一种用于神经保护的柠檬苦素化合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从干燥的枳壳中分离得到的一种柠檬苦素类 化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 枳壳为芸香科植物酸橙（Citrus aurantium L.)及其栽培变种的干燥未成熟果 实。7月果皮尚绿时采收，自中部横切为两半，晒干或低温干燥。味苦、辛、酸。性微寒。归 脾、胃经。具有理气宽中，行滞消胀之功效。用于胸胁气滞，胀满疼痛，食积不化，痰饮内停， 脏器下垂。枳壳是中药典型的理气药之一，广泛应用于中医临床。
[0003] 枳壳所含化学成分较为复杂，目前已知的有效成分主要有黄酮类、挥发油类、生物 碱类、香豆素类和一些微量元素等。枳壳中黄酮类成分主要有：橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、 柚皮芸香苷、异柚皮苷、陈皮素、柚皮素、川陈皮素、红橘素、5-〇_去甲基川陈皮素、去甲川陈 皮素、橙黄酮、4'，5, 7, 8-四甲氧基黄酮、4-0-甲基黄芩素、3-羟基-3'，4'，5, 6, 7, 8-六甲氧 基黄酮和5, 6-二羟基-7, 4'-二甲氧基黄酮等。挥发油主要有柠檬烯、芳樟醇、2-十一烷酮、 γ-松油烯。枳壳中所含的生物碱类活性成分主要有辛弗林、N-甲基酪胺、酪胺、大麦芽碱 等。枳壳中所含的香豆素类成分主要有葡萄内酯、伞形花内酯、异前胡素、马明丙酮化合物、 泼朗弗林、异米拉素、花椒毒酚、5-异戊烯氧基线呋喃香豆素、5-甲氧基线呋喃香豆素等。
[0004] 枳壳中的橙皮苷具有抗炎、抗氧化、抗癌和保肝等作用；柚皮苷具有抗炎镇痛、降 血糖等作用；川陈皮素具有抗炎，抗病毒，抗氧化等药理作用；川陈皮素具有很好的抗肿瘤 的作用；柚皮素具有抗抑郁、保肝、抗氧化、改善大鼠学习记忆障碍、抗血小板聚集的作用。 枳壳挥发油的主要成分是柠檬烯。在临床上，柠檬烯胶囊已上市，主要用于胆囊炎、胆管炎、 胆结石和胆道术后综合征等的治疗。在枳壳挥发油中，另一重要成分为芳樟醇，具有防腐、 抗菌、抗病毒和镇静等作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从干燥的枳壳中分离得到的一种柠檬苦素类化合物，含 其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I ):
[0008]
[0009] 所述的化合物（I )的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将干燥的枳壳粉碎，用 70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和 的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤（a)中 乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10 %乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个 柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤（b)中70%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、50:1、25:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 15:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2用十八 烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~ 12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I )。
[0010] 进一步地，步骤（a)中，用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为DlOl型大孔吸附树脂。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I )和药学上可接受的 载体。
[0013] 所述的化合物（I )在制备神经保护的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备神经保护的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I )，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物（I )结构式；
[0019] 图2为化合物（I )计算E⑶和实验E⑶图；
[0020] 图3为化合物（I )对培养不同时间海马神经元细胞活力的影响；
[0021] 图4为化合物（I )对Αβ 25-35诱导海马神经元细胞活力的影响；
[0022] 图5为化合物（I )对Αβ 25-35诱导的海马神经细胞凋亡的影响。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0024] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0025] 乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0026] 实施例1 :化合物（I )分离制备及结构确证
[0027] (a)干燥的枳壳（IOkg)粉碎，用75%乙醇热回流提取（30LX 3次），合并提取液， 浓缩至无醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水饱和的正丁醇 (6LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（381g)和正丁醇萃取物；(b)步 骤（a)中乙酸乙酯萃取物用DlOl大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用70% 乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物（131g) ;(c)步骤 (b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1 (8个柱体积）、50:1 (8 个柱体积）、25:1 (8个柱体积）、10:1 (10个柱体积）和1:1 (8个柱体积）的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4 (27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体 积比为15:1 (8个柱体积）、10:1 (8个柱体积）和5: U6个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (18g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用 体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓 缩得到纯的化合物（I ) (230mg)。
[0028] 结构确证：白色无定形粉末；HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z 605. 2014,结合核磁特 征可得分子式为C31H34O11,不饱和度为15。核磁共振氢谱数据δ H(ppm，DMS0-d6,400MHz): Η-3(4· 99, s)，Η-5(2· 88, t，J = 6· 7)，Η-6(2· 23, dd，J = 6· 7)，Η-6(2· 01，dd，J = 6· 7)， Η-11(6· 27，s)，Η-14(1· 73，dd，J = 12. 3,6· 9)，Η-15(2· 67，dd，J = 18. 4,6· 9)，Η-15(2· 98， dd，J = 18. 4,12. 3)，Η-17 (5· 06, s)，Η-18 (0· 95, s)，Η-19 (1· 19, s)，Η-21 (7· 26, br，s)， Η-22 (6· 18, br，s)，Η-23 (7· 33, t，J = L 7)，Η-28 (0· 81，s)，Η-29 (0· 73, s)，Η-30 (2· 61，s)， Η-2'（5· 89, dq，J = 15. 5, L 7)，Η-3'（7· 09, dq，J = 15. 5, 7· 0)，Η-4'（1· 92, dd，J = 7· 0， 1·7)，8-0Η(3·95, br，s)，7-0CH3(3.61，s);核磁共振碳谱数据 δε(ΡΡπι，DMS0-d6，100MHz): 209. 4 (C，1-C)，72. I (C，2-C)，84. 2 (CH，3-C)，38. 7 (C，4-C)，46. 9 (CH，5-C)，30. 6 (CH2,6-C)， 172. 7(C，7-C)，70. 3(C，8