一种连翘脂素的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药制作领域，尤其涉及一种连翘脂素的制备方法。
【背景技术】
[0002]中药连翅为木犀■科(Oleaceae)连翅属植物连翅(Forsythia suspensa(Thunb.)vahl)的干燥果实。该属原植物现己知有十几种，分布于世界各地。中国历届版药典规定作为连翅可入药品种均为Forsythia suspensa (Thunb.) vahl。连翅主产于我国山西、河南、陕西、山东等地。药用分“青翘”、“老翘”两种。青翘在九月上旬，果皮呈青色尚未成熟时采下，置沸水中稍煮片刻或放蒸笼内蒸约半小时，取出晒干。老翘在十月上旬果实熟透变黄、果壳裂开时采收、晒干。筛去种子及杂质。连翘作为中药应用，已有两千年历史。
[0003]连翘作为中药应用，已有两千年历史，始见于《神农本草经》。在宋代以前，连翘药用记载较为混乱，金丝桃科、金丝桃属植物亦记做连翘。《尔雅》云:“连，异翘”;《神农本草经》上载:“主寒热，痈肿恶疮，结热，鼠瘘瘰疬。”；陶弘景曰:“连翘处处有，今用茎连花实也。”《唐本草》日:“连翘有两种，大翘、小翘。大翘叶狭长，如水苏，花黄可爱，生下湿地，著子似椿实之未开者，作房翘出众草。其小翘生岗原之上，叶花实皆似大翘而小细，山南人并用之。今京下惟用大翘子，不用茎花也。”，最先应用的是全草或果实，但据考证，应为草本金丝桃科植物。因为连翘是灌木，药用全草似乎难以讲得通，而金丝桃科金丝桃属植物多为草本，所以这两处的记载可能为金丝桃属植物。
[0004]宋代苏颂的《本草图经》所记:“连翅，今近京及河中、江宁府，泽、润、淄、衮、鼎、岳、利州，南康军皆有之。有大翘、小翘二种。(大翘)生下湿地或山岗上。叶青黄而狭长，如榆叶、水苏辈。茎赤色，高三、四尺许。花黄可爱，秋结实似莲，作房翘出众草，以此得名。根黄如篙根，八月采房阴干。其小翘生岗原之上，叶、花、实皆似大翘而细。南方生者，叶狭而小，茎短，才高一、二尺。花亦黄，实房黄黑，内含黑子如粟粒，亦名早连草，南人用花叶。考证其所附药图(鼎州连翘)及其性状描述，尤其是关于其花和种子的描述“花亦黄，实房黄黑，内含黑子如粟粒”也可以判断此鼎州连翘应该是金丝桃属植物。
[0005]自宋代开始往后连翘的记载逐渐清晰，而主流药用品种也逐渐成为今天所用的正品连翘一木犀科连翘属植物，在苏颂的《本草图经》中关于“泽州连翘”、“兖州连翘”作为连翘的新兴品种而逐渐应用，泽州位于今天的山西省境内，连翘至今以山西省为道地药材产区。另外宋代寇宗爽《本草衍义》:“连翘，亦不翘出众草，太山山谷间甚多，今止用其子，片片相比如翅，因以此得名尔，治心经客热最胜，尤益小儿。”的记述，应该指的是木犀科连翘CForsythia suspensa)。而明代刘文泰所著《本草品汇精要》中，则明确指出山西泽州连翘为道地药材，与现今药典记述和民间使用一致。在中医临床应用中，《备急千金要方》中的连翘五香汤及《外台密要》中的治痈疽肿毒方中的连翘，均属木犀科连翘；《证治准绳》中的连翘败毒散及连翘散，《温病条辨》中治温病初起的银翘散，《疡病大全》中的连翘解毒汤，《医宗金鉴》中的连翘消毒饮及清宫方中的连翘以及现代应用的中成药银翘解毒丸和银翘解毒片所用的连翘皆属木犀科植物连翘的果实。
[0006]Murakami首次从连翘果实中得到齐墩果酸以来，连翘及其同属植物中已有六十余种成分见诸报道、其主要含萜类、苯乙醇及其甙类、木脂素类、黄酮类和一些醇、酯、醚和酮等类化合物，其中木质素类化合物含量最为丰富，我国药典也规定连翘药材中连翘苷含量不少于0.15%,是其最主要的质量控制指标。
[0007]连翘属中的木脂素成分主要为木脂内酷和双环氧木脂素。1978年，Nishibe等从连翅中分得了 arctigenin, mataresinol, arctiin 和 matairesinoside。1985年，Tsukamoto 等从连翅果实中分得了 phillygenin, (+) -pinoresinol, phillyrin,(+)-pinoresnol-β-D-glucoside 和(+)-epinoresinol-4_0-glucoside。1997 年，刘冬雷等又从连翅果实中分得了(+)松脂素单甲基醚_β-D-葡萄糖营(pinoresinolmonomethylether-β -D-gluco-side)。近来生合成研究表明，连翅属中木脂素前体是松伯醇，已知连翅属中木脂素及其苷的3，3’位全是甲氧基取代，4，4’位可以是羟基，甲氧基取代或与糖成苷。
[0008]研究表明，在连翘提取物中，连翘脂素占有一定的比例，通常连翘脂素的比例可达10%-30%,连翘脂素是否具有药理活性尚不清楚，是否具有毒性也未见报导，因而分离连翘脂素的单体，制备高含量连翘脂素并建立其分析方法，具有重要意义。
【发明内容】
[0009]本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的问题，提供一种连翘脂素的制备方法，本发明方法操作工艺过程简单，生产周期短。运用本发明方法，可以充分提取连翘中的连翘脂素，提取效果显著；分离纯化处理获得高纯度连翘脂素单体，显著地降低了生产成本，适宜批量制备和工业化生产。
[0010]为实现本发明的目的，本发明一方面提供一种连翘脂素的制备的方法，包括如下顺序进行的步骤:
[0011]1)将连翘叶或连翘果实与提取溶剂混匀后，加热，进行回流提取，收集提取液，并回收溶剂，获得连翘提取物；
[0012]2)向连翘提取物中加入石油醚混匀后，进行超声处理或进行石油醚回流提取处理，收集石油醚提取液并回收石油醚，获得连翘石油醚提取物；
[0013]3)对连翘石油醚提取物采用甲醇或乙醇进行重结晶处理，获得连翘脂素。
[0014]其中，步骤1)中所述溶剂选择质量百分比浓度为50-100%的甲醇或质量百分比浓度为50-100 %的乙醇，优选为无水甲醇或无水乙醇。
[0015]特别是，步骤1)中所述溶剂与连翘叶或连翘果实的重量份配比为5-20:1，优选为8-10:1。
[0016]特别是，步骤1)中所述溶剂加热提取的次数为1-3次，优选为2-3次；所述溶剂加热提取的时间为2-3h/次。
[0017]其中，步骤2)中所述石油醚的体积与所述连翘提取物的重量之比为1-100:1，即如果连翘提取物重量为lg时，石油醚的体积为l-100ml ;如果连翘提取物重量为1kg时，石油醚的体积为1-100L，优选为10-50:1，进一步优选为10-20:1。
[0018]特别是，步骤2)中所述石油醚超声处理或回流提取处理的次数为2-3次，每次超声处理或回流提取处理的时间为0.5-4h。
[0019]本发明另一方面提供一种连翘脂素的制备方法，包括如下顺序进行的步骤:
[0020]1)将连翘叶或连翘果实与提取溶剂混匀后，加热，进行回流提取，收集提取液，并回收溶剂，获得连翘提取物；
[0021]2)向连翘提取物中加入酸溶液进行酸水解处理，然后向水解产物中加入碱性溶液，进行中和反应至pH为7.0，放置析出沉淀并过滤，沉淀水洗后进行干燥或减压回收溶剂，析出沉淀并过滤，沉淀水洗后进行干燥或减压回收溶剂至干，所得产物经水洗、干燥，获得连翘酸水解物；
[0022]3)对连翘酸水解物进行硅胶柱层析处理，分段收集洗脱液，洗脱液分别干燥后，得到连翘脂素。
[0023]其中，步骤1)中所述溶剂选择质量百分比浓度为50-100%的甲醇或质量百分比浓度为50-100%的乙醇。
[0024]特别是，步骤1)中所述溶剂与连翘叶或连翘果实的重量份配比为5-20:1，优选为8-10:1。
[0025]特别是，步骤1)中所述溶剂加热提取的次数为1-3次，优选为2-3次；所述溶剂加热提取的时间为2-3h/次。
[0026]其中，步骤2)中所述酸溶液选择稀硫酸或稀盐酸水溶液或醇溶液，优选为稀硫酸甲醇溶液、稀硫酸乙醇溶液、稀盐酸甲醇溶液、稀盐酸乙醇溶液。
[0027]特别是，所述酸溶液选择质量百分比浓度为1%?10%的稀硫酸或稀盐酸水溶液或醇溶液，优选为质量百分比浓度为1%?10%的稀硫酸甲醇溶液、稀硫酸乙醇溶液、稀盐酸甲醇溶液、稀盐酸乙醇溶液。
[0028]特别是，所述酸水解处理的温度为30?80°C ;酸水解处理时间为0.1?5h。
[0029]尤其是，所述酸溶液的体积与连翘提取物重量之比为2-7:1，优选为4-5:1。
[0030]其中，步骤2)中所述碱性溶液选择质量百分比浓度为0.01-100%的氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液。
[0031]其中，步骤3)中所述硅胶柱层析处理过程中的洗脱溶剂选择氯仿与甲醇的混合溶液。
[0032]特别是，所述洗脱溶剂氯仿与甲醇的体积之比为10:1?1:1，优选为5:1?1:1。
[0033]特别是，步骤3)中所述硅胶柱层析处理过程中的吸附剂硅胶与连翘酸水解物的重量之比为120-170:1，优选为130-160:1 ;所述硅胶为硅胶Η、硅胶G ;优选为薄层层析用硅胶Η。
[0034]尤其是，硅胶柱层析处理过程中硅胶柱的柱直径与柱内硅胶高之比(即径高比)为 1:5-10，优选为 1:6-8。
[0035]尤其是，硅胶柱层析处理过程中洗脱流速为100_300ml/h