活抗癌基因的表达，有效地阻遏细胞周期和抑制多种细胞的增殖，且这种抑制作用是通过细胞凋亡的方式实现的。因此，HSG基因是原发性高血压的候选基因之一，后经基因功能研究表明，HSG基因参与线粒体融合，因此正式命名为线粒体融合基因 2 (Mitofusin 2，Mfn2)。
[0005]由于Mfn2基因在原发性高血压患者和自发性高血压大鼠血管和白细胞中主要的特点是出现表达下降，这应该是其表达调控出现了异常，但是目前对Mfn2基因转录调控方面的研究较少。5’端非编码区是处于基因转录起始位点上游，是启动子和主要转录因子存在部位，5’端非编码区-2517与-2518位点之间(从起始密码子的“A”起向上第2517位与2518位之间的位置，在SEQ ID NO: 1中为第33与34位核苷酸之间)变异正好处于这个位置。我们在进行序列的生物信息学分析时发现该位点位于Mfn2基因5’端非编码区内，且处于相对保守的区域。另外，该变异位点是一些非常重要的转录调控因子Hb、SRY和BR-C Z等的潜在结合部位，从转录调控角度而言，具有非常重要的价值，因而可能具有非常重要的意义。
[0006]综上所述，为了最终实现根治原发性高血压，本领域迫切需要深入研究原发性高血压的发病机制，寻找原发性高血压易感基因，筛选出具有高风险的原发性高血压患者，开发检测原发性高血压易感基因的方法、试剂盒，以及相关的治疗药物等。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种检测高血压易感基因Mfn2多态性位点的方法及检测试剂盒。
[0008]本发明提供了一种可以通过高血压易感性基因的检测预测高血压发病风险的方法，即检测Mfn2基因5’端非编码区-2518位点的基因型。5’端非编码区-2517与-2518位点之间为ins AA变异的基因型的个体其高血压的发病风险远高于普通人群。
[0009]所述的5’端非编码区-2517与-2518位点，位于Mfn2的5’端非编码区中(Chromosome 1 - NC_00000L 11 区域的 11977663…11977664 位点之间)。其中，脱氧核糖核酸(DNA)序列编号:5’端非编码区-2517与-2518位点的位置基于SEQ ID NO:1 ;引物1基于SEQ ID NO:2 ;引物2基于SEQ ID NO:3 ;扩增产物基于SEQ ID NO:4。
[0010]具体而言，该方法包括步骤:(a)抽提样品的基因组DNA，扩增获得Mfn2基因5’端非编码区；(b)通过特异性的引物扩增获得Mfn2基因包含5’端非编码区-2517与-2518位点之间的区域，扩增产物为SEQ ID NO:4 ；(c)检测步骤(b)产物中单核苷酸多态性位点5’端非编码区-2517与-2518位点之间的区域的基因型。
[0011]所述的扩增Mfn2基因5’端非编码区的引物序列如SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3所示。
[0012]上述方法中涉及的测序、扩增、抽提基因组DNA等技术均可采用本领域的常规操作方法。
[0013]本发明提供了一种检测高血压易感基因的试剂盒，它含有可以包括特异性扩增Mfn2基因5’端非编码区中包含-2517与-2518位点之间的区域的引物。
[0014]在本发明的一个实施例中，与特异性扩增Mfn2基因5’端非编码区中包含_2517与-2518位点的区域的引物序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。
[0015]本发明经研究显示，首次证明了 Mfn2基因单核苷酸多态性位点5’端非编码区-2517与-2518位点(位于Mfn2 5’端非编码区中，Chromosome 1 - NC_000001.11区域的11977663…11977664位点之间AA/-)与高血压密切相关，而且发现了它的新功能:Mfn2基因单核苷酸多态性位点5’端非编码区-2517与-2518位点(Chromosome 1 - NC_000001.1l区域的11977663…11977664位点之间)基因型的改变将导致高血压的发病风险升高。其中关联研究结果显示，在Mfn2基因5’端非编码区-2517与-2518位点之间AA/-在病例和对照组中的分布存在显著性差异(P〈0.05)，即在原发性高血压患者中该基因型主要表现为